發(fā)布時間：2020-09-14 10:03

　　 [目的]測定野生型P53(V/V)和突變型P53(G/G)對兩種前列腺癌細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期調(diào)控及凋亡的影響,評估不同基因型P53在前列腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。并測定血液中骨髓來源抑制性細(xì)胞的含量以及血清中細(xì)胞因子IL-6、IL-8,IL-10水平探討其與前列腺癌發(fā)生、發(fā)展以及預(yù)后的相互關(guān)系。[方法]以pcDNA3.1空質(zhì)粒、野生型的pcDNA3.1-P53(V/V)和突變型的pcDNA3.1-P53(G/G)的質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染前列腺癌細(xì)胞,用Western Blot法檢測細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率。MTT法檢測不同轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的增殖情況。PI染色法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期,并用Annexin V和PI進(jìn)行熒光標(biāo)記結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)的方法檢測不同基因型P53對前列腺癌細(xì)胞凋亡情況的影響。通過對分離處理之后的外周血液進(jìn)行多色流式細(xì)胞檢測并結(jié)合FlowJo軟件對流式的數(shù)據(jù)進(jìn)行了分析,獲得了外周血骨髓來源抑制性細(xì)胞的含量。用ELISA的方法檢測血清中IL-6、IL-8、IL-10細(xì)胞因子的含量。[結(jié)果]1、P53基因多態(tài)性對前列腺癌細(xì)胞的增殖、細(xì)胞周期調(diào)控及凋亡的影響1)、MTT檢測結(jié)果:在轉(zhuǎn)染24小時后,與對照組相比,野生型pcDNA3.1-P53(V/V)組和突變型的pcDNA3.1-P53(G/G)組抑制細(xì)胞增殖狀況差異顯著(P0.05),野生型和突變型之間的差異不顯著。48小時后,野生型 pcDNA3.1-P53-(V/V)組,突變型的 pcDNA3.1-P53(G/G)組與對照組之間的差異也是顯著的(P0.05);并且突變型的細(xì)胞抑制細(xì)胞增殖的程度比野生型組細(xì)胞更強(qiáng)些。72小時后,這一差異變得更加的顯著(p0.05)。上述各組結(jié)果在PC3細(xì)胞和LNCaP細(xì)胞組之間無顯著差異。2)、細(xì)胞周期檢測結(jié)果顯示:與轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的細(xì)胞和對照組細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染突變型的pcDNA3.1-P53(G/G)組較轉(zhuǎn)染野生型的pcDNA3.1-P53(V/V)組,有更多比例的細(xì)胞處于G0/G1細(xì)胞周期(p0.05)。3)細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示:與對照組相比,野生型的pcDNA3.1-P53(V/V)和突變型的pcDNA3.1-P53(G/G)的轉(zhuǎn)染能夠?qū)е翽C3和LNCaP細(xì)胞凋亡的速率增加,而在72小時時,突變型的pcDNA3.1-P53(G/G)與野生型的pcDNA3.1-P53(V/V)相比更可能引起較明顯的細(xì)胞凋亡(p0.05)。2、髓源抑制細(xì)胞(MDSC)各亞型水平在前列腺癌患者的外周血中較對照組和BPH患者對照組均有顯著升高(P = 0.001)。且CD33+CD11b+HLA-DR-CD14-細(xì)胞是前列腺癌患者外周血中上升的最主要的一種髓源抑制細(xì)胞(MDSC)亞型,與前列癌臨床階段相關(guān)。3、與對照組和BPH患者相比,IL-6,IL--8和IL-10的含量在前列腺癌患者血清中均有顯著升高(P0.01)[結(jié)論]1、野生型P53(V/V)和突變型P53(G/G)的過表達(dá)均可抑制前列腺癌細(xì)胞系PC3和LNCaP細(xì)胞的增殖,均可促使前列腺癌細(xì)胞系PC3和LNCaP細(xì)胞中處于G0/G1期的細(xì)胞比例上調(diào),并促進(jìn)細(xì)胞的凋亡比例上升,其中突變型的該作用較野生型的作用更為明顯,在前列腺癌的發(fā)生過程中起一定的促進(jìn)作用,2、前列腺癌患者血循環(huán)中MDSCs細(xì)胞比例有顯著的增加,并且MDSCs比例隨癌癥階段的發(fā)展顯著地上升,MDSCs的含量與前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展、以及預(yù)后密切相關(guān)。3、IL-6,IL--8和IL-10可能是參與前列腺癌發(fā)生、發(fā)展的重要細(xì)胞因子
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.25
【部分圖文】：

