【摘要】：背景:過敏性疾病和自身免疫性疾病都是由遺傳、免疫、環(huán)境等多種因素引發(fā)免疫功能異常所導(dǎo)致的疾病。其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢,是很重要的公共衛(wèi)生問題。對兩種疾病的病因和發(fā)病機制的研究尤其從免疫和遺傳的角度,已經(jīng)成為了研究的熱點,對疾病的診斷和治療有重大的意義。兩種疾病的病理基礎(chǔ)都與病理性抗體的產(chǎn)生有關(guān),包括過敏性疾病中的sIgE,自身免疫性疾病中的多種自身抗體。這些病理性抗體均與B細(xì)胞和漿細(xì)胞有關(guān),病理性抗體與抗原(變應(yīng)原和自身抗原)的結(jié)合會引發(fā)一系列的病理反應(yīng)(細(xì)胞因子釋放、效應(yīng)細(xì)胞活化、補體系統(tǒng)激活等),最終導(dǎo)致全身多器官的損害。病理性抗體在疾病的診斷中發(fā)揮著重要的作用,在一些自身免疫性疾病中,很多自身抗體的出現(xiàn)會比臨床癥狀的出現(xiàn)或明確診斷早若干年。因此自身抗體的檢測,可做為無癥狀患者的疾病風(fēng)險評估的依據(jù)。在臨床實踐中發(fā)現(xiàn),兩種疾病的患者血清中的病理性抗體種類數(shù)有多有少,或表現(xiàn)為單一病理性抗體陽性,或表現(xiàn)為多種病理性抗體陽性,多種不同的病理性抗體合成是隨機的還是存在必然性尚未可知,多種病理性抗體陽性的患者中,抗體的濃度不相同,是否可以用濃度高的抗體作為疾病診斷的指標(biāo)有待研究證實。近年來,對病理性抗體來源的研究較為廣泛,其中記憶性B細(xì)胞(包括短壽命和長壽命的記憶性B細(xì)胞),自身反應(yīng)性B細(xì)胞,以及抗體合成過程中免疫球蛋白類型轉(zhuǎn)化等都是研究熱點。在過敏性疾病和自身免疫性疾病中,病理性抗體的合成與抗原(變應(yīng)原和自身抗原)的刺激密不可分,抗原物質(zhì)在體內(nèi)的處理和遞呈與HLA密切相關(guān),故對兩種疾病與HLA基因多態(tài)性的相關(guān)分析較為廣泛。與過敏性疾病相關(guān)的HLA位點很多,某些藥物引發(fā)的過敏也存在遺傳易感性,比如青霉素等過敏與HLA-DRA相關(guān)。對多種類型的吸入性和食入性變應(yīng)原引發(fā)的過敏研究發(fā)現(xiàn),HLA-Ⅱ類分子與屋塵,蟑螂,食物添加劑,草莓,樹木等多種物質(zhì)引發(fā)的兒童哮喘相關(guān),隨著檢測技術(shù)的發(fā)展,多種不同變應(yīng)原相關(guān)聯(lián)的HLA等位基因位點不斷被找到,其中HLA-DQA1*01:01、HLA-DQA1*06:01、HLA-DQB1*03:03、HLA-DQB1*06:01與螨蟲引起的過敏密切相關(guān),HLA-DRB1*01、HLA-DQB1*05:01與艾蒿引發(fā)的過敏有關(guān)。但也有一些變應(yīng)原尚未找到相關(guān)的HLA等位基因。在對SLE多年的研究中發(fā)現(xiàn),HLA-Ⅱ類分子,尤其是HLA-DQA1、DRB1、DQB1發(fā)揮著更為顯著和重要的作用,其中HLA-DRB1*15:01、HLA-DQA1*01:02、HLA-DQB1*06:02、DRB1*03:01、DQA1*05:01、DQB1*02:01、HLA-A*03:01、HLA-B*07:02和HLA-C*07:02、HLA-A*01:01、HLA-B*08:01、HLA-C*07:01等等位基因均與SLE的發(fā)生有關(guān)。遺傳因素在這兩種疾病的病理基礎(chǔ)中起著重要作用,其作用機制涉及很多方面,但對病理性抗體種類與HLA等位基因相關(guān)性的研究尚無報道。目的:通過分析過敏性疾病和自身免疫性疾病病理性抗體數(shù)據(jù),比較病理性抗體單一陽性實際值和理論值的差異,評估特征性抗體在疾病診斷中的價值,檢測血清多種類型非相關(guān)抗體的水平,探討淋巴細(xì)胞端粒相對長度與病理性抗體種類相關(guān)性,分析患者HLA-DRB1、HLA-DQB1等位基因型與病理性抗體的關(guān)系及其作用機制。方法:1.檢測2409例過敏性疾病患者血清吸入性和食入性sIgE抗體(線性免疫印跡法,LIA),根據(jù)概率論的基本原理,提出了單一過敏比例理論值(TPM)概念和計算方法,并與單一過敏比例實際值(OPM)比較。提出特征性sIgE,通過ROC曲線法評估其診斷效能。2.檢測643例自身免疫性疾病患者血清ANAIg G抗體(LIA),提出了單一ANA比例理論值概念和計算方法,并與單一ANA比例實際值比較。提出特征性ANAIgG,通過ROC曲線法評估其診斷效能。3.檢測55例過敏性疾病患者和171例自身免疫性疾病患者血清中疾病非相關(guān)抗體,包括感染性抗體(弓形蟲、巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒IgM抗體;梅毒、丙型肝炎病毒、人類免疫缺陷病毒IgG抗體)、ANAIgG和sIgE,檢測方法為化學(xué)發(fā)光法、電化學(xué)發(fā)光法、ELISA法和LIA法。4.檢測33例過敏性疾病患者和36例SLE患者淋巴細(xì)胞端粒相對長度,同時檢測年齡和性別相匹配的健康對照組端粒相對長度(實時熒光定量PCR法)。5.檢測100例過敏性疾病和100例SLE患者HLA-DRB1和HLA-DQB1等位基因型(基因測序法,Sequence based typing,PCR-SBT),采用網(wǎng)上數(shù)據(jù)庫搜索結(jié)合Discovery Studio(DS)軟件,分析HLA等位基因型與病理性抗體種類數(shù)和是否患病的關(guān)系,比較相關(guān)HLA分子和無關(guān)HLA分子β鏈的氨基酸序列差異,并構(gòu)建HLAβ鏈三級結(jié)構(gòu),比較分子的穩(wěn)定性。結(jié)果:1.在過敏性疾病中,從多角度(性別、年齡、季節(jié)、疾病種類和過敏途徑)比較OPM和TPM,OPM均顯著低于TPM(p0.001)。特征性抗體ROC曲線下面積(AUC)為0.749。2.在自身免疫性疾病中OPM結(jié)果均顯著低于TPM(p0.001)。SLE組ROC曲線下的面積值為0.916,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎組ROC曲線下面積值為0.646,其他自身免疫性疾病組ROC曲線下面積為0.830。3.非相關(guān)抗體檢測中,過敏性疾病組中抗巨細(xì)胞病毒IgM抗體和抗梅毒IgG抗體水平高于健康對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.001);自身免疫性疾病組中抗弓形蟲病毒IgM抗體和抗梅毒IgG抗體和抗丙肝IgG抗體高于健康對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),sIgE檢測結(jié)果顯示自身免疫性疾病組陽性病理性抗體種類數(shù)均值(0.88)高于對照組陽性病理性抗體種類數(shù)均值(0.20),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.001);過敏性疾病組陽性病理性抗體種類數(shù)均值(2.37)高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.001)。ANAIgG譜檢測結(jié)果顯示自身免疫性疾病組陽性病理性抗體種類數(shù)均值(2.47)高于對照組陽性病理性抗體種類數(shù)均值(0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.001);過敏性疾病組陽性病理性抗體種類數(shù)均值(0.25)高于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.04)4.SLE組端粒相對長度與健康對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.011),過敏性疾病組端粒相對長度與健康對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.043)。兩種疾病組中端粒相對長度均縮短。SLE組端粒相對長度與ANA譜抗體陽性病理性抗體種類數(shù)負(fù)相關(guān)(B=-0.249,p=0.044),過敏性疾病組端粒相對長度與sIgE陽性病理性抗體種類數(shù)負(fù)相關(guān)(B=-0.250,p=0.048)5.過敏性疾病和SLE患者HLA高分辨等位基因型與病理性抗體種類數(shù)線性回歸分析結(jié)果以及高分辨等位基因型與是否患病Logistics回歸分析結(jié)果顯示:過敏性疾病組中,與病理性抗體種類數(shù)有關(guān)的HLA分型有HLA-DRB1*01:02;與患病有關(guān)的HLA分型有HLA-DRB1*07:01。在SLE組中,與病理性抗體種類數(shù)有關(guān)的HLA分型有HLA-DQB1*02:02、HLA-DQB1*04:01、HLA-DRB1*07:01、HLA-DRB1*08:03、HLA-DRB1*12:10;與患病有關(guān)的HLA分型有HLA-DRB1*08:03、HLA-DRB1*15:01。將上述相關(guān)HLA分子β鏈氨基酸序列與無關(guān)的HLA分子比較,分別構(gòu)建相關(guān)/無關(guān)的HLADRB1和HLADQB1β鏈的三級結(jié)構(gòu),采用Minimization計算體系能量,評估分子穩(wěn)定性,結(jié)果顯示與疾病相關(guān)或病理性抗體種類數(shù)相關(guān)的HLADRB1和HLADQB1β鏈的穩(wěn)定性均低于無關(guān)的HLAβ鏈。結(jié)論:1.在過敏性疾病和自身免疫性疾病中高比例的多重病理性抗體存在必然性。B細(xì)胞的異�；罨驮鲋呈菍�(dǎo)致多種病理性抗體的產(chǎn)生的主要原因。特征性病理性抗體(sIgE/ANAIgG)在過敏性疾病和SLE的診斷中均有較好的診斷效能。2.過敏性疾病組某些抗體水平高于健康對照組,自身免疫性疾病組某些抗體水平也高于健康對照組,在這兩種疾病中,與疾病相關(guān)和無關(guān)的多種類型的抗體同時存在異常,表明受累的B細(xì)胞較為廣泛,其活化和增殖的特異性較差,故B細(xì)胞功能的紊亂可能是這兩種疾病的發(fā)病基礎(chǔ)。3.在對多重病理性抗體陽性的過敏性疾病和SLE患者端粒相對長度檢測中發(fā)現(xiàn)其值均低于健康對照組,且與陽性病理性抗體種類數(shù)呈負(fù)相關(guān)。說明多種類抗體的合成是B細(xì)胞的過度活化和增殖的結(jié)果,并影響B(tài)細(xì)胞的衰老。4.本研究中與疾病發(fā)生和病理性抗體種類數(shù)相關(guān)的HLA-DRB1和HLA-DQB1分子β鏈穩(wěn)定性低于無關(guān)的HLA分子,且這兩種HLA分子的差異位點多數(shù)分布于抗原結(jié)合部位。因此相關(guān)HLA分子和無關(guān)的HLA分子結(jié)構(gòu)不同,導(dǎo)致其與抗原多肽的結(jié)合的特異性和親和力也可能存在不同,進而影響抗體的合成,導(dǎo)致疾病的發(fā)生和病理性抗體種類數(shù)量的變化。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R593
【圖文】：

