【摘要】：細葉百合花被片反卷,花朵嬌艷,是一種分布區(qū)域極廣的野生花卉。其適應(yīng)性強,極耐寒、耐旱、耐鹽堿,既可用作園林綠化美化環(huán)境,同時也是一種名貴的切花材料。本研究從細葉百合轉(zhuǎn)錄組測序文庫中篩選MADS-box轉(zhuǎn)錄因子家族,選擇表達量高、開放閱讀框完整并具備保守結(jié)構(gòu)域,采用同源序列方法克隆基因全長,該基因編碼224個氨基酸。序列同源性和系統(tǒng)進化樹分析表明該基因?qū)儆贛ADS-box基因家族下SVP類基因,命名為LpSVP。實時熒光定量分析表明在花發(fā)育過程中該基因表達量先增長后下降,推測其對細葉百合花發(fā)育過程具有表達調(diào)控作用。本文主要研究結(jié)果如下:1.通過花芽分化形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn),細葉百合鱗莖在低溫貯藏期間發(fā)生花芽分化現(xiàn)象,并且隨低溫貯藏時期的延長花芽分化程度加深;熒光定量分析LpSVP基因相對表達量隨低溫貯藏時期延長持續(xù)下降,推測該基因作為花分生組織識別阻遏物,其下調(diào)表達響應(yīng)花芽分化進程。2.該基因ORF全長為675bp,具有高度保守的MADS區(qū)和半保守的K區(qū),屬于MADS-box基因家族。該序列與臺灣百合和麝香百合雜交品種(Liliumformosanumx Liliumlongiforum)的SVP蛋白同源性達到99%。生物信息學(xué)分析表明蛋白相對分子量為25.783kDa,理論等電點為5.62,為親水蛋白,沒有跨膜結(jié)構(gòu)。3.采用RT-PCR對LpSVP進行組織特異性表達分析,結(jié)果表明LpSVP在細葉百合鱗莖、葉片、花瓣、雄蕊、雌蕊中都表達,但有強弱之分。4.選取細葉百合花發(fā)育5個階段,即花蕾Ⅰ期,花蕾Ⅱ期,花蕾Ⅲ期,花蕾末期和盛開期進行qRT-PCR分析,LpSVP表達量呈現(xiàn)先增長后下降的趨勢,在花蕾Ⅱ期表達量最大,在盛開期表達量最低。5.構(gòu)建植物表達載體pBI121-LpSVP-GFP,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤轉(zhuǎn)化法將pBI121-LpSVP-GFP轉(zhuǎn)入野生煙草中,結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因株系相較野生型開花時間推遲,花序分支變多,整體花序略為疏散。
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S682.29
【圖文】：

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本文編號：2746251