諞徽攏校擔(dān)郴餉蚨嗵嚯遠(yuǎn)鄖傲邢侔┫赴鉬δ艿撓跋歟]3?胞表現(xiàn)出良好的生長狀況。兩組細(xì)胞均呈扁圓，但是ＰＣ３細(xì)胞表現(xiàn)出簇的形狀，逡逑而ＬＮＣａＰ細(xì)胞在細(xì)胞體積上大于ＰＣ３細(xì)胞（圖１邋）。逡逑ｉ逡逑？邋＾邋％邋？邋．逡逑：ａ逡逑圖１．培養(yǎng)７２小時時的細(xì)胞形態(tài)。Ａ．邋ＬＮＣａＰ細(xì)胞；Ｂ．ＰＣ３細(xì)胞。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１．邋Ｃｅｌｌｕｌａｒ邋ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ邋ａｔ邋７２邋ｈ邋ａｆｔｅｒ邋ｃｅｌｌ邋ｃｕｌｔｕｒｅ．邋Ａ．邋ＬＮＣａＰ邋ｃｅｌｌｓ；邋Ｂ．邋ＰＣ３邋ｃｅｌｌｓ．逡逑２．２細(xì)胞轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染效率的測定逡逑Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ結(jié)果表明轉(zhuǎn)染效率是令人滿意的。檢測還表明Ｐ５３的表達(dá)水逡逑平在對照組和空質(zhì)粒組中非常低，而在ＰＣ３－Ｐ５３邋（Ｇ／Ｇ）組，ＰＣ３－Ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）逡逑組和ＬＮＣａＰ－Ｐ５３邋（Ｇ／Ｇ）組和ＬＮＣａＰ－Ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）組中Ｐ５３基因的表達(dá)卻很高逡逑（圖邋２）。逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｐｃＤＫＡ邋５３邋（Ｇ／Ｇ）邋ｐ５３邋ＣＶＷ）邋Ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｐｃＤＫＡ邋Ｓ３邋（Ｇ／Ｇ）邋ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）逡逑ｐ５３邐咖邐—丨丨１邋ｍｍｍ邋ＷＭＰ逡逑ｐ－ａｃｔｉｎ逡逑｜邐邐邐邐邋ＬＮＣａＰ邋邐邐１邋Ｉ邐邋ＰＣ邋３邋邐１逡逑圖２．ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ方法分析了Ｐ５３在ＰＣ３對照組，ＰＣ３－ｐｃＤＮＡ組，ＰＣ３－Ｐ５３（Ｇ／Ｇ）組，逡逑ＰＣ３－Ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）組和邋ＬＮＣａＰ邋對照組

ｉ逡逑？邋＾邋％邋？邋．逡逑：ａ逡逑圖１．培養(yǎng)７２小時時的細(xì)胞形態(tài)。Ａ．邋ＬＮＣａＰ細(xì)胞；Ｂ．ＰＣ３細(xì)胞。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１．邋Ｃｅｌｌｕｌａｒ邋ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ邋ａｔ邋７２邋ｈ邋ａｆｔｅｒ邋ｃｅｌｌ邋ｃｕｌｔｕｒｅ．邋Ａ．邋ＬＮＣａＰ邋ｃｅｌｌｓ；邋Ｂ．邋ＰＣ３邋ｃｅｌｌｓ．逡逑２．２細(xì)胞轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染效率的測定逡逑Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ結(jié)果表明轉(zhuǎn)染效率是令人滿意的。檢測還表明Ｐ５３的表達(dá)水逡逑平在對照組和空質(zhì)粒組中非常低，而在ＰＣ３－Ｐ５３邋（Ｇ／Ｇ）組，ＰＣ３－Ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）逡逑組和ＬＮＣａＰ－Ｐ５３邋（Ｇ／Ｇ）組和ＬＮＣａＰ－Ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）組中Ｐ５３基因的表達(dá)卻很高逡逑（圖邋２）。逡逑Ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｐｃＤＫＡ邋５３邋（Ｇ／Ｇ）邋ｐ５３邋ＣＶＷ）邋Ｃｏｎｔｒｏｌ邋ｐｃＤＫＡ邋Ｓ３邋（Ｇ／Ｇ）邋ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）逡逑

與對照組相比，野生型的ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）和突變型的ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ５３逡逑（Ｇ／Ｇ）的轉(zhuǎn)染能夠?qū)е拢校茫澈停蹋危茫幔屑?xì)胞凋亡的速率增加，而在７２小時時，逡逑突變型的ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ５３邋（Ｇ／Ｇ）與野生型的ｐｃＤＮＡ３．１－Ｐ５３邋（Ｖ／Ｖ）相比更可逡逑能引起較明顯的細(xì)胞凋亡（圖３和４）。逡逑ｔｘ邋ＤＫＡ邐｜＊－＞３邋＾邋ｔ＇■邋Ｖ邋－＊邋Ｖ邋）逡逑邐邐邐邋；＾ｒ邐邋￣邋ｔ＇一邋？＇ｉ邋ｉｒ邋＇—邐Ｔ邋邋…一．ｒ－？．－逡逑＾邐；＇＞邋玲．ｉｒ邐、p哄澹麇澹麇屐跺澹у�？：？邋ｗ邋ｗ辶x稀礎(chǔ)澹閡痢敢唬Ву澹骸睿�？￣￣逦７w危伲澹危輳蟈濉義希恚哄嗚澹甑誨危懾危麇危輳哄危哄義蠆病鑠義希簦唬懼�；■∮z縉邋￣ｉ邐＜，？—逡逑Ｈｉ邋播：邋：＞ｆｔ：邐＇邐｜？邋Ｖ邋－邐�。�？邐■；？邐｜＞卞邋Ｗ邐}沐澹皺鍈翦�？铲辶x賢跡常傲邢侔┫赴蹋危茫幔性謐靜煌柿：螅玻春停罰殘∈筆鋇南赴蟯黽觳飩峁義希疲椋紓酰潁邋澹常澹粒穡錚穡簦錚螅椋簀澹錚駑澹穡潁錚螅簦幔簦邋澹悖幔睿悖澹蟈澹蹋危茫幔繡澹悖澹歟歟簀澹簦潁幔睿螅媯澹悖簦澹溴澹鰨椋簦楨澹洌椋媯媯澹潁澹睿翦澹穡歟幔螅恚椋洌簀澹幔翦澹玻村義希幔睿溴澹罰插澹瑁義

本文編號：2818041