大連醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文22圖1-1. 吸入性及食入性sIgE抗體檢測著色強度結(jié)果Figure 1-1. Results of sIgE intensity against inhalation and food allergens2.4 計算聯(lián)合過敏比例實際值（observed proportion of compound-sensitization，OPC)和聯(lián)合過敏比例理論值（theoretical proportion of compound-sensitization，TPC)在檢測的20種過敏原中，有10種為吸入性過敏原，另外10種為食入性過敏原，本研究樣本檢測結(jié)果有單一吸入性過敏原或單一食入性過敏原陽性，也有吸入性過敏原和食入性過敏原均陽性的，稱之為聯(lián)合過敏。聯(lián)合過敏比例實際值OPC=（聯(lián)合過敏樣本量/總樣本量）×100%聯(lián)合過敏比例理論值TPC=（單一吸入過敏比例×單一食入過敏比例）×100%=(單一吸入過敏樣本量/總樣本量) ×（單一食入過敏樣本量/總樣本量）×100%2.5 統(tǒng)計學(xué)分析實驗所有數(shù)據(jù)均使用SPSS18.0軟件進行統(tǒng)計(Statistical Package for SocialSciences, Chicago, IL, USA)。以p <0.05 作為判斷是否有統(tǒng)計學(xué)意義標(biāo)準(zhǔn)。計數(shù)資料統(tǒng)計應(yīng)用卡方檢驗

