發(fā)布時間：2020-10-11 05:18

　　 松江鱸(Trachider fasciatus)是一種降海洄游性魚類,為國家II級保護動物,具有較高的生態(tài)價值和經(jīng)濟價值。人工養(yǎng)殖是恢復其自然種群的有效手段,而養(yǎng)殖過程中必然需要解決其病害問題,比如致病真菌感染。幾丁質(zhì)酶(Chitinase)是一類水解幾丁質(zhì)的酶,廣泛存在于動物、植物、微生物體內(nèi),具有多種生理功能,尤其是在抗真菌方面發(fā)揮著重要的作用。為了深入了解松江鱸的幾丁質(zhì)酶,本實驗通過RACE技術(shù)克隆獲得了松江鱸一個幾丁質(zhì)酶基因的cDNA全長,命為Tf-Ch1,并對其進行了生物信息學分析;構(gòu)建其原核表達載體,獲得重組蛋白,并對重組幾丁質(zhì)酶的活性和功能進行檢測。Tf-Ch1的cDNA序列全長為1833 bp,開放閱讀框(ORF)為1362 bp,編碼453個氨基酸。Tf-Ch1包含一個信號肽和兩個結(jié)構(gòu)域,分別是N端的Glyco_18結(jié)構(gòu)域,C端的CBM_14結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果表明所有的魚類幾丁質(zhì)酶聚為一大支,其他脊椎動物的幾丁質(zhì)酶聚為一大支,Tf-Ch1與鱸形目的大黃魚(Larimichthys crocea)的幾丁質(zhì)酶關(guān)系最近。體外抑菌實驗表明,Tf-Ch1重組蛋白可以抑制黑曲霉(Aspergilluswiger)等真菌的生長。Tf-Ch1的糖結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以和幾丁質(zhì)等多糖結(jié)合,對酵母菌具有凝集作用,并且對于提高整個幾丁質(zhì)酶的酶活性具有重要意義。綜合以上結(jié)果,我們推測Tf-Ch1對于松江鱸防御真菌的侵害具有一定作用。
【學位單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：Q953
【部分圖文】：

松江鱸原產(chǎn)于中國、日本、韓國和菲律賓等國家，在中國用的歷史已有近兩千年，最早的文字記錄可追溯至漢代。后，由于環(huán)境污染、洄游路線受阻及過度捕撈等問題，松降，己被列為國家ＩＩ級保護動物。??，關(guān)于松江鱸的研究主要集中在養(yǎng)殖［１］、胚胎發(fā)育［２］、生態(tài)方面，對其功能基因的研宄較少。近年來，本實驗室致力研究，己獲得一些結(jié)果，得到了部分免疫相關(guān)基因的序列ｐｅ?ｌｅｃｔｉｎ）［４］、纖維蛋白原相關(guān)蛋白１和２（ｎｂｒｉｎｏｇｅｎ－ｒｅＲＥＰｌ／２）［５’６］、超氧化物歧化酶（Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ?ｄｉｓｍｕｔａｓｅ）［７］、白細酶?４（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－ｌ?ｒｅｃｅｐｔｏｒ?ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ?ｋｉｎａｓｅ－４，?ＩＲＡＫ－４）［８］、（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ?Ｓ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）［９］等，并且對這些基因進行了初步果為松江鱸其他功能基因的研宄提供了參考依據(jù)，并為松量的恢復提供了理論依據(jù)。??

２．?３．１Ｔｆ－Ｇｈ１基因的序列分析??通過ＲＡＣＥ技術(shù)及片段拼接，我們得到了?Ｔｆ－Ｃｈｌ的ｃＤＮＡ序列全長。中ｃＤＮＡ序列全長為１８３３?ｂｐ，開放閱讀框（ＯＲＦ）為１３６２?ｂｐ，編碼４５３個氨酸（圖２．３．２）。預(yù)測蛋白分子量為５２４１７．５９?Ｄａ，理論等電點（ｐｉ）為６．６４。ＳＭＡＲＴ結(jié)構(gòu)域預(yù)測表明，Ｔｆ－Ｃｈｌ包含一個信號肽和兩個結(jié)構(gòu)域，分別是Ｎ端的Ｇｌｙｃｏ＿ｌ?８（Ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ?ｈｙｄｒｏｌａｓｅ?ｆａｍｉｌｙ?１８）結(jié)構(gòu)域，Ｃ?端的?ＣＢＭ＿１４（?Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ－ｂｉｎｄｉｎｇｍｏｄｕｌｅｓ?１４）結(jié)構(gòu)域。其中信號肽是從第１位氨基酸殘基到第１９位氨基酸殘基，??Ｎ端結(jié)構(gòu)域是從第２０位氨基酸殘基到第３６２位氨基酸殘基，Ｃ端結(jié)構(gòu)域是從４０７位氨基酸到第４５３位氨基酸（見圖２．３．１）。??

ＸＭ＿００４５７４４８３）、亞洲尖吻鱸（Ｚａｔｏ?ＸＭ＿０１８６６７５４８）、大黃魚??｛Ｌａｒｉｍｉｃｈｔｈｙｓ?ｃｒｏｃｅａ，?ＸＭ＿０１０７４９４４４）、球狀瀨魚ｂｅｒｇｙｌｔａ，??ＸＭ—０２０６５４２９３）、眼斑雙鋸魚〇４哪／２少ｒ／仍ｏｃｅ／／仍丸ＸＭ—０２３２６４０１０）、多棘雀??觸ＸＭ＿〇２２２１４８３４）、高體獅ｄｗｗｅｒｉ／／，??ＸＭ＿０２２７４５０２０）、底鏘魚ＸＭ＿０２１３２１９４４）、非洲齒鯉??（Ｎｏｔｈｏｂｒａｎｃｈｉｕｓ?ｆｕｒｚｅｒｉ，?ＸＭ＿０１５９４１７１５）?＞?虎尾海馬（Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ?ｃｏｍｅｓ，??ＸＭ＿０１９８６７６１４）、青鏘魚？仍?ｔｏ／ｐａ，?ＸＭＪＫＭ０６８９１８）、三湖慈鯛??（尸ＸＭ＿００５７４９８６７）、伯氏樸?Ｈ０?魚?Ｚ？Ｗ７勿機??ＸＭ—００５９３９７６６）、紅樹錯魚ＸＭ＿０１７４３３４０９）、西方爪??（Ｘｅｎｏｐｕｓ?ｔｉＡ〇ｐｉｃａｌｉｓ，?ＮＭ＿００１１９９５６０）、中部鬃獅撕ｖ／Ｍ／ｃｅ／ｉｓ１，??ＸＭ＿０２０７９８０２７）的序列比對結(jié)果構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果表明，所有的魚類幾丁??質(zhì)酶聚為一大支，其他脊椎動物的幾丁質(zhì)酶聚為一大支，Ｔｆ－Ｃｈｌ與辦形目大黃??魚的幾丁質(zhì)酶關(guān)系最近（見圖２．３．４）。??１００?｜?Ｓｅｎｏｌａ?ｉａｆａｎｄｉ?ｄｏｒｓａｉｉｓＸＭ＿０２３４２４７２９??＇?＇
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

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本文編號：2836126