【摘要】：乙烯合成限速酶是調(diào)控乙烯生物合成的關(guān)鍵酶,其主要功能是限制前體物質(zhì)ACC的合成,進一步影響乙烯的生物合成。乙烯是高等植物體內(nèi)源激素,在植物的生長發(fā)育過程中發(fā)揮廣泛的作用。同時在呼吸躍變型果實中觸發(fā)了果實呼吸躍變的開始,促進了果實的成熟衰老,加速果實品質(zhì)的下降。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)‘無核白’中的乙烯合成限速酶基因VvACS1在果梗中具有最高的表達水平。本研究以歐洲葡萄(Vitis vinifera L.)品種‘紅地球’和‘無核白’的花藥、子房及小花蕾為材料,在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基PIV、MS1上培養(yǎng)獲得胚性愈傷組織,然后用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法,將歐洲葡萄‘無核白’中克隆得到的VvACS1基因構(gòu)建過表達載體,轉(zhuǎn)入無核白葡萄受體材料中,并驗證VvACS1基因功能。本研究還對比了不同培養(yǎng)條件及品種葡萄體細胞胚發(fā)生的效率。具體內(nèi)容及取得的成果如下:1.誘導(dǎo)得到無核白和紅地球胚性愈傷組織。以無核白和紅地球的花藥、子房和小花蕾為外植體,在MS1培養(yǎng)基(MS+3%蔗糖+1 mg/L 2,4-D+2 mg/L 6-BA+3 g/L植物凝膠)上培養(yǎng)得到胚性愈傷組織。2.對誘導(dǎo)培養(yǎng)基進行改良,發(fā)現(xiàn)在CIM6培養(yǎng)基(MS+3%蔗糖+0.5 mg/L 2,4-D+4 mg/L6-BA+1.0 mg/L pic+3 g/L植物凝膠),發(fā)現(xiàn)1.0 mg/L毒莠定的添加有助于提高胚性愈傷組織誘導(dǎo)率。3.獲得了無核白葡萄的VvACS1轉(zhuǎn)基因株系。采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,將攜帶歐洲葡萄‘無核白’VvACS1基因的過表達載體轉(zhuǎn)入歐洲葡萄無核白的胚性愈傷組織中,并對抗性株系進行PCR檢測,驗證VvACS1基因被成功整合到受體材料基因組中,獲得了34個轉(zhuǎn)基因的無核白葡萄株系。4.選取轉(zhuǎn)基因株系和野生型以內(nèi)參基因GAPDH進行qRT-PCR。結(jié)果表明在轉(zhuǎn)基因株系中,乙烯合成限速酶基因表達量有所不同,部分株系VvACS1基因相對表達量提高。5.在部分轉(zhuǎn)基因株系中,根系生長較野生型植株受到抑制,其葉片VvACS1基因表達量明顯增加或葉片ACS酶活和乙烯釋放速率顯著增加。
【學位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S663.1
【圖文】：

3 結(jié)果與分析3.1 無核白、紅地球葡萄外植體的采集與消毒無核白及紅地球葡萄外植體的采集與消毒如圖 2-1 所示，開花前 7-12 天采集的花序（圖2-1 A），去除頂端及底端部分小花蕾，解剖后卡寶染液染色確定單核靠邊期（圖 2-1 B），確定為單核靠邊期后進行消毒處理分別為接種的小花蕾（圖 2-1 C），解剖后接種的花藥及子房（圖 2-1 D）。

圖 2-2 誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織類型；A、泡沫狀的非胚性愈傷組織 B、松散的非胚性愈傷組織 C、水漬化的非胚性愈傷組織；D 胚性愈傷組織及體細胞胚Fig 2-2 Type of callus; A. Foamy non-embryogenic callus; B. Friable non-embryogenic callus; C. Waterynon-embryogenic callus; D. Embryogenic callus and somatic embryo.3.3 葡萄體細胞胚萌發(fā)及成苗

圖 2-3 體細胞胚萌發(fā)過程及成苗；A、原胚團及各時期胚；B、球形胚時期；C、心形胚時期；D、魚雷胚時期；E、子葉胚時期；F、胚根伸長；G 、光形態(tài)建成；H、體細胞胚成苗Fig 2-3 The germination of somatic embryo; A. proembryonic masses and types of embryo; B. Global embryo; CHearted-shaped embryo; D. Torpedo-shaped embryo; E. Cotyledonary embryo; F. Radicle of embryo; Gphotomorphogenesis; H. Plantlets were formed on planting medium.3.4 紅地球的最佳體細胞胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 蔡濤;葉霞;馬媛春;王小龍;陳飛;程宗明;;葡萄ACO家族基因過量表達對番茄乙烯釋放速率的影響[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學報;2013年09期

2 支玉璽;張劍俠;王躍進;;華東葡萄廣西-2花藥胚狀體誘導(dǎo)與再生植株的研究[J];果樹學報;2010年01期

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本文編號：2759585