【摘要】：魁蚶(Scapharca broughtonii)又稱大毛蛤、赤貝、血貝,隸屬軟體動物門、瓣鰓綱、翼足亞綱、蚶目、蚶科、毛蚶屬。主要分布于西太平洋日本、韓國、中國沿海及俄羅斯東南部沿海。在中國,北起鴨綠江,南至廣西均有分布,其中以遼寧、山東資源最為豐富。多棲息在3~50米水深處,是一種營埋棲生活的冷水性大型雙殼貝類�？朗且环N優(yōu)質的高蛋白、低脂肪食品,其營養(yǎng)價值高,味道鮮美,具有良好的市場前景和開發(fā)利用價值。但隨著增養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大,其病害問題日益顯著。2012年、2013年大連、山東多處育苗場暴發(fā)魁蚶種貝大規(guī)模死亡事件,本實驗室從患病魁蚶體內分離出一種球形病毒,通過測序比對,證明其為牡蠣皰疹病毒(OsHV-1)。為探明OsHV-1對魁蚶的致病性,本研究使用患病魁蚶組織制成病毒懸液進行感染實驗。感染實驗分為空白組,陰性懸液注射組和病毒懸液注射組,并使用實時定量PCR法對感染后魁蚶體內病毒的時空分布進行檢測。實驗結果表明,空白組和陰性懸液組魁蚶感染后未檢測到病毒粒子,病毒懸液注射組魁蚶經(jīng)人工感染后,各部位組織中病毒含量都呈先上升再下降隨后又上升的趨勢,最終達到106拷貝/ng DNA左右。通過電鏡觀察,在感染魁蚶的鰓、肝胰腺、外套膜中出現(xiàn)細胞核染色質邊緣化甚至消失,細胞核腫脹、溶解,核仁消失,核膜擴張、不清晰,線粒體腫大,脊崩解,核糖體脫落等一系列細胞病理變化。在其細胞核和細胞質中均能發(fā)現(xiàn)大量直徑為90~110nm球形病毒粒子,該病毒粒子具囊膜,囊膜內可見均勻的高電子密度的核衣殼,與自然患病魁蚶負染電鏡中的病毒粒子形態(tài)相同。研究結果表明,OsHV-1可以感染魁蚶并與魁蚶大規(guī)模死亡有直接相關關系。目前針對該病毒的致病性、流行規(guī)律已經(jīng)開展了相關研究,但是對于該病毒與魁蚶宿主間的相互作用機制的了解還很有限。本研究分別利用第三代測序技術PacBio RSII平臺和第二代測序技術Illumina MiSeq平臺構建魁蚶轉錄組文庫。三代測序數(shù)據(jù)采用SMRT-Analysis Pipeline對所得序列進行分析,質控后共獲得85,127條reads,其中有46,265條全長cDNA轉錄本,全長read平均讀長為51,903bp。以魁蚶三代轉錄組測序組裝結果為參考序列,采用Trinity v2.1對所得序列進行de novo拼接,共獲得unigenes(200bp)276,997條,N50長度為1.35kb,平均長度508bp。對拼接結果進行注釋,共74,529條序列獲得GO號。用二代測序結果對魁蚶轉錄本進行基因差異表達分析,獲得差異基因2998個,上調基因933個,下調基因2065個,篩選得到免疫相關基因1585個,主要包括熱休克蛋白基因、信號轉導基因、細胞凋亡基因以及細胞因子。本研究利用三代測序得到的全長轉錄本對其中的khHSP70、khHSP90、khHbI、kh HbIIA、khHbIIB等免疫相關基因進行了序列和結構分析,并且在魁蚶感染OsHV-1后其表達量均明顯上調,證明其參與了魁蚶對OsHV-1的免疫反應。
【學位授予單位】：大連海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S944.44
【圖文】：

對基基因組織要可分為基因功能進行織表達譜分析為 4 類（圖 1行注釋，GO 富析，基于轉錄1-1）。富集分析，Pa錄因子分析基athway 富集分基因調控網(wǎng)絡分析，轉錄組絡等[7-9]。目前組表達譜分析前，轉錄組研析，蛋白互作研究技術根據(jù)作網(wǎng)絡據(jù)原理

論文技術路線流程圖

圖 2-2 魁蚶感染 OsHV-1 后的顯微圖片（a）PCR 檢測為 OsHV-1 陰性的正常魁蚶肝胰腺的腺管；（b）感染魁蚶肝胰腺細胞破碎，腺管崩解；（c）感胞核固縮，P 為核固縮；（d）感染魁蚶消化腺細胞中染色質邊緣化，M 為染色質邊緣化，P 為核固縮。Fig.2 photomicrographsof OsHV-1 infected tissues fromScapharca broughtonii.(a)arious degrees of vacuolization observed in normal digestive tubules of a S. broughtonii tested negative for OsHVPCR; (b) lysed connective tissue and tubule dilation observed in infected S. broughtonii; (c) karyopyknosis in ibroughtonii, P= Pycnosis; (d) abnormal nuclear features in in the digestive gland of a S. broughtonii infected with Osnuclear margination, P= Pycnosis.3.6 感染魁蚶電鏡觀察結果用患病魁蚶制備的病毒懸液進行負染電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)直徑為90~110nm的病毒粒子，病毒近似

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本文編號：2763880