【摘要】：獼猴桃細(xì)菌性潰瘍病是由丁香假單胞桿菌獼猴桃致病變種(Pseudomonas syringae pv.Actinidae,PSA)引起的毀滅性的細(xì)菌性病害,嚴(yán)重影響了獼猴桃的品質(zhì)和產(chǎn)量,給世界獼猴桃產(chǎn)業(yè)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。目前,獼猴桃潰瘍病還是以化學(xué)防治為主,然而大量化學(xué)農(nóng)藥的使用又會影響獼猴桃產(chǎn)品的品質(zhì)和安全。因此,培育抗病品種成為一種減輕獼猴桃潰瘍病危害的有效手段。而與傳統(tǒng)育種相比,轉(zhuǎn)基因抗病育種可將特定的抗病基因轉(zhuǎn)入獼猴桃,對其進(jìn)行遺傳改良,從而可大大縮短育種年限,加快抗病育種進(jìn)程。本研究以毛花獼猴桃葉片為試驗材料,從前期篩選到的可能具有抗?jié)儾」δ艿腜R2蛋白基因入手,對其進(jìn)行克隆,并對該基因進(jìn)行了亞細(xì)胞定位及抗?jié)儾」δ荑b定,旨在為獼猴桃轉(zhuǎn)基因抗病育種提供可靠的基因資源和分子依據(jù)。研究結(jié)果如下:(1)成功克隆了毛花獼猴桃中的PR2蛋白基因,該基因全長732bp,含有732bp的完整開放閱讀框,共編碼243個氨基酸。(2)構(gòu)建了融合蛋白表達(dá)載體35S:PR2-GFP,并通過凍融法成功將其轉(zhuǎn)化至根癌農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞GV3101。(3)成功將35S:GFP空載對照和35S:PR2-GFP融合蛋白表達(dá)載體瞬時轉(zhuǎn)化到“本氏”煙草中,并對瞬轉(zhuǎn)煙草葉片進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析及抗?jié)儾」δ荑b定。亞細(xì)胞定位結(jié)果表明PR2蛋白基因定位于細(xì)胞核及細(xì)胞質(zhì)。抗?jié)儾」δ荑b定結(jié)果表明轉(zhuǎn)入35S:GFP空載對照的煙草葉片接種PSA后出現(xiàn)過敏反應(yīng),而轉(zhuǎn)入35S:PR2-GFP融合蛋白表達(dá)載體的則無癥狀或癥狀較輕,證實了該基因具有一定的抗?jié)儾」δ堋?br> 【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S436.634.1
【圖文】：

花獼猴桃總 RNA 瓊脂糖凝膠電泳圖trophoresis of total RNA of Actinidia er對所提取的獼猴桃總 RNA 進(jìn)行同時用 Nano Drop2000 檢測其質(zhì)260/OD280=1.96 ，OD260/OD230=2 處測定蛋白、鹽及溶劑的含量。因的總 RNA 中的污染物較少。通D260/OD230大于或等于 1.8。這表。

花獼猴桃總 RNA 瓊脂rophoresis of total RNA 對所提取的獼猴桃同時用 Nano Drop20260/OD280=1.96 ，O 處測定蛋白、鹽及溶總 RNA 中的污染D260/OD230大于或等

R2 /pMD19T 重組質(zhì)粒的鑒定 PR2/pMD19T 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞 DH5α 中，挑取單菌行菌液 PCR 檢測，檢測結(jié)果如圖 3-3 所示。目的片段加上 pMD19T（s部分片段大小約為 900bp，將菌液 PCR 檢測結(jié)果正確的菌液送去測序。Kiwifruit Genome Datebase 中已登錄的紅陽的 PR2 蛋白基因序列進(jìn)行比對性達(dá)為 93.17%，這可能是同種基因在不同品種中存在差異所致，可用

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2801045