發(fā)布時間：2020-08-13 12:29

【摘要】：自身免疫性疾病(autoimmune disease,AID)是一種有較高發(fā)病率的病種,發(fā)病機制尚不明確[1]。G蛋白是三聚體蛋白質(zhì),包含α、β和γ這三個亞單位。根據(jù)α亞單位的不同可將G蛋白分為Gs、Gi/o、Gq/11和G12/13四個亞家族。Gαq是G蛋白家族中Gq/11亞家族成員之一,是跨膜信號傳導(dǎo)通路的重要組成部分。Gαq是由GNAQ基因編碼的蛋白功能單位[2],其基因缺陷小鼠表現(xiàn)出某些AID癥狀,而且在類風濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等AID患者,其外周血單個核細胞中Gαq mRNA和蛋白表達水平較健康個體明顯降低,且與疾病活動度、相關(guān)的細胞因子和自身抗體的產(chǎn)生呈負相關(guān)[3,4]。這表明,Gαq的表達降低可能參與了 AID的發(fā)病。但調(diào)控Gαq表達降低的機制尚不清楚。真核生物基因表達調(diào)控中組蛋白乙�；揎椪紦�(jù)著十分重要的地位,組蛋白乙�；ㄟ^控制染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)來調(diào)控基因表達。本課題以組蛋白去乙�；敢种苿┣乓志�(TSA)作為誘導(dǎo)乙酰化的因素,探索乙�；瘜�293T細胞中Gαq mRNA和蛋白表達水平的影響,還將篩選鑒定調(diào)控GNAQ基因表達的轉(zhuǎn)錄因子,進一步研究Gαq表達降低的機制。首先我們通過實時熒光定量PCR和Western blot方法檢測到在293T細胞中,TSA以濃度依賴方式上調(diào)Gαq表達。流式細胞術(shù)檢測了不同濃度TSA對293T細胞凋亡的影響,還用Western blot方法驗證了 TSA處理293T細胞后組蛋白H3和H4的乙酰化水平增加,表明Gαq表達增加與組蛋白的乙�；嘘P(guān)。我們還通過軟件分析發(fā)現(xiàn)GNAQ啟動子區(qū)內(nèi)有SP1,EGR-1,MZF1,GATA-1等轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點。運用實時熒光定量RCR和western blot方法篩選出轉(zhuǎn)錄因子GATA-1在TSA處理下呈濃度依賴增高,與Gαq的表達一致。免疫沉淀實驗進一步驗證了TSA處理下GATA-1蛋白表達增高。運用CHIP及EMSA實驗分別在體內(nèi)和體外條件下證實了GNAQ啟動子區(qū)(-569～-559)為GATA-1結(jié)合位點,并且TSA可增強轉(zhuǎn)錄因子GATA-1與該位點結(jié)合從而上調(diào)GNAQ轉(zhuǎn)錄表達。綜上所述,Gαq表達受到組蛋白乙�；娃D(zhuǎn)錄因子GATA-1的調(diào)控。本研究可為AID的治療提供一種新思路。
【學(xué)位授予單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R593.2
【圖文】：

邐＃逡逑ＴＳＡｎＭ逡逑圖３．２邋ＴＳＡ５０－２００ｎＭ處理２９３Ｔ細胞２４小時后Ｇａｑ邋ｍＲＮＡ水平明顯升高，并有逡逑濃度依賴的特征。逡逑Ｆｉｇ．３．２邋Ｔｈｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ邋ｏｆ邋Ｇａｑ邋ｍＲＮＡ邋ｉｎ邋２９３Ｔ邋ｃｅｌｌｓ邋ｗｅｒｅ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ邋ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ逡逑ｂｙ邋ＴＳＡ５０－２００ｎＭ邋ｉｎ邋ｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ邋ｍａｎｎｅｒｓ．邋Ｔｈｅ邋ｉｎｓｅｔｓ邋ｓｈｏｗ邋ｔｈｅ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｏｌ＇Ｇｃｘｑ逡逑２９逡逑

