【摘要】：本試驗以烏菜CBF1基因、番茄和擬南芥為研究對象,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法,將前人已構(gòu)建好的烏菜CBF1基因植物表達(dá)載體pBI121-CBF1導(dǎo)入番茄材料NT-15-G1-3和擬南芥中。獲得了轉(zhuǎn)CBF1基因擬南芥植株,測定其在低溫脅迫下的生理生化反應(yīng)。以期為深入研究烏菜CBF1基因的功能奠定基礎(chǔ),本試驗的主要研究結(jié)果如下:1)以番茄材料NT-15-G1-3子葉為外植體,采用子葉高頻再生法。通過對再生培養(yǎng)基中的激素配比進(jìn)行差異分析得到,番茄材料NT-15-G1-3子葉分化不定芽的最適培養(yǎng)基為:MS+8g/L瓊脂+30g/L蔗糖+2.0mg/L6-BA+0.3mg/LNAA;最適不定芽誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基為:MS+8g/L瓊脂+30g/L蔗糖+0.1mg/LNAA,其不定芽分化率與生根率分別為80.00%、80.00%。2)利用農(nóng)桿菌GV3101介導(dǎo)的方法,將烏菜CBF1基因?qū)敕押蛿M南芥。取收獲的T0代擬南芥種子進(jìn)行卡那霉素抗性篩選,獲得6株抗性植株,對篩選得到的植株進(jìn)行PCR檢驗,均獲得目的條帶,初步證明CBF1表達(dá)載體已導(dǎo)入擬南芥基因組中;通過半定量RT-PCR鑒定,結(jié)果顯示烏菜CBF1基因在轉(zhuǎn)基因擬南芥中得到了表達(dá)。但對得到的轉(zhuǎn)基因番茄進(jìn)行PCR檢驗,卻未得到目的條帶,這一問題有待進(jìn)一步研究。3)為鑒定烏菜CBF1基因過表達(dá)對轉(zhuǎn)基因擬南芥抗寒性影響,本試驗對野生型擬南芥和轉(zhuǎn)基因擬南芥進(jìn)行4℃低溫脅迫處理7d,測定葉片MDA、脯氨酸與可溶性糖含量及SOD活性。結(jié)果表明,在低溫脅迫下,與野生型擬南芥相比,轉(zhuǎn)基因擬南芥的MDA含量明顯低于野生型擬南芥,脯氨酸含量以及可溶性糖含量均明顯上升,SOD維持較高活性,說明轉(zhuǎn)基因植株電解質(zhì)外滲量較少,膜脂過氧化程度較低,有利于維持細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)與功能,緩解低溫造成的傷害,從而增強(qiáng)植株的抗寒能力。
【學(xué)位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S634;S641.2
【圖文】：

4.1.3 再生植株的獲得選用最適激素濃度配比的培養(yǎng)基獲得再生植株，移栽于混有營養(yǎng)土與蛭石的營養(yǎng)缽中，水澆透，正常條件下培養(yǎng)。愈傷組織誘導(dǎo)、不定芽分化、不定芽生根和再生植株移栽的情況見圖 4-1、圖 4-2、圖 4-3 和圖 4-4。

4.1.3 再生植株的獲得選用最適激素濃度配比的培養(yǎng)基獲得再生植株，移栽于混有營養(yǎng)土與蛭石的營養(yǎng)缽中，水澆透，正常條件下培養(yǎng)。愈傷組織誘導(dǎo)、不定芽分化、不定芽生根和再生植株移栽的情況見圖 4-1、圖 4-2、圖 4-3 和圖 4-4。

圖 4-2、圖 4-3 和圖 4-4。圖 4-1 誘導(dǎo)愈傷組織Fig 4-1 Induced callus圖 4-2 不定芽分化Fig 4-2 Adventitious bud differentiation

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3 陳sト

本文編號：2745851