發(fā)布時(shí)間：2020-07-14 12:39

【摘要】：本論文包括三部分內(nèi)容:第一部分:五例伴t(12;22)/MN1-ETV6髓系白血病的細(xì)胞及分子遺傳學(xué)研究;第二部分:MN1及CD34基因在急性髓系白血病中的表達(dá)及意義;第三部分:MN1、CD34、BAALC、WT1基因用于急性髓系白血病復(fù)發(fā)的檢測(cè)。第一部分五例伴t(12;22)/MN1-ETV6髓系白血病的細(xì)胞及分子遺傳學(xué)研究目的:系統(tǒng)分析伴有t(12;22)/MN1-ETV6髓系白血病的臨床及實(shí)驗(yàn)室特征。方法:采用常規(guī)R顯帶技術(shù)進(jìn)行核型分析,進(jìn)一步通過(guò)熒光原位雜交技術(shù)(FISH)驗(yàn)證MN1及ETV6斷裂重排,其中部分患者采用PCR技術(shù)檢測(cè)ETV6-MN1/MN1-ETV6融合基因并測(cè)序驗(yàn)證基因斷裂位點(diǎn);隨訪患者化療療效及生存情況。結(jié)果:5例患者中4例為急性髓系白血病(2例AML-M0、2例AML-M4)、1例為慢性粒單核細(xì)胞白血病(CMML)。5例患者均在初診時(shí)檢出t(12;22)(p13;q12),同時(shí)FISH證實(shí)5例患者均存在MN1及ETV6重排。4例患者進(jìn)行PCR和測(cè)序分析,證實(shí)其中4例ETV6-MN1陽(yáng)性、3例MN1-ETV6陽(yáng)性。本組中2例患者僅化療,其中1例死亡,生存期為2個(gè)月,另一例隨訪9個(gè)月后失訪;1例患者明確診斷后僅支持治療,隨即出院失訪;2例化療后行HSCT,其中1例患者死于重癥感染,生存期為2個(gè)月,另一例至今存活,隨訪期13個(gè)月。結(jié)論:t(12;22)/MN1-ETV6是一類(lèi)少見(jiàn)的再現(xiàn)性染色體異常,易位后形成MN1-ETV6/ETV6-MN1融合基因。此類(lèi)異常患者常具有難治性,預(yù)后不良等特點(diǎn)。第二部分MN1及CD34基因在急性髓系白血病中的表達(dá)及意義目的:探討MN1、CD34基因表達(dá)與急性髓系白血病臨床、分子及細(xì)胞遺傳學(xué)、疾病預(yù)后的關(guān)系。方法:用RT-PCR方法檢測(cè)2013年4月—2016年9月收治的337例初治AML患者的MN1及CD34基因表達(dá)水平,分析其與臨床、分子及細(xì)胞遺傳學(xué)以及疾病預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果:1.AML伴inv(16)及c-kit基因突變者M(jìn)N1基因高表達(dá)(P值為0.0001及0.0049),MLL重排及NPM1突變者M(jìn)N1基因低表達(dá)(P值為0.0003及0.0001)。2.MN1基因表達(dá)與CD34、BAALC基因表達(dá)呈正相關(guān)(P值均0.0001),而與WT1及EVI基因表達(dá)無(wú)關(guān)(P值為0.4864及0.7903)。3.MN1高表達(dá)組AML與inv(16)(P0.0001)、CEBPA雙突變(P=0.0113)及c-kit突變(P=0.0314)呈正相關(guān);與外周血PLT(P=0.0113)、LDH(P=0.0204)、骨髓原始細(xì)胞(P=0.0348)、M5比例(P=0.0060)、MLL重排(P=0.0028)、NPM1突變(P0.0001)呈負(fù)相關(guān)。4.高M(jìn)N1/CD34值(MN1、CD34基因表達(dá)拷貝數(shù)比值)與年齡(P=0.0373)、WBC(P=0.0444)、PLT(P=0.0013)、M4比例(P0.0001)、M5比例(P=0.0159)、inv(16)(P0.0001)、NPM1突變(P0.0001)及DNMT3A突變(P=0.0003)呈正相關(guān);與M1比例(P=0.0254)、M2比例(P0.0001)、t(8;21)(P0.0001)、CEBPA雙突變(P0.0001)呈負(fù)相關(guān)。5.生存分析顯示,MN1表達(dá)高低與AML總生存率(OS)無(wú)關(guān)(P=0.9967),而高M(jìn)N1/CD34值與較短O(píng)S相關(guān)(P=0.0058)。各ELN危險(xiǎn)分層中,高危組(P=0.0222)及低危組(P=0.0281)中高M(jìn)N1/CD34與不良預(yù)后相關(guān),中危組中OS率僅可見(jiàn)一定趨勢(shì)而無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P=0.3586)。單因素分析顯示年齡(P=0.0003)、LDH(P=0.0124)、骨髓原始細(xì)胞比例(P=0.0453)、核型危險(xiǎn)分層(P=0.0216)、FLT3突變(P=0.0070)、MN1/CD34值分組(P=0.0066)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;多因素分析顯示年齡(P=0.0031)、LDH(P=0.0026)、MN1/CD34值(P=0.0204)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:1.MN1基因高表達(dá)于AML伴inv(16),而低表達(dá)于AML伴MLL重排及NPM1突變。2.AML中MN1基因表達(dá)與BAALC、CD34基因表達(dá)呈正相關(guān)性。3.通過(guò)聯(lián)合MN1及CD34基因表達(dá)較好可用于AML患者預(yù)后評(píng)價(jià)。第三部分MN1、CD34、BAALC、WT1基因用于急性髓系白血病復(fù)發(fā)的檢測(cè)目的:探討MN1、CD34、BAALC、WT1基因表達(dá)用于急性髓系白血病復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)。方法:用RT-PCR方法檢測(cè)2013年4月—2016年9月收治的23例復(fù)發(fā)AML患者全病程骨髓RNA標(biāo)本的MN1、CD34、BAALC、WT1基因表達(dá)量,并用于AML復(fù)發(fā)的判斷。結(jié)果:1.23例AML總體分析顯示,MN1(P=0.0282)、CD34(P=0.0111)、WT1(P0.0001)在緩解時(shí)表達(dá)量較初診時(shí)降低;MN1(P=0.0040)、CD34(P0.0001)、BAALC(P=0.0005)、WT1(P0.0001)在疾病復(fù)發(fā)時(shí)表達(dá)量較緩解時(shí)增高。2.23例AML配對(duì)分析顯示,MN1在16例(P=0.0150)、CD34在17例(P=0.0010)、BAALC在15例(P=0.0116)、WT1在23例(P0.0001)患者疾病緩解時(shí)基因表達(dá)量較初診降低;MN1在19例(P=0.0002)、CD34在22例(P0.0001)、BAALC在18例(P=0.0019)、WT1在22例(P0.0001)患者疾病復(fù)發(fā)時(shí)表達(dá)量較緩解增高。3.MN1、CD34、BAALC、WT1四種基因聯(lián)合分析顯示,100%(23/23)AML患者在復(fù)發(fā)時(shí)存在至少二種、91.3%(21/23)患者存在至少三種、69.5%(16/23)患者存在四種基因表達(dá)增高。4.23例患者中其中6例進(jìn)行4種基因與融合基因的比較,例6、21患者M(jìn)N1、CD34、BCCLC、WT1增減(例21 BAALC除外)與MLL-AF6相符;例7、13、23患者M(jìn)N1、CD34、BAALC、WT1增減(例23 MN1除外)與AML1-ETO相符;例20患者M(jìn)N1、CD34、BAALC、WT1升高與CBFβ-MYH11相符。結(jié)論:聯(lián)合檢測(cè)MN1、CD34、BAALC、WT1四種基因可用于AML復(fù)發(fā)預(yù)測(cè),且與MLL-AF6、AML1-ETO、CBFβ-MYH11有較好一致性。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R733.7
【圖文】：

