【摘要】：乙烷基亞硝基脲(ENU)是目前公認(rèn)的最有效的小鼠誘變劑之一。利用ENU可以在短期內(nèi)獲得大量突變小鼠從而建立人類疾病的小鼠模型進(jìn)而用于相關(guān)疾病發(fā)生機(jī)制的研究。本文在ENU誘變獲得一例瞳孔散大小鼠Dp2(Dilated pupil mutation 2)模型基礎(chǔ)上,成功定位與鑒定引起該表型的突變基因并對(duì)該表型發(fā)生原因進(jìn)行研究分析�，F(xiàn)匯報(bào)如下:1 ENU誘變獲得Dp2瞳孔散大小鼠模型通過(guò)注射ENU誘導(dǎo)小鼠突變手段,獲一例大瞳孔雜合子小鼠Dp2,當(dāng)用光照射小鼠眼球時(shí)瞳孔無(wú)明顯縮小。本文以此大瞳孔小鼠為研究對(duì)象,將該小鼠與野生型B6小鼠配種,觀察并記錄770只后代,其中359只小鼠具有大瞳孔表型,且該表型在小鼠4周齡(4W)左右恢復(fù)。組織學(xué)分析Dp2小鼠眼球發(fā)現(xiàn),小鼠虹膜未見(jiàn)明顯缺損。毛果蕓香堿不能使該表型小鼠瞳孔縮小。以上結(jié)果顯示:Dp2小鼠大瞳孔表型是由瞳孔括約肌收縮缺陷引起的瞳孔散大。2 Dp2小鼠突變基因的定位與鑒定將B6背景瞳孔散大雜合子小鼠與野生型D2小鼠配種獲得Fl代瞳孔散大小鼠,F1代小鼠回交B6獲得[(B6 X D2)X B6]N2代小鼠,篩選出具有瞳孔散大表型的N2代小鼠用于突變基因的定位�；蜻B鎖分析顯示:突變基因與微衛(wèi)星D6Mit230連鎖(LOD值12.92),初步將該基因定位于小鼠第6號(hào)染色體上。為對(duì)該突變基因進(jìn)行精確定位,增加N2代小鼠數(shù)量并在小鼠第6號(hào)染色體上增加微衛(wèi)星密度。最終,突變基因被確定在D6Mit149和D6Mit148之間,即遺傳距離48.93 cM-51.53 cM之間。在精確定位區(qū)間,MGI數(shù)據(jù)庫(kù)報(bào)道有10個(gè)蛋白編碼基因(Arl8b、Bhlhe40、Crbn、Edem1、Il5ra、Itpr1、Lrrn1、Setmar、Sumf1、Trnt1)和兩個(gè)未分類的非編碼RNA基因(0610040F04Rik、Gm17055)。對(duì)以上基因序列進(jìn)行測(cè)序?qū)Ρ群蟀l(fā)現(xiàn),除Itpr1基因外,其他基因未發(fā)現(xiàn)突變。對(duì)Itpr1基因編碼區(qū)測(cè)序發(fā)現(xiàn),該基因編碼區(qū)第5927位核苷酸發(fā)生由G到A的轉(zhuǎn)換,蛋白預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn),該突變可引起其編碼蛋白IP3R1第1976位氨基酸由半胱氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)槔野彼帷?Dp2瞳孔散大機(jī)制的研究以 Anti-IP3R1、Anti-Myosin light chain(phospho S20)及 Anti-GRP78 BIP 抗體為一抗,采過(guò)免疫組織化學(xué)技術(shù)對(duì)未恢復(fù)(2 W)和恢復(fù)(4 W)的Dp2小鼠及同窩野生型小鼠瞳孔括約肌進(jìn)行分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn):與野生型小鼠相比Dp2小鼠IP3R1水平未見(jiàn)明顯差異,Itpr1基因的突變不影響IP3R1蛋白的表達(dá);未恢復(fù)(2 W)Dp2小鼠Myosin light chain的磷酸化水平明顯低于野生型小鼠,平滑肌收縮活動(dòng)受到抑制,恢復(fù)(4 W)的Dp2小鼠Myosin light chain的磷酸化水平與野生型小鼠未見(jiàn)明顯差異,平滑肌收縮能力恢復(fù)正常水平;未恢復(fù)(2W)Dp2小鼠BIP水平明顯高于野生型小鼠,此時(shí)存在未折疊蛋白反應(yīng),恢復(fù)(4W)的Dp2小鼠BIP水平與野生型小鼠未見(jiàn)明顯差異。結(jié)論:本文使用ENU誘變獲得一例瞳孔散大小鼠,基因定位及鑒定發(fā)現(xiàn)該表型是由Itpr1突變引起。進(jìn)一步研究結(jié)果顯示Itpr1突變可引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)未折疊蛋白反應(yīng),使得部分IP3R1蛋白功能暫時(shí)性喪失,導(dǎo)致瞳孔括約肌收縮障礙,從而引起小鼠臨時(shí)性瞳孔散大表型。
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：Q78
【圖文】：