逑ｇａｐｄｈ邋＃椋椋椋椋rxlSI逡逑圖３．１常規(guī)ＰＣＲ檢測Ｇｃｔｑ在２９３Ｔ細胞中表達。逡逑Ｆｉｇ３．１邋ｌｉｔ邋ｈａｓ邋ｂｅｅｎ邋ｓｈｏｗｎ邋ｔｈａｔ邋ｔｈｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ邋ｏｆ邋Ｇａｑ邋ｉｎ邋２９３Ｔ邋ｃｅｌｌｓ邋ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ邋ｂｙ逡逑ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ邋ＲＴ－ＰＣＲ邋ａｎａｌｙｓｉｓ．逡逑３．２邐ＴＳＡ對２９３Ｔ細胞Ｇａｑ邋ｍＲＮＡ水平的影響逡逑ＴＳＡ是ＨＤＡＣｓ家族的廣泛的抑制劑，能抑制ＨＤＡＣｓ的去乙�；钚浴晒忮义隙浚校茫医Y(jié)果顯示，２９３Ｔ細胞經(jīng)５０ｎＭ、１００ｎＭ及２００ｎＭＴＳＡ作用２４ｈ，邋ＧａｑｍＲＮＡ逡逑水平呈上升趨勢，并呈現(xiàn)出明顯的濃度依賴的變化特征（Ｆｉｇ．３．２．）。逡逑工逡逑0邋★逡逑＾邐１－５－１邋Ｉ邐１逡逑Ｈｉｉｉｌ逡逑Ｉ邐？邐＃逡逑ＴＳＡｎＭ逡逑圖３．２邋ＴＳＡ５０－２００ｎＭ處理２９３Ｔ細胞２４小時后Ｇａｑ邋ｍＲＮＡ水平明顯升高，并有逡逑濃度依賴的特征。逡逑Ｆｉｇ．３．２邋Ｔｈｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ邋ｏｆ邋Ｇａｑ邋ｍＲＮＡ邋ｉｎ邋２９３Ｔ邋ｃｅｌｌｓ邋ｗｅｒｅ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ邋ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ逡逑ｂｙ邋ＴＳＡ５０－２００ｎＭ邋ｉｎ邋ｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ邋ｍａｎｎｅｒｓ．邋Ｔｈｅ邋ｉｎｓｅｔｓ邋ｓｈｏｗ邋ｔｈｅ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｏｌ＇Ｇｃｘｑ逡逑２９逡逑

逑ｇａｐｄｈ邋＃椋椋椋椋rxlSI逡逑圖３．１常規(guī)ＰＣＲ檢測Ｇｃｔｑ在２９３Ｔ細胞中表達。逡逑Ｆｉｇ３．１邋ｌｉｔ邋ｈａｓ邋ｂｅｅｎ邋ｓｈｏｗｎ邋ｔｈａｔ邋ｔｈｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ邋ｏｆ邋Ｇａｑ邋ｉｎ邋２９３Ｔ邋ｃｅｌｌｓ邋ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ邋ｂｙ逡逑ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ邋ＲＴ－ＰＣＲ邋ａｎａｌｙｓｉｓ．逡逑３．２邐ＴＳＡ對２９３Ｔ細胞Ｇａｑ邋ｍＲＮＡ水平的影響逡逑ＴＳＡ是ＨＤＡＣｓ家族的廣泛的抑制劑，能抑制ＨＤＡＣｓ的去乙�；钚浴晒忮义隙浚校茫医Y(jié)果顯示，２９３Ｔ細胞經(jīng)５０ｎＭ、１００ｎＭ及２００ｎＭＴＳＡ作用２４ｈ，邋ＧａｑｍＲＮＡ逡逑水平呈上升趨勢，并呈現(xiàn)出明顯的濃度依賴的變化特征（Ｆｉｇ．３．２．）。逡逑工逡逑0邋★逡逑＾邐１－５－１邋Ｉ邐１逡逑Ｈｉｉｉｌ逡逑Ｉ邐？邐＃逡逑ＴＳＡｎＭ逡逑圖３．２邋ＴＳＡ５０－２００ｎＭ處理２９３Ｔ細胞２４小時后Ｇａｑ邋ｍＲＮＡ水平明顯升高，并有逡逑濃度依賴的特征。逡逑Ｆｉｇ．３．２邋Ｔｈｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ邋ｏｆ邋Ｇａｑ邋ｍＲＮＡ邋ｉｎ邋２９３Ｔ邋ｃｅｌｌｓ邋ｗｅｒｅ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ邋ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ逡逑ｂｙ邋ＴＳＡ５０－２００ｎＭ邋ｉｎ邋ｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ邋ｍａｎｎｅｒｓ．邋Ｔｈｅ邋ｉｎｓｅｔｓ邋ｓｈｏｗ邋ｔｈｅ邋ｃｈａｎｇｅｓ邋ｏｌ＇Ｇｃｘｑ逡逑２９逡逑

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 封冰;陳龍邦;;微小RNA與表觀遺傳調(diào)控:腫瘤治療新策略[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2011年01期

2 ;Epigenetic modification regulates both expression of tumor-associated genes and cell cycle progressing in human colon cancer cell lines: Colo-320 and SW1116[J];Cell Research;2004年03期

本文編號：2791998