【摘要】：近年來,各類抗生素在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中的大量乃至過量使用,致使環(huán)境中抗生素抗性細(xì)菌(Antibiotic resistance bacteria，ARB)和抗生素抗性基因(Antibiotic resistance genes ARGs)的污染正在加劇。作為環(huán)境中抗生素耐藥菌和抗性基因的重要源頭,畜禽環(huán)境中ARB和ARGs的相關(guān)研究較少,特別是養(yǎng)殖場(chǎng)空氣環(huán)境中ARB和ARGs污染規(guī)律未見系統(tǒng)研究。針對(duì)以上不足,對(duì)北京地區(qū)某典型蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)糞便,舍內(nèi)外空氣樣本進(jìn)行采集,對(duì)其中ARB的濃度,耐藥性以及影響因素進(jìn)行分析,在此基礎(chǔ)上,考察了 ARGs污染種類和濃度。本研究結(jié)果將為養(yǎng)雞場(chǎng)環(huán)境中ARB和ARGs對(duì)周圍環(huán)境的危害評(píng)估和制定相應(yīng)的控制措施提供基礎(chǔ)依據(jù)。首先,我們采用6級(jí)撞擊式采樣器采集雞舍內(nèi)外空氣,同時(shí)采集蛋雞糞便,對(duì)其中的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)、金黃色葡萄球菌(S)和總細(xì)菌(LB)濃度變化趨勢(shì)及其可能的影響因素進(jìn)行分析。通過K-B藥敏紙片法對(duì)雞場(chǎng)空氣和糞便中MRSA對(duì)7大類14種抗生素,青霉素(PEN)、氨芐西林(AMP)、頭孢哌酮(CFP)、鏈霉素(STR)、慶大霉素(GEN)、阿米卡星(AMK)、紅霉素(ERY)、環(huán)丙沙星(CIP)、左氧氟沙星(LEV)、諾氟沙星(NOR)、四環(huán)素(TET)、強(qiáng)力霉素(DOX)、磺胺甲惡唑(SXT)、萬古霉素(VAN)的耐藥情況進(jìn)行研究。運(yùn)用微滴數(shù)字PCR(ddPCR)技術(shù)對(duì)雞場(chǎng)舍內(nèi)外空氣和糞便樣本中的6類22種抗生素抗性基因,β-內(nèi)酰胺類(blaPSE,blaCTXM,blaTEM,blaOXA10,mecA),氨基糖苷類(aadAl,aadA2,strB,aac(6')-Ⅱ,aphA3),大環(huán)內(nèi)酯類(mpha,mefA,ermA,ermB),磺胺類(suI1,su12,dfrA1),四環(huán)素類(tetG,tetW,tetQ),萬古霉素(VanA,VanB)和兩類基因整合子(intI1,intI2)進(jìn)行定量分析。研究結(jié)果表明,空氣和糞便中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌濃度平均濃度為4.31±4.56×102CFU·m-3和3.37±4.83×104CFU·m-3,占金黃色葡萄球菌比例分別為41.99%±26.99%和22.11%±20.06%。雞舍內(nèi)空氣和糞便中總細(xì)菌濃度隨蛋雞的日齡增加而呈現(xiàn)線性升高;整體上,金黃色葡萄球菌和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌濃度隨日齡增加而增加,并受舍內(nèi)溫度和顆粒物濃度的影響。藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,本次實(shí)驗(yàn)所分離到的MRSA和金黃色葡萄球菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類、四環(huán)素類均表現(xiàn)出顯著的耐藥性,對(duì)磺胺甲惡唑和阿米卡星敏感性較高,對(duì)多肽類的萬古霉素則為完全敏感。糞便中的金黃色葡萄球菌和MRSA對(duì)頭孢哌酮的耐藥程度,隨蛋雞日齡的增加而下降,與蛋雞日齡呈顯著負(fù)相關(guān),對(duì)諾氟沙星的耐藥程度與蛋雞日齡呈顯著正相關(guān),在蛋雞日齡較小時(shí)表現(xiàn)出輕度耐藥,到成年時(shí)期則出現(xiàn)高度耐藥乃至完全耐藥情況。抗性基因究結(jié)果顯示,本研究所選取的6類ARGs的目標(biāo)基因及兩類基因整合子在雞舍空氣和糞便中大部分都可以被檢測(cè)到。其中blaTEM、aadA1、aadA2、ermB、tetW、sulI2、sulI1為空氣和糞便樣品中檢出率及豐度較高的基因。從各類抗性基因總量角度來看,依次排序?yàn)?氨基糖苷類 ＞ 四環(huán)素類＞β-內(nèi)酰胺類＞ 大環(huán)內(nèi)酯類 ＞ 磺胺類 ＞ 多肽類。所選取的六類ARGs中均有與移動(dòng)基因元件(intI1、intI2)呈顯著正相關(guān)的目標(biāo)基因,且這種正相關(guān)性在糞便樣本中檢出較多,舍內(nèi)空氣樣本次之。
【圖文】：

