【摘要】：目的研究生長抑制因子3(the inhibitor of growth 3,ING3)基因?qū)ξ赴㎝GC-803細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)及其初步分子機制。方法胃癌MGC-803細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染p EGFP-N1-ING3真核表達(dá)載體和p EGFP-N1空載體,熒光顯微鏡檢測其熒光蛋白表達(dá),Western Blotting法和Real-Time PCR法篩選出ING3高表達(dá)的細(xì)胞株。將MGC-803-ING3細(xì)胞作為實驗組,MGC-803-GFP細(xì)胞作為空載體組,MGC-803細(xì)胞作為空白對照組。MTT法檢測ING3對MGC-803細(xì)胞增殖的影響,流式細(xì)胞術(shù)檢測ING3對MGC-803細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡率的改變情況;劃痕和Transwell實驗檢測ING3對MGC-803細(xì)胞遷移和侵襲能力的改變情況;Real-Time PCR和Western Blotting法檢測相關(guān)基因m RNA和蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果1、胃癌細(xì)胞MGC-803經(jīng)穩(wěn)轉(zhuǎn)并篩選得到穩(wěn)定高表達(dá)的綠色熒光蛋白標(biāo)記ING3的MGC-803細(xì)胞株。2、MTT實驗結(jié)果提示,與空白對照組和空載體組比較,ING3高表達(dá)組能夠抑制胃癌MGC-803細(xì)胞增殖(P0.05)。3、細(xì)胞周期和凋亡實驗結(jié)果顯示,與空白對照組和空載體組比較,ING3高表達(dá)組細(xì)胞周期G1期百分比率升高,細(xì)胞凋亡率增加(P0.05)。4、細(xì)胞劃痕實驗和Transwell實驗結(jié)果提示,與空白對照組和空載體組比較,ING3高表達(dá)組能夠抑制胃癌MGC-803細(xì)胞遷移和侵襲(P0.05)。5、Western Blotting實驗結(jié)果顯示ING3高表達(dá)組細(xì)胞中p53、p21、BAX和caspase-3的蛋白表達(dá)水平增加,cyclin D1和CDK4蛋白表達(dá)水平降低;Real-Time PCR實驗揭示ING3高表達(dá)組細(xì)胞中p53、p21、BAX和caspase-3的m RNA表達(dá)水平增加,cyclin D1和CDK4的m RNA表達(dá)水平降低(P0.05)。結(jié)論ING3基因與胃癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移密切相關(guān),ING3過表達(dá)能夠抑制胃癌MGC-803細(xì)胞增殖,導(dǎo)致細(xì)胞G1期阻滯,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,抑制細(xì)胞遷移與侵襲,其機制可能是通過p53蛋白依賴途徑來調(diào)控的,可作為胃癌基因治療的分子靶標(biāo)。
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.2
【圖文】：

圖1 ING3過表達(dá)細(xì)胞株的篩選：ING3轉(zhuǎn)染MGC-803細(xì)胞單克隆篩選（A，熒光顯微鏡下觀察ING3單克隆Western Blotting法檢測細(xì)胞蛋白水平上ING3的表達(dá)；C，Real-Time PC平上ING3的表達(dá)，＊P<0.05 vs 空白對照組和空載體組）NG3 對胃癌 MGC-803 細(xì)胞增殖的影響 48h 時間點，ING3 組細(xì)胞增殖率明顯低于空白對照組和空載體組表明 ING3 過表達(dá)能夠抑制胃癌 MGC-803 細(xì)胞的增殖。

圖1 ING3過表達(dá)細(xì)胞株的篩選G3轉(zhuǎn)染MGC-803細(xì)胞單克隆篩選（A，熒光顯微鏡下觀察ING3單ern Blotting法檢測細(xì)胞蛋白水平上ING3的表達(dá)；C，Real-TimING3的表達(dá)，＊P<0.05 vs 空白對照組和空載體組） 對胃癌 MGC-803 細(xì)胞增殖的影響 時間點，ING3 組細(xì)胞增殖率明顯低于空白對照組和空載體 ING3 過表達(dá)能夠抑制胃癌 MGC-803 細(xì)胞的增殖。

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本文編號：2735972