在食入性過敏原中，花生（10.00%）、海魚組合1（8.80%）和淡水魚組合1（7.06%）陽性率居于前3位（見表1-1）。圖1-2. 吸入性及食入性sIgE抗體檢測結(jié)果Figure 1-2. Results of sIgE against inhalation and food allergensNote:The result of the first strip (CN At-128-21): negative;The result of the second strip(CN At-128-18):ds1 class 4, w6 class 5;The third strip (CN At-128-20):f33 class 1, f88class 4, f27 class 4, f2 class 3, e2 class 4, e1 class 4, ds1 class 3, w6 class 4.本實驗中，一個樣本中過敏原陽性sIgE種類的數(shù)量為0-10。若僅有一種sIgE是陽性的，我們稱之為單一過敏（占22.8%，見表1-2）。如果結(jié)果中有多個sIgE是陽性的, 則被稱為多重過敏（占26.9%，見表1-2）。對于不同種類的過敏原單一過敏所占的比例是不同的（見表1-3）。對于每個過敏原而言，單一過敏所占的比例低于多重過敏所占的比例。其中凬草（u80）和霉菌組合1（ms1）中多重過敏所占的比例均超過95%。總體OPM（22.8%）低于TPM（38.6%），其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（p < 0.001，見表1-3）。在不同疾病組（過敏性皮炎

圖 1-3. 特征性 sIgE ROC 曲線Figure 1-3. ROC analyses of trait sIgE detection(四) 討論中，針對2409例樣本均檢測了20種不同的sIgE，并對其等級多數(shù)sIgE的陽性級別為1級，例如花生的sIgE陽性率最高，可1級的占77.59%，等級為2級的占14.94%。而塵螨組合1的sI別為5級，說明其sIgE具有較高的濃度。sIgE等級有助于預(yù)過敏癥狀。陽性等級為1級或2級sIgE的患者中，往往不表現(xiàn)3]。敏原檢測結(jié)果顯示單一過敏的比例低于多重過敏比例。進一別、年齡、季節(jié)和疾病種類進行分組后結(jié)果相同。關(guān)于多機制目前尚有爭議：是交叉反應(yīng)性抑或是共同過敏。本實

【參考文獻】

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本文編號：2755286