２．１．１采樣時(shí)間和地點(diǎn)逡逑本研宄在２０１６年７月？２０１６年１１月期間，對(duì)北京平谷地區(qū)一家規(guī)�；半u養(yǎng)殖場(chǎng)逡逑兩棟雞舍分別進(jìn)行同時(shí)采樣調(diào)查。具體坐標(biāo)位置和養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)部環(huán)境，，如圖２－１所示。雞逡逑場(chǎng)所處位置地勢(shì)平坦，其８００米輻射半徑內(nèi)不受較高建筑物及公路主千道影響。采樣當(dāng)逡逑日天氣均為晴天。主要采集雞舍內(nèi)外樣本和相應(yīng)糞便樣本。兩棟雞舍飼養(yǎng)品種均為海蘭逡逑蛋雞，所處環(huán)境及養(yǎng)殖方式相同，采取籠上養(yǎng)殖，每個(gè)雞舍內(nèi)蛋雞數(shù)量均在９３００只左逡逑右，雞舍采取機(jī)械通風(fēng)，每周帶雞消毒２次。其中ａ、ｆ分別代表空氣樣本和糞便樣逡逑本。逡逑卜邋■．逡逑（ａ）邐（ｂ）逡逑圖２－１采樣地點(diǎn)和雞場(chǎng)內(nèi)部示意圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－１邋Ｔｈｅ邋ｍａｐ邋ｏｆ邋ｓａｍｐｌｉｎｇ邋ａｎｄ邋ｔｈｅ邋ｉｎｓｉｄｅ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｃｈｉｃｋｅｎ邋ｆａｒｍ逡逑２．１．２采樣方法與培養(yǎng)方法逡逑生物氣溶膠采集在清糞、噴淋消毒等作業(yè)開始前４０分鐘完成。采集使用ＦＡ－邋ｌ撞逡逑擊式采樣器（遼陽，中國）。該儀器將空氣中的帶菌粒子按空氣動(dòng)力學(xué)直徑人小分別捕逡逑捉在各級(jí)培養(yǎng)皿上，具體粒徑分布信息如表１所示。采樣高度距地面１．５ｍ｜ｆｔ６１，細(xì)菌與逡逑抗生素耐藥菌樣本采集時(shí)間經(jīng)優(yōu)化，分別為ｌｍｉｎ和２ｍｉｎ，氣體流量２８．３邋１＾０１１１１＇每次逡逑－８邋－逡逑

逡逑隨蛋雞日齡的變化趨勢(shì)，結(jié)果如圖２－１所示。逡逑＾■ＭＲＳＡ／ＬＢ邋＾＾Ｓ／ＬＢ邋ｆ＾＼ｌ邋ＭＲＳＡ／Ｓ逡逑ｉ0２邋ｒ邐ｎ逡逑、邐Ｆ＾Ｉｍｒｓａ邐■！邋ｌｂ逡逑ｉ＇ｉｌｉｉｉｉｉｉｉ逡逑１４５ｄ邐１７６ｄ邐２０９ｄ邐２４４ｄ邐２７０ｄ邐３１邋Ｏｄ邋３４３ｄ邐３７８ｄ邐４０４ｄ逡逑濃雞Ｕ齡逡逑圖２－１雞舍內(nèi)部空氣中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）、金黃色葡萄球菌（Ｓ）和總細(xì)菌（ＬＢ）濃逡逑度及比值逡逑Ｆｉｇｕｒｅ２－邋１邋Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ａｎｄ邋ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ邋ｏｆ邋ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ邋ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ邋ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）Ｎ逡逑ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ邋ａｕｒｅｕｓ（Ｓ）邋ａｎｄ邋ｔｏｔａｌ邋ｂａｃｔｅｒｉａ邋（ＬＢ）邋ｉｎ邋ａｉｒ邋ｏｆ邋ｌａｙｅｒ邋ｈｏｕｓｅ逡逑由圖２－１可知，在蛋雞日齡分別為１４５ｄ、４０４ｄ檢出舍內(nèi)環(huán)境總細(xì)菌氣溶膠濃度最逡逑低值和最高值，即總細(xì)菌氣溶膠濃度變化范圍在0．１９ｘｌ0４？３．８ｘｌ0４ＣＦｌ＞ｉｒｆ３。整體來逡逑看，總細(xì)菌氣溶膠濃度隨日齡增加呈上升趨勢(shì)。其中，日齡分別為２０９ｄ、２７０ｄ、３７８ｄ逡逑所檢測(cè)到的總細(xì)菌氣溶膠濃度相比臨近日齡濃度略有下降，但濃度差異小于１個(gè)數(shù)量逡逑級(jí)。本研宄中所檢測(cè)到的總細(xì)菌氣溶膠濃度略低于萊蕪市蛋雞舍內(nèi)濃度１１３］，相比山西地逡逑區(qū)某牛場(chǎng)０．２１邋ｘｌ0３？５．２６ｘｌ0３ＣＦＵ．ｍ－３和羊場(chǎng)０．３７＞＜１０３？５．５５ｘｌ0３ＣＦＵ．ｍ＿３中空氣細(xì)菌濃度逡逑略高［７＼值得關(guān)注的是
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：X713

