【摘要】：圓斑星鰈(Verasper variegatus)屬鰈形目(Pleuronectiformes)、鰈科(Pleuronectidae),星鰈屬(Verasper)。其個體較大、生長速度快、抗病力強(qiáng)、耐低溫、肉質(zhì)細(xì)嫩、富含多種維生素和微量元素,是新開發(fā)的一種具有廣闊養(yǎng)殖前景的優(yōu)良魚種。但雌雄之間在生長速度與體型上存在較大差異,因而進(jìn)行性別控制,培育單一雌性苗種,可以極大地提高其養(yǎng)殖效益。為實現(xiàn)全雌繁殖,有關(guān)性別決定與性腺分化方面的研究就具有重要理論參考價值。本研究以圓斑星鰈為研究對象,利用RACE技術(shù)獲得了圓斑星鰈sox3和sox9基因的全長序列,通過熒光定量PCR分析了其在圓斑星鰈成魚的不同組織及在幼魚的不同發(fā)育階段的表達(dá)模式,探索基因的功能。并利用組織學(xué)切片研究圓斑星鰈性腺分化過程,確定性腺開始分化的時間,為圓斑星鰈的性別決定及性腺發(fā)育機(jī)制提供基礎(chǔ)資料。試驗一本實驗利用組織學(xué)切片研究圓斑星鰈性腺分化過程,結(jié)果如下:(1)30-35日齡的仔魚,全長15.5-17.4mm,原始生殖細(xì)胞位于中腎管附近,明顯比體細(xì)胞大,細(xì)胞核大,核膜清晰,核質(zhì)透明;40-55日齡的仔魚,全長19.6-32.8mm,性腺原基長度明顯增加,寬度變化不大,生殖細(xì)胞快速增多,從性腺橫切面上明顯可見多個生殖細(xì)胞,鑲嵌于生殖腺中,此時原始性腺已經(jīng)形成,但仍無法區(qū)分精巢、卵巢;(2)60日齡雌魚,全長約36.2mm,性腺開始出現(xiàn)卵巢腔,從橫切性腺可見,性腺一端增生,并向另一端開始延伸;70日齡雌魚,全長約45.1mm,性腺從一端開始增生,向另一端持續(xù)延伸,性腺寬度進(jìn)一步增大;80日齡雌魚,全長約57.7mm,卵巢腔完全形成,卵原細(xì)胞迅速增殖,沿產(chǎn)卵板排列;90日齡雌魚,卵巢中出現(xiàn)少數(shù)卵母細(xì)胞。卵母細(xì)胞細(xì)胞核大,幾乎占據(jù)整個卵母細(xì)胞,1-3個核仁。(3)60日齡雄魚,性腺沒有明顯的分化特征;70-80日齡雄魚,性腺從一端開始增生,并向另一端延伸,體積進(jìn)一步增大,精原細(xì)胞開始迅速增殖。結(jié)論:圓斑星鰈60日齡幼魚出現(xiàn)卵巢腔,說明圓斑星鰈幼魚是在55-60日齡時,性腺開始分化的。試驗二本實驗篩選到圓斑星鰈的性別相關(guān)基因sox3,并通過RACE技術(shù)獲得其全長序列,基因全長為1723bp,包括891bp的ORF,可編碼297個氨基酸,48bp的5'UTR和784bp的3'UTR,在3'UTR中有多聚腺苷酸尾和加尾信號AATAAA。通過熒光定量PCR測定sox3基因在圓斑星鰈成魚不同組織中的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)sox3基因在圓斑星鰈的各個組織中都有不同程度的表達(dá)。在鰓和卵巢組織中檢測到較高水平的sox3轉(zhuǎn)錄,其中卵巢中的含量顯著高于其它組織。sox3基因在性腺中的表達(dá)顯示出性別兩相性差異,其在卵巢中的表達(dá)水平要顯著高于精巢,說明sox3基因與雌性性腺發(fā)育相關(guān)。通過測定sox3基因在圓斑星鰈幼魚不同發(fā)育時期(20,30,40,50,60,70,80日齡)的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)其在20到50日齡表達(dá)量逐漸下降,在60日齡時表達(dá)量突然上升,而通過性腺切片實驗發(fā)現(xiàn)圓斑星鰈幼魚在55-60日齡時性腺開始分化,推測第60天sox3的表達(dá)量上升可能與幼魚性腺分化相關(guān),sox3基因可能參與幼魚性腺分化過程。試驗三本實驗篩選到圓斑星鰈的性別相關(guān)基因sox9,并通過RACE技術(shù)獲得了全長序列,基因全長為3287bp,包括1431bp的ORF,編碼477個氨基酸,368bp的5'UTR和1488 bp的3'UTR。在3'UTR中有多聚腺苷酸尾和加尾信號AATAAA。通過熒光定量PCR測定了sox9基因在圓斑星鰈成魚不同組織中的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)sox9基因在圓斑星鰈的腦、眼、鰓、心、肝、膽、腸、精巢、卵巢、腎和肌肉等各個組織中都有不同程度的表達(dá),在鰓、腦和精巢組織中檢測到較高水平的sox9轉(zhuǎn)錄,其中精巢中的含量顯著高于其它組織。sox9基因在性腺中的表達(dá)顯示出性別兩相性差異,其在精巢中的表達(dá)水平要顯著高于卵巢,說明sox9基因與雄性性腺相關(guān)。通過測定sox9基因在圓斑星鰈幼魚不同發(fā)育時期(20,30,40,50,60,70,80日齡)的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)其表達(dá)水平變化不顯著。
【圖文】：

圖 2-1 30 日齡 原始性腺 圖 2-2 35 日齡 原始性腺PGC-原始生殖細(xì)胞 GL-原始性腺 PGC-原始生殖細(xì)胞 GC-性原細(xì)胞Fig.2-1 30th dph Primitive gonad Fig.2-2 35th dph Primitive gonadPGC-Primordial Germ Cell PGC-Primordial Germ CellGL-germ gland analage GC-germ cell圖 2-3 45 日齡 原始性腺 圖 2-4 50 日齡 原始性腺GC-性原細(xì)胞 PGC-原始生殖細(xì)胞 GC-性原細(xì)胞，PGC-原始生殖細(xì)胞

圖 2-1 30 日齡 原始性腺 圖 2-2 35 日齡 原始性腺PGC-原始生殖細(xì)胞 GL-原始性腺 PGC-原始生殖細(xì)胞 GC-性原細(xì)胞Fig.2-1 30th dph Primitive gonad Fig.2-2 35th dph Primitive gonadPGC-Primordial Germ Cell PGC-Primordial Germ CellGL-germ gland analage GC-germ cell圖 2-3 45 日齡 原始性腺 圖 2-4 50 日齡 原始性腺GC-性原細(xì)胞 PGC-原始生殖細(xì)胞 GC-性原細(xì)胞，PGC-原始生殖細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S917.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2704705