胞內(nèi)的調(diào)節(jié)劑（如鈣、鈣調(diào)節(jié)蛋白、ＡＴＰ、Ｃａｒ８）邋［２２別和幾種蛋白激酶（如ＰＫＡ、ＰＫＣ、ＣａＭ逡逑激酶ＩＩ等）磷酸化［２４？］的調(diào)節(jié)；（３）含有六個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域（ＴＭＤ）的區(qū)域；（４）與多種逡逑調(diào)節(jié)蛋白相互作用的Ｃ端胞質(zhì)尾部％３（）］（圖１）。突變型ＩＰ３Ｒ１對(duì)通道活性的影響取決于逡逑突變的嚴(yán)重程度、位置以及四聚體通道內(nèi)組裝的突變亞基的含量（該四聚體通道的三維結(jié)逡逑構(gòu)可使用單粒子冷凍電鏡確定）【３１］（圖２）。有學(xué)者認(rèn)為，這些突變多發(fā)生在新生兒中，逡逑發(fā)揮顯性負(fù)效應(yīng)并破壞細(xì)胞Ｃａ２＋穩(wěn)態(tài)１３２］。逡逑

２．１大瞳孔表型小鼠的獲得和遺傳試驗(yàn)結(jié)果逡逑本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)ＥＮＵ誘變獲得多種突變表型小鼠，如角膜混濁、多趾、卷尾等，其中逡逑一種小鼠表現(xiàn)為在強(qiáng)光照射和毛果蕓香堿滴眼時(shí)仍為大瞳孔（圖１．１邋Ｂ），而正常小鼠在同逡逑等條件下瞳孔縮�。▓D１．１邋Ａ），該突變小鼠被初步命名為Ｄ／７２邋（Ｄｉｌａｔｅｄ邋Ｐｕｐｉｌ邋２）。將逡逑小鼠與野生型Ｂ６小鼠配種，共獲得７７０只后代小鼠，其中３５９只小鼠表現(xiàn)為大瞳孔表型。逡逑Ａ邋：，，，：Ｂ逡逑Ｌ』：＇＇邋ｉｉ逡逑圖Ｍ野生型及小鼠逡逑Ｆｉｇ邋１．１邋Ｗｉｌｄ邋ｔｙｐｅ邋ａｎｄ邋Ｄｐ２邋ｍｉｃｅ逡逑Ａ：野生型小鼠邋Ｂ：邐小鼠逡逑Ａ：邋Ｗｉｌｄ邋Ｍｏｕｓｅ邋Ｂ：邋Ｄｐ２邋Ｍｏｕｓｅ逡逑２．２組織學(xué)分析結(jié)果逡逑對(duì)小鼠眼球石蠟切片后使用Ｈ．Ｅ染色觀察，結(jié)果顯示野生型及你２小鼠虹膜結(jié)構(gòu)完整，逡逑可見(jiàn)虹膜基質(zhì)和明顯的瞳孔括約肌。但瞳孔恢復(fù)前（２Ｗ）（圖１．２邋Ｂ）與同齡野生型Ｂ６逡逑小鼠（圖１．２Ａ）相比虹膜較短，而瞳孔恢復(fù)后（４Ｗ）（圖１．２邋Ｄ）虹膜與同齡野生型Ｂ６逡逑小鼠（圖１．２邋Ｃ）無(wú)明顯差別。除此之外正常小鼠與小鼠晶狀體和角膜無(wú)明顯差別。逡逑

現(xiàn)除／／ｐｒ／基因外，其他基因未發(fā)現(xiàn)堿基突變。逡逑對(duì)多個(gè)雜合子小鼠／／ｐ〃／基因重復(fù)測(cè)序發(fā)現(xiàn)：Ｚ）ｐ２小鼠你Ｗ基因編碼區(qū)的第５９２７逡逑位核苷酸發(fā)生由Ｇ到Ａ的轉(zhuǎn)換（圖２．２Ａ），而本實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)的野生型Ｂ６，Ｄ２，邋ＢＡＬＢ／ｃ，逡逑１２９小鼠測(cè)序結(jié)果與數(shù)據(jù)庫(kù)一致。逡逑蛋白預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)該突變引起／中ｒ／基因編碼區(qū)第１９７６位氨基酸由半胱氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)槔野卞义纤�，且該氨基酸在不同�?dòng)物中高度保守（圖２．２Ｂ）。逡逑

