【目的】檢測(cè)原代慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)細(xì)胞中SENP2基因的表達(dá)情況,研究該基因的表達(dá)與CLL生物學(xué)特征的相關(guān)性。研究SENP2基因?qū)LL細(xì)胞的增殖能力、化療藥物敏感性、侵襲性、趨化功能以及細(xì)胞凋亡與周期的作用,及對(duì)CLL細(xì)胞NOTCH1、Wnt/β-catenin和NF-κB信號(hào)通路的影響,揭示SENP2基因在CLL發(fā)病中的作用及其機(jī)制�！痉椒ā�1.收集43例CLL外周血,分別采用q RT-PCR、Western Blot檢測(cè)SENP2基因轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平。2.分別構(gòu)建SENP2基因過(guò)表達(dá)或基因干擾的CLL細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株。采用CCK8、Transwell、Boyden小室及流式細(xì)胞術(shù)等方法檢測(cè)該基因?qū)LL細(xì)胞的增殖能力、藥物敏感性、侵襲轉(zhuǎn)移能力、趨化功能以及細(xì)胞凋亡與周期的影響。3.采用q RT-PCR、Western Blot分別檢測(cè)SENP2基因表達(dá)變化后NOTCH1、Wnt/β-catenin及NF-κB信號(hào)通路相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄及蛋白水平變化�！窘Y(jié)果】1.初治CLL的SENP2基因轉(zhuǎn)錄水平顯著高于健康對(duì)照組,但其蛋白表達(dá)水平低于健康對(duì)照者。單因素分析發(fā)現(xiàn),該基因轉(zhuǎn)錄水平與LDH表達(dá)水平高低存在正相關(guān)。2.SENP2基因過(guò)表達(dá):(1)可以抑制CLL細(xì)胞株MEC2細(xì)胞的增殖;(2)阿糖胞苷、地塞米松作用24h時(shí),增強(qiáng)藥物對(duì)MEC2細(xì)胞的增殖抑制作用;(3)降低MEC2細(xì)胞的侵襲性;(4)減弱MEC2細(xì)胞對(duì)趨化因子CXCL12的趨化性;(5)對(duì)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡無(wú)明顯影響。SENP2低表達(dá):(1)在培養(yǎng)24h時(shí)可以促進(jìn)MEC2細(xì)胞的增殖,但隨著時(shí)間的推移,對(duì)MEC2細(xì)胞的增殖轉(zhuǎn)變?yōu)橐种谱饔?(2)阿糖胞苷作用24h時(shí),減弱藥物對(duì)MEC2細(xì)胞的增殖抑制作用;(3)增強(qiáng)MEC2細(xì)胞的侵襲性;(4)增強(qiáng)MEC2細(xì)胞對(duì)趨化因子CXCL12的趨化性;(5)對(duì)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡無(wú)明顯影響。3.q RT-PCR發(fā)現(xiàn),SENP2基因轉(zhuǎn)錄水平與NOTCH1基因、Hes1基因、β-catenin、WWOX基因、NF-κB信號(hào)通路相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平無(wú)明顯相關(guān)性。Westwen Blot發(fā)現(xiàn),SENP2表達(dá)增加后,NOTCH1、C-myc、β-catenin及NF-κB信號(hào)通路相關(guān)分子P65、P50、IKKα、IKKβ的表達(dá)均發(fā)生了下調(diào);而SENP2表達(dá)減少后,NOTCH1、C-myc、β-catenin及NF-κB信號(hào)通路相關(guān)分子P65、P50、IKKα、IKKβ的表達(dá)均發(fā)生了上調(diào)�！窘Y(jié)論】1.初診CLL的SENP2基因轉(zhuǎn)錄水平明顯高于正常人。2.SENP2對(duì)CLL細(xì)胞的增殖、耐藥性和趨化能力有負(fù)向調(diào)節(jié)作用。3.SENP2在蛋白水平負(fù)向調(diào)節(jié)NOTCH1、Wnt/β-catenin及NF-κB信號(hào)通路,該調(diào)控作用可能與SENP2對(duì)蛋白質(zhì)分子的可逆性SUMO化修飾有關(guān)。
【學(xué)位單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R733.72
【部分圖文】：

a bc dPbabe-SENP2-48h（×100） Pbabe-SENP2-48h（×400）圖 5. ×100 及×400 倍數(shù)下，分別轉(zhuǎn)染了 Pbabe-hygro 空載質(zhì)粒（Null control，NC）與Pbabe-SENP2 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒的 293T 細(xì)胞。NC-48h（×100） NC-48h（×100）

a bc dPbabe-SENP2-48h（×100） Pbabe-SENP2-48h（×400）圖 5. ×100 及×400 倍數(shù)下，分別轉(zhuǎn)染了 Pbabe-hygro 空載質(zhì)粒（Null control，NC）與Pbabe-SENP2 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒的 293T 細(xì)胞。NC-48h（×100） NC-48h（×100）

a bc d圖12. Boyden小室檢測(cè)SENP基因?qū)EC2細(xì)胞在CXCL12作用下的趨化性的影響a 過(guò)表達(dá) NC 組，b 過(guò)表達(dá) Pbabe-SENP2 組，c 干擾 NC 組，d 干擾 sh-SENP2 組（×100）

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 張金燕;張桔順;許貞書;;Notch基因在慢性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞的表達(dá)和介導(dǎo)抗凋亡、耐藥機(jī)制的研究[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2015年04期

2 胡靜宇;陳燕;;SUMO化修飾在惡性血液病中的意義[J];臨床血液學(xué)雜志;2014年05期

3 黃禾菁;侯健;;SUMO化修飾與血液系統(tǒng)疾病[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2013年01期

4 李晶波;金茜;房紹紅;于波海;;血清乳酸脫氫酶在慢性淋巴細(xì)胞白血病中的研究[J];哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年04期

5 沈秋丹;徐衛(wèi);于慧;李麗;張?zhí)K江;李建勇;;血清乳酸脫氫酶及β_2-微球蛋白在慢性淋巴細(xì)胞白血病中的預(yù)后意義[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2007年06期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 張金燕;Notch基因在慢性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞的表達(dá)和介導(dǎo)抗凋亡、耐藥機(jī)制的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2823235