【摘要】：甘油三磷酸�；D(zhuǎn)移酶(Glycerol-3-phosphate acyltransferase,GPAT;EC 2.3.1.15)是催化膜脂、三酰甘油(TAG)等甘油酯生物合成的關(guān)鍵酶,參與催化TAG生物合成的起始步驟。油菜籽中油脂是重要的貯藏物質(zhì),研究顯示,菜籽油脂每升高1%,理論上講等同于菜籽產(chǎn)量提高了2.5%。然而,GPAT9基因作為參與植物體中油脂代謝的重要基因之一,在甘藍(lán)型油菜中該基因還未被深入研究。為此,我們從以下3個(gè)方面對(duì)甘藍(lán)型油菜GPAT9基因進(jìn)行研究。1、克隆甘藍(lán)型油菜BnGPAT9基因(GenBank:KX344511.1)并進(jìn)行序列分析后發(fā)現(xiàn),該基因全長(zhǎng)1131bp,共編碼376個(gè)氨基酸,相對(duì)分子量為43.25kDa,等電點(diǎn)為8.97,不穩(wěn)定系數(shù)為46.46;BnGPAT9編碼的蛋白有三個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域,沒有信號(hào)肽;該蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)中α螺旋為38.03%,β折疊為21.28%,β轉(zhuǎn)角為9.04%,無規(guī)則卷曲為31.65%;BnGPAT9具有溶血磷脂酰基轉(zhuǎn)移酶(LPLAT)的結(jié)構(gòu)域LPCAT1-like和GPAT9特有的活性位點(diǎn);氨基酸序列比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明BnGPAT9與其它植物的GPAT9有很高的同源性,在生物進(jìn)化過程中具有很高的保守性。2、實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析表明,BnGPAT9基因在甘藍(lán)型油菜中的表達(dá)具有組織特異性,在開花后1-4周幼嫩的種子中表達(dá)較強(qiáng),而在莖、花、葉、根和角果皮中表達(dá)較弱;非生物逆境脅迫表達(dá)分析顯示,短期干旱和高溫能夠誘導(dǎo)和促進(jìn)葉片BnGPAT9基因的表達(dá);低溫、6-BA、ABA以及鹽脅迫抑制BnGPAT9基因表達(dá);水漬對(duì)BnGPAT9基因的表達(dá)影響呈“Z”字形。3、構(gòu)建BnGPAT9基因過表達(dá)載體pBI121-BnGPAT9,將植物表達(dá)載體導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌GV3101,采用土壤農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化擬南芥,使其在擬南芥中過表達(dá)。結(jié)果使種子的含油量較野生型明顯提高,對(duì)種子中脂肪酸組成分析顯示,BnGPAT9基因?qū)τ退岬孜锞哂休^強(qiáng)的選擇性,能明顯提高油酸含量;對(duì)亞油酸和芥酸底物的選擇性較低,使得亞油酸和芥酸含量降低。
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S565.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2728800