發(fā)布時間：2020-07-29 23:37

【摘要】：能量代謝是生命最基本的特征之一,與機(jī)體生長密切相關(guān),調(diào)控機(jī)體生長狀況。生長作為魚類養(yǎng)殖的重要經(jīng)濟(jì)性狀,同時也是評估養(yǎng)殖水平及經(jīng)濟(jì)效益的重要指標(biāo)。然而,隨著羅非魚養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大,近親繁殖、種質(zhì)退化現(xiàn)象愈加嚴(yán)重,快長等優(yōu)良性狀丟失的問題也日益暴露。選育和改良出生長性狀優(yōu)良的羅非魚新品種已然成為養(yǎng)殖業(yè)努力的方向。對于羅非魚新品種的產(chǎn)生,傳統(tǒng)育種方法存在選育周期長和優(yōu)良性狀遺傳穩(wěn)定性差等缺點。而借助DNA分子標(biāo)記技術(shù)與傳統(tǒng)育種方法結(jié)合,不僅可以縮短選育周期,增加選擇強(qiáng)度,有利于定向選育,還可使優(yōu)良性狀獲得穩(wěn)定性遺傳。本研究中,選取尼羅羅非魚PFK基因、LPL基因、MC4R基因、GHSR基因和GLUT4基因作為尼羅羅非魚能量代謝相關(guān)的候選基因,根據(jù)Gen Bank數(shù)據(jù)庫公布的這5個基因的DNA全序列,設(shè)計合成19對引物,采用PCR-SSCP技術(shù)對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性檢測并測序,得到SNP位點31處,將電泳圖譜上不同的帶型(基因型)分別用字母A～F表示,并采用SPSS21.0中單因素方差分析(one-wayANOVA)進(jìn)行多態(tài)性位點與羅非魚生長指標(biāo)(體重、體長、頭長、體寬和體高)的相關(guān)性分析。本研究結(jié)果如下:1.對尼羅羅非魚PFK基因設(shè)計的5對引物中,PFK-3、4、6、8 4對引物擴(kuò)增序列中共檢測到13個SNP位點,分別為1118A→G、1178T→C、1398T→C、1613T→C、1622C→T、1793A→G、1804G→A、1816T→C、1903A→G、2446T→C、2602A→C、2641A→G、3601T→G,經(jīng) χ2檢驗表明,有1個SNP位點處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)(P0.05),2個SNP位點處于Hardy-Weinberg不平衡狀態(tài)(P0.05),而10個SNP位點處于Hardy-Weinberg極不平衡狀態(tài)(P0.01)。2.對尼羅羅非魚LPL基因設(shè)計的3對引物中,LPL-2、4、5引物擴(kuò)增序列共檢測到9個SNP位點,分別為526G→T、707C→T、824A→G、841T→G、1562C→T、2067G→C、2098A→T、2333G→A、2335T→A,經(jīng)χ2檢驗表明,其中位點526G→T處于Hardy-Weinberg不平衡狀態(tài)(P0.05),707C→T、1562C→T、2335T→A 處于 Hardy-Weinberg 極不平衡狀態(tài)(P0.01)。3.對尼羅羅非魚MC4R基因設(shè)計的2對引物(MC4R-1、2)擴(kuò)增序列共檢測到 5 個 SNP 位點,分別為 291A→T、348T→C、366C→T、424T→C、810G→A,經(jīng)χ2檢驗表明,其中位點348T→C和366C→T處于Hardy-Weinberg極不平衡狀態(tài)(P0.01)。4.對尼羅羅非魚GHSR基因設(shè)計的3對引物中,GHSR-2、3引物擴(kuò)增序列檢測到2個SNP位點,分別為1076C→T和1238A→G,經(jīng)χ2檢驗表明,該位點1076C→T處于Hardy-Weinberg極不平衡狀態(tài)(P0.01)。5.對尼羅羅非魚GLUT4基因設(shè)計的6對引物中,GLUT4-4引物擴(kuò)增序列共檢測到2個SNP位點,分別為187A→G和1360T→C,經(jīng)χ2檢驗表明,其中187A→G處于Hardy-Weinberg極不平衡狀態(tài)(P0.01),這些位點遺傳變異性較大,可能得到更多選擇結(jié)果。6.對尼羅羅非魚PFK基因SNP位點分析發(fā)現(xiàn),1622bp處TT型雌性個體體長、頭長、體寬和體高4項生長指標(biāo)均高于CC型雌性個體(P0.05);2641bp處GG型雌性個體頭長和體寬高于AA型雌性個體(P0.05)。因此推斷,TT型和GG型可能是雌性個體生長的優(yōu)勢基因型,CC型和AA型可能處于劣勢。7.對尼羅羅非魚LPL基因SNP位點分析發(fā)現(xiàn),526bp處GG型雌性個體體重大于TG型雌性個體(P0.05)。707bp處CT型雌性個體5項生長指標(biāo)均高于CC型雌性個體(P0.01);TT型雌性個體體重大于CC型雌性個體(P0.05);CT型雌性個體體重大于TT型雌性個體(P0.05)。因此推斷,GG型、CT型和TT型可能是雌性個體生長的優(yōu)勢基因,且CT型的優(yōu)勢程度高于TT型。8.對尼羅羅非魚GLUT4基因SNP位點分析發(fā)現(xiàn),1360bp處TT型雌性個體體重、體長、體寬和體高4項生長指標(biāo)均高于CT型雌性個體(P0.05)。因此推斷,TT型可能是雌性個體生長的優(yōu)勢基因。9.對尼羅羅非魚MC4R和GHSR2個基因的SNP分析發(fā)現(xiàn),2個基因各基因型雌雄個體之間的所有生長性狀指標(biāo)均無顯著的相關(guān)性(P0.05)。
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S917.4
【圖文】：

廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文邐羅非魚能蚩代謝相關(guān)基因的多怎性及遺傳效應(yīng)研究逡逑圖２－１．尼羅羅非魚ＰＦＫ－１基因的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析逡逑Ｆｉｇ．邋２－１邋ＳＳＣＰ邋ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ＰＣＲ邋ｏｆ邋ｐｒｉｅｒ邋ＰＦＫ－１逡逑對ＰＦＫ－３基因進(jìn)行ＰＣＲ特異性擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳檢測發(fā)現(xiàn)，片逡逑段長度與預(yù)期大小相同，且單條帶紋清晰明亮，無特異性擴(kuò)增。ＰＦＫ－３基因擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)逡逑行ＳＳＣＰ電泳檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)６種基因型（圖２－２），分別定義為Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ，逡逑數(shù)量分別為邋１、１、１２４、４９、２邋和邋３，頻率分別為邋０．００５６、０．００５６、０．６８８９、０．２７２２、０．０１１１逡逑和０．０１６７。對每種基因型挑選出多個個體經(jīng)過測序分析發(fā)現(xiàn)３個突變產(chǎn)生。其中于１００逡逑ｂｐ處有一個突變（Ａ／Ｇ）產(chǎn)生（圖２－３），邋Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ型個體為ＡＡ基因型，Ｄ型為逡逑Ａ／Ｇ基因型，ＧＧ基因型不存在。群體遺傳學(xué)分析（表２－３）發(fā)現(xiàn)，尼羅羅非魚群體中主逡逑要的等位基因是Ａ，頻率為０．８６３９，此突變位點多態(tài)信息含量為０．２０７５，處于低度多態(tài)逡逑性。ｘ２檢驗結(jié)果表明

廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文邐羅非魚能蚩代謝相關(guān)基因的多怎性及遺傳效應(yīng)研究逡逑圖２－１．尼羅羅非魚ＰＦＫ－１基因的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析逡逑Ｆｉｇ．邋２－１邋ＳＳＣＰ邋ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ＰＣＲ邋ｏｆ邋ｐｒｉｅｒ邋ＰＦＫ－１逡逑對ＰＦＫ－３基因進(jìn)行ＰＣＲ特異性擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳檢測發(fā)現(xiàn)，片逡逑段長度與預(yù)期大小相同，且單條帶紋清晰明亮，無特異性擴(kuò)增。ＰＦＫ－３基因擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)逡逑行ＳＳＣＰ電泳檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)６種基因型（圖２－２），分別定義為Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ，逡逑數(shù)量分別為邋１、１、１２４、４９、２邋和邋３，頻率分別為邋０．００５６、０．００５６、０．６８８９、０．２７２２、０．０１１１逡逑和０．０１６７。對每種基因型挑選出多個個體經(jīng)過測序分析發(fā)現(xiàn)３個突變產(chǎn)生。其中于１００逡逑ｂｐ處有一個突變（Ａ／Ｇ）產(chǎn)生（圖２－３），邋Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ型個體為ＡＡ基因型，Ｄ型為逡逑Ａ／Ｇ基因型，ＧＧ基因型不存在。群體遺傳學(xué)分析（表２－３）發(fā)現(xiàn)，尼羅羅非魚群體中主逡逑要的等位基因是Ａ，頻率為０．８６３９，此突變位點多態(tài)信息含量為０．２０７５，處于低度多態(tài)逡逑性。ｘ２檢驗結(jié)果表明

ＣＴ基因型邐ＴＴ基因型逡逑圖２＊４尼羅羅非魚ＰＦＫ－３引物擴(kuò)增產(chǎn)物１６０位點處基因型測序分析逡逑Ｆｉｇ．邋２－４邋Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ邋ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｏｆ邋ｇｃｎｏｔｊ＾ｐｅ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋１６０邋ｓｉｔｅ邋ｏｆ邋ＰＣＲ邋ｏｆ邋ｐｒｉｍｅｒ邋ＰＦＫ－３逡逑其中于１６０邋ｂｐ處有一個突變（Ｔ／Ｃ）產(chǎn)生（圖２－４），其中Ｄ型個體為ＴＣ基因型，逡逑Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｆ型個體為ＴＴ型基因型，ＣＣ基因型不存在。群體遺傳學(xué)分析（表２－４）逡逑發(fā)現(xiàn)，尼羅羅非魚群體中主要的等位基因是Ａ，頻率為０．８６３９，此突變位點多態(tài)信息含逡逑量ＰＩＣ為０．２０７５，處于低度多態(tài)（／７Ｃ＜０．２５）。ｘ２檢驗結(jié)果表明，此位點處于Ｈａｒｄｙ－逡逑Ｗｅｉｎｂｅｒｇ邋不平衡狀態(tài)（Ｐ＜０．０５）。逡逑表２＊４群體遺傳學(xué)分析逡逑Ｔａｂｌｅ邋２＞４邋Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ邋ｇｅｎｅｔｉｃｓ邋ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｏｆ邋Ｎｉｌｅ邋ｔｉｌａｐｉａ逡逑基因型個數(shù)基因型頻等位等位頻率等位頻率基因頻率９５％雜合多態(tài)信卡方分逡逑率邋基因邐方差邐置信區(qū)間邐頻率息含量析逡逑Ｇｅｎｏｔｙｐｅ邋Ｎｏ．邋Ｇｅｎｏｔｙｐｅ邋Ａｌｌｅｌｅ邋Ａｌｌｅｌｅ邐ｖａｒｉａｎｃｅ邋ｏｆ邋９５％邋ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅ邋Ｈ邋ＰＩＣ邋ｘ２逡逑ｆｒｅｑ．邐ｆｒｅｑ．邐ｇｅｎｅ邋ｆｒｅｑ．邐ｌｉｍｉｔｓ逡逑ＴＴ邐１３１邐０．７２７８邋Ａ邐０．８６３９邐０．００００邐［０．８３１４，０．８９６４］逡逑ＴＣ邋４９邐０．２７２２邐０．２３５２邋０．２０７５邐４．４６８３逡逑ＣＣ邐０邐０．００００邋Ｇ邐０．１３６１邐０．０００３邐［０．１０３６

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本文編號：2774658