【摘要】：Periostin(POTSN),中文名為骨膜蛋白,之前又被稱之為成骨細胞特異性因子2。POSTN最初從小鼠的成骨細胞克隆中得到,其參與細胞的募集、黏附和遷移等過程,是生物體中重要的細胞生長因子。近來有研究顯示,POSTN在人卵巢中有較高的表達量,其對卵泡發(fā)育的調(diào)控起到一定的作用。Platelet-derived growth factor receptor-like(PDGFRL),因其所編碼的蛋白質(zhì)與PDGFR-β亞基的胞外結(jié)構(gòu)域顯著相似,故稱為血小板衍生生長因子受體樣蛋白。PDGFRL已被證實為腫瘤抑制基因,參與PDGF信號通路的調(diào)控網(wǎng)絡。本文主要以150日齡海蘭褐蛋雞為供試材料,采用半定量RT-PCR、免疫組化實驗技術(shù)分別從mRNA水平和蛋白質(zhì)水平探究POSTN和PDGFRL基因在雞卵泡發(fā)育過程中的時空表達規(guī)律。并利用PCR-SSCP技術(shù)篩選大骨雞種群中兩個基因里與產(chǎn)蛋性狀關(guān)聯(lián)的潛在SNPs,以此期望發(fā)現(xiàn)與產(chǎn)蛋性能關(guān)聯(lián)的重要分子標記。本研究的主要實驗結(jié)果如下:(1)半定量RT-PCR實驗實驗結(jié)果顯示:雞POSTN和PDGFRL基因mRNA在150日齡海蘭褐蛋雞各等級卵泡及卵巢間質(zhì)中均有較高水平的表達,且表達水平有一定差異。POSTN基因在直徑為5-6 mm的前等級卵泡中表達量水平顯著高于F1(P㩳0.05),其他各等級卵泡間差異不顯著(P0.05)。這說明雞POSTN基因主要在雞前等級卵泡的發(fā)育調(diào)控中起一定的作用,并且隨著卵泡等級分化表達量逐漸下降。而雞PDGFRL基因表達量水平隨著卵泡的發(fā)育先升高后下降,且在靠近卵泡等級化前后時期表達水平相對較高。其中,在F5中的表達量顯著高于卵巢間質(zhì)、4-5 mm、6-7 mm、F4、F2、F1(P㩳0.05),其他各等級卵泡間差異不顯著(P0.05)。這表明雞PDGFRL基因可能參與卵泡等級化發(fā)育生長的調(diào)節(jié),并且可能參與卵泡等級化的維持。(2)免疫組化實驗結(jié)果顯示:POSTN和PDGFRL蛋白質(zhì)分子主要在150日齡海蘭褐蛋雞直徑小于4 mm前等級卵泡的卵母細胞和間質(zhì)細胞中表達,而在膜層細胞中不表達。隨著卵泡的增大,POSTN蛋白質(zhì)在顆粒細胞中可以檢測到陽性信號,而PDGFRL蛋白質(zhì)分子在顆粒細胞細胞質(zhì)中檢測到微弱的陽性信號。此結(jié)果說明,雞POSTN和PDGFRL蛋白質(zhì)可能以自分泌或旁分泌的方式參與卵泡的生長發(fā)育調(diào)控。(3)PCR-SSCP實驗并關(guān)聯(lián)性狀分析結(jié)果顯示:在POSTN基因intron2上檢測到A2727T的轉(zhuǎn)換,根據(jù)該SNP位點,將360只大骨雞分為AA和AB兩種基因型。其中AA型母雞在43、57和66周齡的產(chǎn)蛋量以及在30周齡時的蛋重都顯著高于AB型(P㩳0.05),且該SNP位點在這四個產(chǎn)蛋性狀中的加性遺傳方差百分比也相對較高。在PDGFRL基因exon2上檢測到G6761A和A6839G兩個關(guān)聯(lián)的SNPs的轉(zhuǎn)換。根據(jù)PDGFRL兩個關(guān)聯(lián)的SNPs,將樣本劃分為TT、TC和CC三種基因型。其中TT型母雞在57和66周齡的產(chǎn)蛋量顯著高于CC型的個體(P㩳0.05),而CC型的母雞在30和43周齡的體重和蛋重均顯著高于其他兩種基因型的個體(P㩳0.05),且這兩個關(guān)聯(lián)的SNP位點在這些產(chǎn)蛋性狀中的加性遺傳方差百分比也相對較高。根據(jù)所發(fā)現(xiàn)的3個SNPs組合可以得到5種基因型,其中AATT型母雞在43和66周齡時的產(chǎn)蛋量顯著高于其他四種基因型(P㩳0.05),并且AATT型母雞在30周齡的蛋重顯著高于其他四種基因型(P㩳0.05)。在今后的蛋雞育種工作中,此研究結(jié)果中所發(fā)現(xiàn)的3個SNPs可作為一個潛在的分子標記應用于產(chǎn)蛋性能的遺傳改良。
【學位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S831

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1 景洋;雞POSTN和PDGFRL基因在卵泡中的表達及其與產(chǎn)蛋性狀關(guān)聯(lián)分析[D];吉林農(nóng)業(yè)大學;2016年

本文編號：2735690