豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的一個(gè)主要病原,并與豬群中許多新發(fā)生的傳染病密切相關(guān)。PCV2引起豬的免疫抑制、混合感染和繼發(fā)感染已嚴(yán)重危害著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展,使其成為影響當(dāng)今養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要病原之一。所以,開展關(guān)于PCV2傳染和致病機(jī)理的研究迫在眉睫。本研究通過NCBI Blast發(fā)現(xiàn)PCV2 ORF3序列在不同毒株間高度保守,設(shè)計(jì)引物并引入酶切位點(diǎn),以分離自臨床病料組織的細(xì)胞培養(yǎng)適應(yīng)毒株基因組為模板用PCR擴(kuò)增出ORF3的序列。酶切回收后和經(jīng)過相同酶雙酶切的載體pGEX-6p-1連接構(gòu)建重組表達(dá)載體pGEX-6p-ORF3。對重組質(zhì)粒進(jìn)行了雙酶切和測序鑒定結(jié)果表明構(gòu)建的重組質(zhì)粒符合要求,基因序列沒有發(fā)生突變。在BL21細(xì)胞中成功表達(dá)了ORF3融合蛋白GST-ORF3,SDS-PAGE和Western blot檢測結(jié)果表明目的蛋白得到表達(dá)。以純化得到的蛋白作為包被抗原,建立了PCV2 ORF3蛋白間接ELISA檢測方法;用建立的間接ELISA方法對豬場的80份血清進(jìn)行PCV2抗體檢測,并與商品化的試劑盒進(jìn)行了對照,檢出抗體陽性率為60%,兩種方法符合率為93%。
【學(xué)位單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：S858.28

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本文編號(hào)：2819799