【摘要】：乙烯合成限速酶是調(diào)控乙烯生物合成的關(guān)鍵酶,其主要功能是限制前體物質(zhì)ACC的合成,進(jìn)一步影響乙烯的生物合成。乙烯是高等植物體內(nèi)源激素,在植物的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮廣泛的作用。同時(shí)在呼吸躍變型果實(shí)中觸發(fā)了果實(shí)呼吸躍變的開(kāi)始,促進(jìn)了果實(shí)的成熟衰老,加速果實(shí)品質(zhì)的下降。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)‘無(wú)核白’中的乙烯合成限速酶基因VvACS1在果梗中具有最高的表達(dá)水平。本研究以歐洲葡萄(Vitis vinifera L.)品種‘紅地球’和‘無(wú)核白’的花藥、子房及小花蕾為材料,在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基PIV、MS1上培養(yǎng)獲得胚性愈傷組織,然后用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法,將歐洲葡萄‘無(wú)核白’中克隆得到的VvACS1基因構(gòu)建過(guò)表達(dá)載體,轉(zhuǎn)入無(wú)核白葡萄受體材料中,并驗(yàn)證VvACS1基因功能。本研究還對(duì)比了不同培養(yǎng)條件及品種葡萄體細(xì)胞胚發(fā)生的效率。具體內(nèi)容及取得的成果如下:1.誘導(dǎo)得到無(wú)核白和紅地球胚性愈傷組織。以無(wú)核白和紅地球的花藥、子房和小花蕾為外植體,在MS1培養(yǎng)基(MS+3%蔗糖+1 mg/L 2,4-D+2 mg/L 6-BA+3 g/L植物凝膠)上培養(yǎng)得到胚性愈傷組織。2.對(duì)誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行改良,發(fā)現(xiàn)在CIM6培養(yǎng)基(MS+3%蔗糖+0.5 mg/L 2,4-D+4 mg/L6-BA+1.0 mg/L pic+3 g/L植物凝膠),發(fā)現(xiàn)1.0 mg/L毒莠定的添加有助于提高胚性愈傷組織誘導(dǎo)率。3.獲得了無(wú)核白葡萄的VvACS1轉(zhuǎn)基因株系。采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,將攜帶歐洲葡萄‘無(wú)核白’VvACS1基因的過(guò)表達(dá)載體轉(zhuǎn)入歐洲葡萄無(wú)核白的胚性愈傷組織中,并對(duì)抗性株系進(jìn)行PCR檢測(cè),驗(yàn)證VvACS1基因被成功整合到受體材料基因組中,獲得了34個(gè)轉(zhuǎn)基因的無(wú)核白葡萄株系。4.選取轉(zhuǎn)基因株系和野生型以內(nèi)參基因GAPDH進(jìn)行qRT-PCR。結(jié)果表明在轉(zhuǎn)基因株系中,乙烯合成限速酶基因表達(dá)量有所不同,部分株系VvACS1基因相對(duì)表達(dá)量提高。5.在部分轉(zhuǎn)基因株系中,根系生長(zhǎng)較野生型植株受到抑制,其葉片VvACS1基因表達(dá)量明顯增加或葉片ACS酶活和乙烯釋放速率顯著增加。
【學(xué)位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S663.1
【圖文】：

3 結(jié)果與分析3.1 無(wú)核白、紅地球葡萄外植體的采集與消毒無(wú)核白及紅地球葡萄外植體的采集與消毒如圖 2-1 所示，開(kāi)花前 7-12 天采集的花序（圖2-1 A），去除頂端及底端部分小花蕾，解剖后卡寶染液染色確定單核靠邊期（圖 2-1 B），確定為單核靠邊期后進(jìn)行消毒處理分別為接種的小花蕾（圖 2-1 C），解剖后接種的花藥及子房（圖 2-1 D）。

圖 2-2 誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織類型；A、泡沫狀的非胚性愈傷組織 B、松散的非胚性愈傷組織 C、水漬化的非胚性愈傷組織；D 胚性愈傷組織及體細(xì)胞胚Fig 2-2 Type of callus; A. Foamy non-embryogenic callus; B. Friable non-embryogenic callus; C. Waterynon-embryogenic callus; D. Embryogenic callus and somatic embryo.3.3 葡萄體細(xì)胞胚萌發(fā)及成苗

圖 2-3 體細(xì)胞胚萌發(fā)過(guò)程及成苗；A、原胚團(tuán)及各時(shí)期胚；B、球形胚時(shí)期；C、心形胚時(shí)期；D、魚(yú)雷胚時(shí)期；E、子葉胚時(shí)期；F、胚根伸長(zhǎng)；G 、光形態(tài)建成；H、體細(xì)胞胚成苗Fig 2-3 The germination of somatic embryo; A. proembryonic masses and types of embryo; B. Global embryo; CHearted-shaped embryo; D. Torpedo-shaped embryo; E. Cotyledonary embryo; F. Radicle of embryo; Gphotomorphogenesis; H. Plantlets were formed on planting medium.3.4 紅地球的最佳體細(xì)胞胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 蔡濤;葉霞;馬媛春;王小龍;陳飛;程宗明;;葡萄ACO家族基因過(guò)量表達(dá)對(duì)番茄乙烯釋放速率的影響[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2013年09期

2 支玉璽;張劍俠;王躍進(jìn);;華東葡萄廣西-2花藥胚狀體誘導(dǎo)與再生植株的研究[J];果樹(shù)學(xué)報(bào);2010年01期

3 宋喜貴,閻茂華,路正社,王麗娟,王U喼

本文編號(hào)：2759585