【摘要】：目的通過慢病毒介導(dǎo),使乳腺癌MCF-7細(xì)胞的ADAM17基因過表達(dá),觀察MCF-7細(xì)胞增殖能力的變化。方法常規(guī)培養(yǎng)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7,實(shí)驗(yàn)分為三組:空白對照組(常規(guī)培養(yǎng)的細(xì)胞)、轉(zhuǎn)染對照組(轉(zhuǎn)染慢病毒空白載體)、轉(zhuǎn)染組(轉(zhuǎn)染ADAM17過表達(dá)慢病毒)。轉(zhuǎn)染96h后,利用倒置熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染成功后,Real-time PCR法檢測各組細(xì)胞ADAM17mRNA的表達(dá),Western blot法檢測各組細(xì)胞ADAM17蛋白的表達(dá)。應(yīng)用MTT法檢測各組細(xì)胞的增殖情況,應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞的細(xì)胞周期,應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測各組細(xì)胞中Ki67蛋白的表達(dá)。結(jié)果1按照病毒轉(zhuǎn)染說明,MOI=100,成功將ADAM17過表達(dá)慢病毒(LV8N-ADAM17)轉(zhuǎn)染入MCF-7細(xì)胞中,且轉(zhuǎn)染效率約為100%。2 Real-time PCR法檢測各組MCF-7細(xì)胞ADAM17mRNA的表達(dá),空白對照組、轉(zhuǎn)染對照組、轉(zhuǎn)染組ADAM17 mRNA的相對表達(dá)量為1.03±0.14、1.18±0.10、1.81±0.06,轉(zhuǎn)染組的ADAM17 mRNA水平顯著高于空白對照組和轉(zhuǎn)染對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而轉(zhuǎn)染對照組與空白對照組之間相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3 Western blot法檢測各組MCF-7細(xì)胞ADAM17蛋白OD值,空白對照組、轉(zhuǎn)染對照組、轉(zhuǎn)染組ADAM17蛋白的OD值為0.518±0.066、0.544±0.059、0.866±0.083。轉(zhuǎn)染組的ADAM17蛋白表達(dá)明顯高于空白對照組和轉(zhuǎn)染對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。而轉(zhuǎn)染對照組與空白對照組之間相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4 MTT結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染組在轉(zhuǎn)染后24、48和72h,OD值分別是0.328±0.008、0.702±0.026、1.166±0.051。在24、48和72h這三個時間點(diǎn),轉(zhuǎn)染組與空白對照組、轉(zhuǎn)染對照組相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);而轉(zhuǎn)染對照組與空白對照組之間相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染組與空白對照組相比較,靜止期(G0/G1期)細(xì)胞所占比例顯著下降,而增殖期(S期)細(xì)胞的比例顯著增多,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),提示轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞增殖活躍。而轉(zhuǎn)染對照組與空白對照組之間相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。6免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測各組細(xì)胞中Ki67蛋白的表達(dá),空白對照組、轉(zhuǎn)染對照組、轉(zhuǎn)染組的染色指數(shù)評分分別為6.01±0.77、6.72±0.53、8.29±0.48。與空白對照組、轉(zhuǎn)染對照組相比,轉(zhuǎn)染組的染色指數(shù)顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。而陰性對照組與空白對照組之間相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論通過慢病毒介導(dǎo)的ADAM17基因過表達(dá),能使乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖力增強(qiáng)。
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9
【圖文】：

圖 2 ADAM17 擴(kuò)增曲線及熔解曲線Fig.2 The amplification curve and dissociation curve of ADAM17圖 3 β-actin 擴(kuò)增曲線及熔解曲線Fig.3 The amplification curve and dissociation curve of β-actin

圖 3 β-actin 擴(kuò)增曲線及熔解曲線Fig.3 The amplification curve and dissociation curve of β-actin注：*與空白對照組、轉(zhuǎn)染對照組比較 P<0.05。圖 4 ADAM17 mRNA 在各組中的表達(dá)（n=5, x—±s）

ADAM17mRNA在各組中的表達(dá)（n=5,x—±s）

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2794236