【摘要】：自身免疫性疾病(autoimmune disease,AID)是一種有較高發(fā)病率的病種,發(fā)病機(jī)制尚不明確[1]。G蛋白是三聚體蛋白質(zhì),包含α、β和γ這三個亞單位。根據(jù)α亞單位的不同可將G蛋白分為Gs、Gi/o、Gq/11和G12/13四個亞家族。Gαq是G蛋白家族中Gq/11亞家族成員之一,是跨膜信號傳導(dǎo)通路的重要組成部分。Gαq是由GNAQ基因編碼的蛋白功能單位[2],其基因缺陷小鼠表現(xiàn)出某些AID癥狀,而且在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等AID患者,其外周血單個核細(xì)胞中Gαq mRNA和蛋白表達(dá)水平較健康個體明顯降低,且與疾病活動度、相關(guān)的細(xì)胞因子和自身抗體的產(chǎn)生呈負(fù)相關(guān)[3,4]。這表明,Gαq的表達(dá)降低可能參與了 AID的發(fā)病。但調(diào)控Gαq表達(dá)降低的機(jī)制尚不清楚。真核生物基因表達(dá)調(diào)控中組蛋白乙酰化修飾占據(jù)著十分重要的地位,組蛋白乙�；ㄟ^控制染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)來調(diào)控基因表達(dá)。本課題以組蛋白去乙�；敢种苿┣乓志�(TSA)作為誘導(dǎo)乙酰化的因素,探索乙�；瘜�293T細(xì)胞中Gαq mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響,還將篩選鑒定調(diào)控GNAQ基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子,進(jìn)一步研究Gαq表達(dá)降低的機(jī)制。首先我們通過實(shí)時熒光定量PCR和Western blot方法檢測到在293T細(xì)胞中,TSA以濃度依賴方式上調(diào)Gαq表達(dá)。流式細(xì)胞術(shù)檢測了不同濃度TSA對293T細(xì)胞凋亡的影響,還用Western blot方法驗(yàn)證了 TSA處理293T細(xì)胞后組蛋白H3和H4的乙酰化水平增加,表明Gαq表達(dá)增加與組蛋白的乙�；嘘P(guān)。我們還通過軟件分析發(fā)現(xiàn)GNAQ啟動子區(qū)內(nèi)有SP1,EGR-1,MZF1,GATA-1等轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)。運(yùn)用實(shí)時熒光定量RCR和western blot方法篩選出轉(zhuǎn)錄因子GATA-1在TSA處理下呈濃度依賴增高,與Gαq的表達(dá)一致。免疫沉淀實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證了TSA處理下GATA-1蛋白表達(dá)增高。運(yùn)用CHIP及EMSA實(shí)驗(yàn)分別在體內(nèi)和體外條件下證實(shí)了GNAQ啟動子區(qū)(-569～-559)為GATA-1結(jié)合位點(diǎn),并且TSA可增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄因子GATA-1與該位點(diǎn)結(jié)合從而上調(diào)GNAQ轉(zhuǎn)錄表達(dá)。綜上所述,Gαq表達(dá)受到組蛋白乙�；娃D(zhuǎn)錄因子GATA-1的調(diào)控。本研究可為AID的治療提供一種新思路。
【學(xué)位授予單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R593.2
【圖文】：

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【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 封冰;陳龍邦;;微小RNA與表觀遺傳調(diào)控:腫瘤治療新策略[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2011年01期

2 ;Epigenetic modification regulates both expression of tumor-associated genes and cell cycle progressing in human colon cancer cell lines: Colo-320 and SW1116[J];Cell Research;2004年03期

本文編號：2791998