【摘要】：細(xì)葉百合花被片反卷,花朵嬌艷,是一種分布區(qū)域極廣的野生花卉。其適應(yīng)性強(qiáng),極耐寒、耐旱、耐鹽堿,既可用作園林綠化美化環(huán)境,同時(shí)也是一種名貴的切花材料。本研究從細(xì)葉百合轉(zhuǎn)錄組測(cè)序文庫(kù)中篩選MADS-box轉(zhuǎn)錄因子家族,選擇表達(dá)量高、開(kāi)放閱讀框完整并具備保守結(jié)構(gòu)域,采用同源序列方法克隆基因全長(zhǎng),該基因編碼224個(gè)氨基酸。序列同源性和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析表明該基因?qū)儆贛ADS-box基因家族下SVP類(lèi)基因,命名為L(zhǎng)pSVP。實(shí)時(shí)熒光定量分析表明在花發(fā)育過(guò)程中該基因表達(dá)量先增長(zhǎng)后下降,推測(cè)其對(duì)細(xì)葉百合花發(fā)育過(guò)程具有表達(dá)調(diào)控作用。本文主要研究結(jié)果如下:1.通過(guò)花芽分化形態(tài)觀察發(fā)現(xiàn),細(xì)葉百合鱗莖在低溫貯藏期間發(fā)生花芽分化現(xiàn)象,并且隨低溫貯藏時(shí)期的延長(zhǎng)花芽分化程度加深;熒光定量分析LpSVP基因相對(duì)表達(dá)量隨低溫貯藏時(shí)期延長(zhǎng)持續(xù)下降,推測(cè)該基因作為花分生組織識(shí)別阻遏物,其下調(diào)表達(dá)響應(yīng)花芽分化進(jìn)程。2.該基因ORF全長(zhǎng)為675bp,具有高度保守的MADS區(qū)和半保守的K區(qū),屬于MADS-box基因家族。該序列與臺(tái)灣百合和麝香百合雜交品種(Liliumformosanumx Liliumlongiforum)的SVP蛋白同源性達(dá)到99%。生物信息學(xué)分析表明蛋白相對(duì)分子量為25.783kDa,理論等電點(diǎn)為5.62,為親水蛋白,沒(méi)有跨膜結(jié)構(gòu)。3.采用RT-PCR對(duì)LpSVP進(jìn)行組織特異性表達(dá)分析,結(jié)果表明LpSVP在細(xì)葉百合鱗莖、葉片、花瓣、雄蕊、雌蕊中都表達(dá),但有強(qiáng)弱之分。4.選取細(xì)葉百合花發(fā)育5個(gè)階段,即花蕾Ⅰ期,花蕾Ⅱ期,花蕾Ⅲ期,花蕾末期和盛開(kāi)期進(jìn)行qRT-PCR分析,LpSVP表達(dá)量呈現(xiàn)先增長(zhǎng)后下降的趨勢(shì),在花蕾Ⅱ期表達(dá)量最大,在盛開(kāi)期表達(dá)量最低。5.構(gòu)建植物表達(dá)載體pBI121-LpSVP-GFP,通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤(pán)轉(zhuǎn)化法將pBI121-LpSVP-GFP轉(zhuǎn)入野生煙草中,結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因株系相較野生型開(kāi)花時(shí)間推遲,花序分支變多,整體花序略為疏散。
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S682.29
【圖文】：

憬仄詡洌停粒模櫻

本文編號(hào)：2746251