a.b. c.圖1. 一例伴t(12;22)(p13;q12) CMML患者骨髓形態(tài)圖(a．瑞氏染色，100 ×；b．瑞氏染色，1000×；c．POX染色，1000×)

例3患者合并+8異常，例4患者合并+8、+22異常。圖213;q12) R顯帶核型圖。 2. 5 例伴 t(12;22)髓系腫瘤患者細(xì)胞遺傳學(xué)、分子生物學(xué)及治療反染色體核型 FISH RT-PCR 治療 化療后 7-14dBM 原始細(xì)胞,X,-Y,t(12;22)(p13;q12)[10] MN1（+）ETV6（+）ETV6-MN1MN1-ETV6IA+HSCT 76% 6,XY,t(12;22)(p13;q12)[7]/46,XY[3]MN1（+）ETV6（+）- 支持治療 - XX,+8,t(12,22)(p13;q12)[10] MN1（+）ETV6（+）ETV6-MN1n.a.IA 65% 8,XX,+8,t(12;22)(p13;q12),+22[20]MN1（+）ETV6（+）ETV6-MN1MN1-ETV6IA 24% 6,XX,t(12,22)(p13;q12)[10] MN1（+）ETV6（+）ETV6-MN1MN1-ETV6DAC+HSCT-

ETV6基因重排FISH圖。MN1斷裂重排 ETV6斷裂重排圖3. 一例伴t(12;22)(p13;q12) CMML患者M(jìn)N1及ETV6斷裂重排FISH圖（白色箭頭表示斷裂重排陽(yáng)性）4.RT-PCR 及測(cè)序：4例患者進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)，4例患者均為ETV6-MN1陽(yáng)性，3例患者M(jìn)N1-ETV6陽(yáng)性（例3患者按既往文獻(xiàn)引物未檢測(cè)到MN1-ETV6融合基因[7]，由于無(wú)RNA標(biāo)本，未使用本文引物復(fù)測(cè)），例5 MN1-ETV6為弱陽(yáng)性。圖4為例1、4、5患者RT-PCR結(jié)果。測(cè)序結(jié)果顯示4例患者M(jìn)N1及ETV6基因斷裂位點(diǎn)相同，MN1斷裂位點(diǎn)位于第2號(hào)外顯子起始出（4737位核苷酸），ETV6斷裂位點(diǎn)位于第2號(hào)外顯子末端（437位核苷酸）

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3 張劍,徐兵;髓系白血病患者T細(xì)胞受體基因重排的檢測(cè)及其意義[J];實(shí)用腫瘤雜志;1999年02期

4 王

本文編號(hào)：2754981