發(fā)布時(shí)間：2020-08-05 16:18

【摘要】：放線菌作為一類珍貴的物種資源,已經(jīng)在生物醫(yī)藥領(lǐng)域表現(xiàn)出了非凡的應(yīng)用前景,目前市場(chǎng)上已知的抗生素類化合物,由放線菌次級(jí)代謝產(chǎn)生的占60%。由于普通環(huán)境放線菌資源被不斷挖掘,所獲得的天然產(chǎn)物重復(fù)性急劇增加,天然產(chǎn)物學(xué)者將目標(biāo)轉(zhuǎn)向了極端環(huán)境放線菌資源。高鹽環(huán)境作為一種極端環(huán)境,其中的放線菌資源被不斷的挖掘,其價(jià)值也在不斷的被體現(xiàn)。鐵離子作為一種微生物生長(zhǎng)繁殖所必需的資源,在生態(tài)環(huán)境中占據(jù)著無(wú)可替代的地位。在環(huán)境中,所能螯合鐵離子的鐵載體類化合物被認(rèn)為是微生物爭(zhēng)奪資源的有力武器。同時(shí),此類化合物在生物醫(yī)藥和環(huán)境修復(fù)等領(lǐng)域表現(xiàn)出了巨大的應(yīng)用前景。在本研究的前期工作中發(fā)現(xiàn),與普通環(huán)境(50%左右)相比,嗜鹽放線菌具有產(chǎn)鐵載體能力的菌株數(shù)量多(90%),且鐵載體的螯合能力相對(duì)較高。這些實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)恰恰說(shuō)明了在高鹽環(huán)境中,嗜鹽放線菌的生態(tài)地位較為特殊,具有很好的研究空間。本研究首先進(jìn)行了嗜鹽放線菌分離方法的探究和改良,通過(guò)向分離培養(yǎng)基加入不同的培養(yǎng)基底物、不同于以往的氮元素以及加入鐵載體螯合劑來(lái)分別研究同一區(qū)域內(nèi),不同土樣的分菌效果,通過(guò)3種改良分離方法,共從新疆七角井鹽湖及其附近土樣中分離得到315株嗜鹽放線菌。此外,本課題組在前期的工作中,對(duì)大量的嗜鹽放線菌進(jìn)行了多種功能基因的研究,本實(shí)驗(yàn)從中挑選了134株具有多種功能基因的嗜鹽放線菌并入本次所分離到的菌株中。對(duì)這449株嗜鹽放線菌進(jìn)行了產(chǎn)鐵載體類化合物能力和其所產(chǎn)鐵載體類化合物螯合能力的檢測(cè)。通過(guò)前期的預(yù)實(shí)驗(yàn),綜合對(duì)比雙層平板法、發(fā)酵產(chǎn)物法,我們發(fā)現(xiàn)對(duì)于嗜鹽放線菌而言,倒置法檢測(cè)是否能產(chǎn)生鐵載體類化合物,是最便捷且最高效的篩選鐵載體活性菌株實(shí)驗(yàn)手段。通過(guò)對(duì)鐵載體活性檢測(cè)發(fā)現(xiàn),本次分得的315株嗜鹽放線菌中具有產(chǎn)鐵載體能力的菌株占總菌數(shù)的90%左右,而已完成多種類型功能基因高通量篩選的134株嗜鹽放線菌菌株則占97%�？紤]到完成多種類型功能基因高通量篩選的菌株更具有研究的價(jià)值和意義,因此在對(duì)陽(yáng)性菌株的復(fù)篩過(guò)程中,僅對(duì)具有多種類型功能基因的陽(yáng)性菌株進(jìn)行了復(fù)篩,復(fù)篩結(jié)果顯示,40株嗜鹽放線菌的代謝產(chǎn)物表現(xiàn)出較高的鐵離子螯合能力。其次,對(duì)于復(fù)篩結(jié)果中鐵載體活性表現(xiàn)良好的3株潛在嗜鹽放線菌新物種進(jìn)行了多相分類學(xué)鑒定。經(jīng)鑒定,其中菌株YIM 96934和YIM 96448為Phytoactinopolyspora屬新物種,YIM 96095為一潛在新科。最后,從40株復(fù)篩中表現(xiàn)較好的嗜鹽放線菌中,挑選了8株優(yōu)勢(shì)菌株,對(duì)其進(jìn)行了基因組測(cè)序并對(duì)基因組對(duì)比分析。
【學(xué)位授予單位】：云南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：Q93
【圖文】：

本研究流程圖

CAS法平板檢測(cè)嗜鹽放線菌代謝產(chǎn)物初篩實(shí)驗(yàn)Fig2.1DetectionofMetabolitesfromHalophilicActinomycetesbyCASMethod

CAS法平板檢測(cè)嗜鹽放線菌代謝產(chǎn)物復(fù)篩實(shí)驗(yàn)Fig2.2DetectionofmetaboliterescreeningofhalophilicActinomycetesbyCASmethod

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2781731