【摘要】：新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的以感染禽類為主的一種急性、熱性、敗血性和高度接觸性傳染病。接種疫苗是防制ND的重要措施之一。目前,基于NDV相關(guān)分子流行病學(xué)數(shù)據(jù)分析表明基因VII型已經(jīng)成為危害我國及其他多數(shù)國家養(yǎng)禽業(yè)的主要優(yōu)勢基因型,而市售疫苗為基因II型LaSota株,其與流行株之間被證明具有抗原差異,是造成免疫偏差的主要原因之一,這也提示我們使用與流行毒株基因型匹配的疫苗防控ND無疑具有很大的優(yōu)勢和潛力。病毒樣顆粒(virus-like particles,VLPs)是由病毒結(jié)構(gòu)蛋白模擬天然病毒粒子正確地折疊、組裝形成的不含病毒任何遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu),其作為疫苗使用時,具有很大的防控潛力。本研究立足桿狀病毒載體表達系統(tǒng),VLPs疫苗生產(chǎn)平臺,以基因VII型NDV NA-1株為研究對象,研制了利用NDV M蛋白同時展示F和HN蛋白的基因VII型新城疫病毒樣顆粒(ND VLPs),并對其免疫效果進行了研究。為制備基因VII型新城疫病毒樣顆粒,本研究利用桿狀病毒載體表達系統(tǒng),構(gòu)建了分別編碼新城疫病毒M、F和HN結(jié)構(gòu)基因的單順反子重組桿狀病毒,轉(zhuǎn)染Sf9細胞后,進行細胞病變觀察、PCR鑒定以及間接免疫熒光法檢測,結(jié)果表明成功構(gòu)建了三種重組桿狀病毒;共感染Sf9懸浮細胞后,收集培養(yǎng)上清進行超速離心濃縮,蔗糖密度梯度純化。SDS-PAGE,western blot檢測到三種目的蛋白正確表達且組裝,透射電鏡觀察到直徑大小在200 nm范圍,含有囊膜突起的圓形或橢圓型的NDV典型特征的病毒樣粒子,純化后血凝效價可達12log2。表明三種目的蛋白正確組裝形成具有較高血凝活性的ND VLPs,為進一步研究其免疫原性奠定了基礎(chǔ)。為進一步研究制備的ND VLPs的免疫效果,以含25μg蛋白劑量的ND VLPs或聯(lián)合佐劑免疫商品雞,進行血清HI抗體監(jiān)測,結(jié)果表明該VLPs免疫雞后,能夠誘發(fā)產(chǎn)生較高水平的HI抗體;進一步進行強毒株NA-1的攻毒試驗,結(jié)果表明ND VLPs及聯(lián)合佐劑免疫雞后能夠提供100%保護作用,與LaSota滅活油乳苗相比,能夠有效減少攻毒雞口咽、泄殖腔途徑的排毒時間、排毒量以及雞肺組織的載毒,從而減少病毒在健康雞群的傳播感染機會。綜合以上,本研究利用桿狀病毒載體表達系統(tǒng),成功構(gòu)建并表達了由NDV M、F和HN三種蛋白組裝形成的ND VLPs,免疫雞后能夠產(chǎn)生較高水平的HI抗體,具有完全的保護作用,且能夠有效阻止病毒向外界排出,表明研制的基因VII型新城疫病毒樣顆粒作為疫苗候選株具有很大的防控優(yōu)勢。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：S852.65

【參考文獻】

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本文編號：2778136