【摘要】：大豆是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)作物,其不僅具有豐富的蛋白質(zhì)和油脂,還富含維生素,異黃酮等有益身體健康的微量物質(zhì),具有極高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。然而,干旱、病害、低溫、土地鹽堿化等不良環(huán)境因素可嚴(yán)重影響大豆的正常生長(zhǎng)發(fā)育,進(jìn)而影響產(chǎn)量。研究表明,CHI查爾酮異構(gòu)酶在植物應(yīng)對(duì)生物非生物脅迫,提高植物抗逆性中起著重要作用。本實(shí)驗(yàn)以大豆Williams 82為材料,克隆了查爾酮異構(gòu)酶基因Gm CHI4A和Gm CHI4B,并對(duì)其進(jìn)行功能驗(yàn)證,主要研究結(jié)果如下:1.利用RT-PCR方法從大豆品種Williams 82中克隆了Gm CHI4A和Gm CHI4B基因。Gm CHI4A和Gm CHI4B的ORF全長(zhǎng)均為630bp,編碼209個(gè)氨基酸殘基,預(yù)測(cè)相對(duì)分子質(zhì)量分別為23.5KDa和25.56KDa。預(yù)測(cè)編碼的蛋白定位于細(xì)胞核中。氨基酸序列比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明,Gm CHI4A和Gm CHI4B基因?qū)儆贗V型查爾酮異構(gòu)酶基因。2.SDS-PAGE電泳檢測(cè)到Gm CHI4A和Gm CHI4B基因均可在原核系統(tǒng)中高效表達(dá)。3.利用熒光定量PCR技術(shù)對(duì)Gm CHI4A和Gm CHI4B基因表達(dá)進(jìn)行了分析,結(jié)果表明,Gm CHI4A和Gm CHI4B在大豆根、莖、葉、胚都有表達(dá),不具有組織特異性,且二者均在根部表達(dá)量最高。4.利用發(fā)根農(nóng)桿菌將Gm CHI4A和Gm CHI4B轉(zhuǎn)化到大豆子葉節(jié)中,誘導(dǎo)產(chǎn)生發(fā)狀根,對(duì)轉(zhuǎn)基因大豆發(fā)狀根進(jìn)行Na Cl鹽脅(濃度)迫處理,鑒定Gm CHI4A和Gm CHI4B的抗鹽性。結(jié)果表明,與對(duì)照相比,轉(zhuǎn)Gm CHI4A和Gm CHI4B的大豆發(fā)狀根的耐鹽性均顯著提高,說(shuō)明Gm CHI4A和Gm CHI4B能提高轉(zhuǎn)基因大豆根系的耐鹽性。5.轉(zhuǎn)Gm CHI4A和Gm CHI4B基因的大豆發(fā)狀根中,Gm TIP1:1,Gm SOD1,Gm SOS1的表達(dá)量顯著上升,Gm TIP1:3,Gm CAT1,Gm POD的表達(dá)量下降。6.與對(duì)照相比,轉(zhuǎn)Gm CHI4A和Gm CHI4B基因的大豆發(fā)狀根中,異黃酮總量含量有所增加。
【圖文】：

圖 2.1 GmCHI4A 和 GmCHI4B 的 RT-PCR 擴(kuò)增結(jié)果M:DNA Marker(DL2000)CHI4B RT-PCR 擴(kuò)增結(jié)果；2：GmCHI4A RT-PCR 擴(kuò)2.1 RT-PCR amplification results of GmCHI4A and GmC Marker(DL2000)；1：RT-PCR amplification results of G2：RT-PCR amplification results of GmCHI4AI4A 和 GmCHI4B 基因的序列分析及所編碼的蛋白的結(jié)I4A 的 ORF 全長(zhǎng)為 630bp，，編碼 209 個(gè)氨基酸殘基（圖C1069H1671N259O330S2，相對(duì)分子質(zhì)量為 23.50 KDa，等中半衰期大于 20h，不穩(wěn)定參數(shù)為 42.97，這類蛋白正電荷殘基（Asp+Glu）為 22，帶負(fù)電荷殘基（Asp值為 -0.151，預(yù)測(cè)為親水性蛋白，通過 Smart 網(wǎng)站預(yù)

圖 2.1 GmCHI4A 的核苷酸序列及其推測(cè)的氨基酸序列Fig 2.1 Nucleotide sequence of GmCHI4A and its deduced amino acid sequen
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S565.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2703705