【摘要】：第一部分:5例LRBA基因突變患者臨床,分子及異常B細(xì)胞表型研究目的:探討LPS-responsive beige-like anchor protein(LRBA)基因突變患者的臨床表現(xiàn)、突變基因位點(diǎn)及B細(xì)胞表型特征,為診斷治療該病提供依據(jù)。方法:收集經(jīng)二代基因測(cè)序確診為L(zhǎng)RBA基因突變的患者的臨床病例資料,探討其主要臨床表現(xiàn)特點(diǎn);分析基因突變位點(diǎn)及一代測(cè)序法驗(yàn)證基因突變位點(diǎn);免疫印跡法檢測(cè)LRBA蛋白表達(dá)情況;行免疫學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)室檢查評(píng)估免疫功能。結(jié)果:5例患者來(lái)自四個(gè)無(wú)血緣關(guān)系家庭,均為復(fù)合雜合突變。除一個(gè)位點(diǎn)為已報(bào)道位點(diǎn)外,其余位點(diǎn)均為新發(fā)突變。臨床表現(xiàn)特點(diǎn)為自身免疫現(xiàn)象及反復(fù)感染,無(wú)腹瀉發(fā)生。突變位點(diǎn)分布于蛋白全長(zhǎng),免疫印跡法分析示例1-4無(wú)蛋白表達(dá)。免疫學(xué)特征中除下降的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)及升高的濾泡輔助性T細(xì)胞(Tfh)外,患者外周血邊緣區(qū)樣B細(xì)胞(MZ-like B細(xì)胞)及類(lèi)別轉(zhuǎn)換的記憶B細(xì)胞(sm B細(xì)胞)比例下降,前初始B細(xì)胞(pre-Na?ve B細(xì)胞)細(xì)胞和CD21低表達(dá)B細(xì)胞(CD21low B細(xì)胞)比例增高。結(jié)論:本文首次報(bào)道中國(guó)人群中LRBA基因突變患者的臨床,分子及免疫學(xué)特征,為診斷治療該病提供經(jīng)驗(yàn),提出B細(xì)胞表型異�？赡苁窃摬∽陨砻庖攥F(xiàn)象和低丙種球蛋白血癥的新提示。第二部分:1家系CTLA-4基因突變患者臨床,分子及免疫學(xué)特征研究目的:探討cytotoxic T lymphocyte antigen-4(CTLA-4)基因突變1家系的臨床特征,分子及免疫學(xué)特點(diǎn),為診斷該病提供思路。方法:以2017年10至2018年1月在重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院診治的CTLA-4基因突變患者及親屬為研究對(duì)象,分析患者臨床特征;采用流式細(xì)胞術(shù)分析外周血Treg比例及CTLA-4蛋白表達(dá);一代測(cè)序法驗(yàn)證家系成員基因突變;流式細(xì)胞術(shù)評(píng)估家系成員相關(guān)免疫功能。結(jié)果:患者主要臨床表現(xiàn)為反復(fù)腹瀉,低鉀血癥,低丙種球蛋白血癥,肝脾淋巴結(jié)腫大及淋巴細(xì)胞減少。淋巴結(jié)活檢示淋巴結(jié)反應(yīng)性增生。二代測(cè)序檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CTLA-4基因2號(hào)外顯子雜合突變。8名無(wú)癥狀家系成員一代測(cè)序法示患者母親及外公為攜帶者。免疫評(píng)估示患者及母親外周血Treg比例降低,CTLA-4蛋白平均熒光強(qiáng)度降低�；颊咄庵苎猅fh比例顯著升高。T細(xì)胞增殖功能未受損。TCRVβ亞家族克隆譜部分受損。B細(xì)胞亞群抗體分泌細(xì)胞(MZ-like B細(xì)胞和sm B細(xì)胞)比例下降,CD21low B細(xì)胞比例顯著升高。結(jié)論:本文首次報(bào)道1家系CTLA-4基因突變患者的臨床及免疫學(xué)特征,為診斷治療該病提供經(jīng)驗(yàn),提示不完全外顯率及多種因素可能參與了疾病的發(fā)生和發(fā)展。第三部分:補(bǔ)體因子I缺乏患者1例分子與臨床特征研究目的:探討1例補(bǔ)體因子I(complement factor I,CFI)缺乏患兒CFI基因突變、蛋白表達(dá)水平、免疫表型及臨床特征。方法:對(duì)1例臨床表現(xiàn)為反復(fù)頭痛伴發(fā)熱,腦電圖及腦脊液檢查異常的疑似無(wú)菌性腦膜腦炎患兒行免疫學(xué)篩查,免疫相關(guān)基因新一代測(cè)序及ELISA檢測(cè)CFI蛋白表達(dá)。結(jié)果:該患兒補(bǔ)體C3水平明顯降低,抗體水平及外周血精細(xì)免疫分型正常,經(jīng)基因分析發(fā)現(xiàn)CFI基因第5號(hào)內(nèi)含子拼接位點(diǎn)發(fā)生純合772+1GT突變,患兒父母均為該突變的攜帶者。ELISA檢測(cè)示患兒CFI蛋白表達(dá)量與正常對(duì)照相比明顯降低。結(jié)論:通過(guò)臨床、免疫學(xué)篩查、基因分析及蛋白檢測(cè),確診1例發(fā)生CFI基因突變的補(bǔ)體缺乏患兒,為此前未見(jiàn)報(bào)道的新發(fā)突變。對(duì)反復(fù)發(fā)熱伴頭痛,腦膜腦炎診斷不明確及C3降低的患兒應(yīng)考慮補(bǔ)體缺乏并進(jìn)行補(bǔ)體相關(guān)基因分析以最終確診。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R725.9
【圖文】：

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文22圖1.1 LRBA基因突變位點(diǎn)分析Figure 1.1 The mutations of LRBAgene in patients圖1.2 LRBA基因突變患者一代測(cè)序Figure 1. 2 The Sanger sequencing of LRBA-deficient patients

基因突變位點(diǎn)分析Figure 1.1 The mutations of LRBAgene in patients圖1.2 LRBA基因突變患者一代測(cè)序Figure 1. 2 The Sanger sequencing of LRBA-deficient patients

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 周麗娜;丁媛;李黎;唐文靜;趙曉東;;全血淋巴細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)精細(xì)免疫分型方法的建立[J];免疫學(xué)雜志;2015年06期

本文編號(hào)：2731744