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 呂文明;李衛(wèi)東;;術(shù)前瞳孔散大致麻醉后誤診2例報(bào)道[J];基層醫(yī)學(xué)論壇;2017年07期

2 張德林;;阿托品過(guò)敏反應(yīng)一例[J];湖北醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);1987年01期

3 楊龍騏;彭義;;中西結(jié)合治療幼駒急驚風(fēng)[J];中獸醫(yī)學(xué)雜志;1987年04期

4 楊健;治愈雙眼瞳孔散大1例[J];四川中醫(yī);1988年09期

5 趙經(jīng)梅,相宏斌;健脾益氣治愈瞳孔散大癥[J];四川中醫(yī);1988年10期

6 劉來(lái)富,張晶;偏頭痛并發(fā)瞳孔散大一例[J];眼科研究;1989年04期

7 賀樹(shù)生;;病牛危重癥候[J];中獸醫(yī)學(xué)雜志;1989年03期

8 胡春明;;LASIK術(shù)后瞳孔散大1例[J];臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2006年09期

9 陳志軍,范志進(jìn);瞳孔散大門診誤診15例分析[J];中國(guó)誤診學(xué)雜志;2002年09期

10 呂彥鋒;56例高血壓性腦出血瞳孔散大救治體會(huì)[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志;2000年17期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 胡春明;汪輝;羅啟惠;;準(zhǔn)分子激光原位角膜磨鑲術(shù)(LASIK)后瞳孔散大1例[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十二屆全國(guó)眼科學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2007年

2 金毅;杜倬嬰;高亮;鄭紅云;胡錦;;顱腦損傷患者顱內(nèi)壓監(jiān)測(cè)下意外瞳孔變化：顱內(nèi)壓是金標(biāo)準(zhǔn)嗎？[A];2011中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

3 李振強(qiáng);何躍;陳如東;陳勁草;陳堅(jiān);雷霆;于加省;;顱內(nèi)動(dòng)脈瘤術(shù)中應(yīng)用罌粟堿導(dǎo)致的瞳孔變化[A];2011中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

4 王海龍;安妮;吳仁欽;榮遼江;康漣澎;;外傷性失語(yǔ)法醫(yī)學(xué)分析1例[A];法醫(yī)臨床學(xué)專業(yè)理論與實(shí)踐——中國(guó)法醫(yī)學(xué)會(huì)·全國(guó)第二十屆法醫(yī)臨床學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2017年

5 趙光金;;青光眼術(shù)中虹膜脫出原因分析和處理[A];2005年浙江省眼科學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2005年

6 黃勁超;周志強(qiáng);呂俊生;;外傷性遲發(fā)性顱內(nèi)血腫[A];中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)神經(jīng)外科醫(yī)師分會(huì)首屆全國(guó)代表大會(huì)論文匯編[C];2005年

7 雷雨云;向健;;一例瞳孔散大的損傷程度鑒定分析[A];中國(guó)法醫(yī)學(xué)會(huì)法醫(yī)臨床學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年

8 張?jiān)僭?;腦溢血患者的觀察與護(hù)理[A];貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)第八屆神經(jīng)病學(xué)年會(huì)論文集[C];2010年

9 王鵬程;;“輕傷”后致腦疝的遲發(fā)顳葉硬膜外血腫[A];2011中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

10 王禮芹;;老年急性閉角型青光眼患者的護(hù)理[A];全國(guó)第八屆老年護(hù)理學(xué)術(shù)交流暨專題講座會(huì)議論文匯編[C];2005年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 白雄;危險(xiǎn)的搶救[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2008年

2 鄒俊;孩子驗(yàn)光該注意些啥[N];家庭醫(yī)生報(bào);2006年

3 北京市西山醫(yī)院 陳琳邋黃紅云 劉彥鋮;腦后部撞傷 建議復(fù)查CT[N];健康報(bào);2007年

4 王華;路燈下玩牌下棋對(duì)眼不利[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2006年

5 劉凱;眼脹痛找原因[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2006年

6 北京軍區(qū)總醫(yī)院主任醫(yī)師 張禹;三拳救活一條命[N];健康報(bào);2004年

7 靜文;巧識(shí)優(yōu)劣太陽(yáng)鏡[N];中國(guó)旅游報(bào);2003年

8 王玉澤;“眼�！奔皶r(shí)治防失明[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2008年

9 楊小燕;寶寶度夏防中毒[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2007年

10 李中東;有些藥物可能會(huì)讓人失明[N];家庭醫(yī)生報(bào);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 戴夢(mèng)君;Itpr1基因突變引起小鼠瞳孔散大及其分子機(jī)制研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2018年

2 李濤;急性重型顱腦損傷不同手術(shù)時(shí)機(jī)療效分析的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2016年

本文編號(hào)：2772536