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 徐歡;車軒;史艷芬;路俊杰;張力平;;水環(huán)境中四環(huán)素抗性基因的研究進(jìn)展[J];科技創(chuàng)新與應(yīng)用;2016年15期

2 劉義;何鋼;陳介南;周再魁;王義強(qiáng);;細(xì)菌的鋅抗性基因及其在生物修復(fù)中的應(yīng)用[J];生物技術(shù)通報(bào);2008年02期

3 李任華;新的抗性基因?qū)胨疽殉蔀楝F(xiàn)實(shí)[J];雜交水稻;1991年01期

4 胡長程;我國36個(gè)小麥品種抗稈銹基因的推導(dǎo)[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);1988年05期

5 劉翠環(huán);;比利時(shí)Plant Genetic Systems公司育成抗除草劑作物[J];生物技術(shù)通報(bào);1988年02期

6 何祖華,申宗坦;秈稻品種對(duì)三個(gè)稻瘟病菌小種的抗性遺傳[J];浙江農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);1989年03期

7 劉博林,岳紹先,胡乃璧,李小兵,翟文學(xué),李諾,朱榮煥,朱立煌,毛大璋,周佩珍;龍葵Atrazine抗性基因向大豆葉綠體的轉(zhuǎn)移及在轉(zhuǎn)基因植株中的表達(dá)[J];中國科學(xué)(B輯 化學(xué) 生命科學(xué) 地學(xué));1989年07期

8 張振東;;日本稻瘟病抗病育種使用的鑒別品種、病菌小種和抗性基因記號(hào)[J];遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué);1989年01期

9 傅秀林;;吉林省水稻抗瘟育種與抗瘟品種利用[J];吉林農(nóng)業(yè)科學(xué);1989年02期

10 王振山;馬峙英;曲健木;;棉花枯黃萎病的抗性基因效應(yīng)分析[J];河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);1989年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 孫琳琳;蔣繼志;;生物信息學(xué)及其在作物抗性基因研究中的應(yīng)用[A];中國植物病理學(xué)會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

2 張建亮;喬傳令;;桃蚜抗性基因擴(kuò)增的研究[A];昆蟲學(xué)創(chuàng)新與發(fā)展——中國昆蟲學(xué)會(huì)2002年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2002年

3 徐秀紅;王元英;王洪剛;王紹美;張成省;;煙草野火病抗性基因的分子標(biāo)記與輔助選擇[A];中國煙草學(xué)會(huì)第五屆理事會(huì)第二次會(huì)議暨2005年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2005年

4 趙祥;王金花;朱魯生;;設(shè)施菜地土壤中抗生素及抗性基因多樣性及豐度的研究[A];中國土壤學(xué)會(huì)土壤環(huán)境專業(yè)委員會(huì)第二十次會(huì)議暨農(nóng)田土壤污染與修復(fù)研討會(huì)摘要集[C];2018年

5 曹清河;張安;馬代夫;謝逸萍;李秀英;王欣;李鵬;;甘薯近緣優(yōu)異抗性基因資源發(fā)掘及種間雜種新類型的創(chuàng)制[A];第五次全國植物分子育種代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2008年

6 李容柏;楊朗;陳英之;韋素美;黃鳳寬;陳喬;劉馳;黃大輝;馬增鳳;張?jiān)滦?;稻褐飛虱抗性基因分子標(biāo)記及互作關(guān)系研究[A];中國遺傳學(xué)會(huì)第八次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編（2004-2008）[C];2008年

7 李猛;王永清;田時(shí)炳;羅章勇;王小佳;;茄子青枯病抗性基因的遺傳分析及其相關(guān)AFLP標(biāo)記[A];第二屆貴州省自然科學(xué)優(yōu)秀學(xué)術(shù)論文評(píng)選獲獎(jiǎng)?wù)撐募?007年）[C];2007年

8 王大剛;趙琳;李凱;馬瑩;王麗群;楊永慶;楊云華;智海劍;;分子標(biāo)記輔助大豆花葉病毒抗性基因的聚合及育種利用[A];第十屆全國大豆學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2017年

9 袁翠平;邱麗娟;;大豆胞囊線蟲抗性基因定位與克隆研究進(jìn)展[A];全國作物生物技術(shù)與誘變技術(shù)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2005年

10 季芝娟;陳紅旗;潘學(xué)彪;馬良勇;朱旭東;楊長登;;水稻抗病多基因的聚合及應(yīng)用[A];全國植物分子育種研討會(huì)摘要集[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前5條

1 本報(bào)記者 徐書果;鄭育8號(hào):周麥豐產(chǎn)基因和百農(nóng)抗性基因的完美結(jié)合[N];河南科技報(bào);2014年

2 通訊員 梁淡麗　記者 劉傳書;中德科學(xué)家發(fā)現(xiàn)8種抗生素的抗性基因[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

3 記者 馮衛(wèi)東;美分離出小麥赤霉病抗性基因[N];科技日?qǐng)?bào);2016年

4 實(shí)習(xí)生 吳若菡 記者 張曄;改良抗性基因 我國黃瓜產(chǎn)量世界奪冠[N];科技日?qǐng)?bào);2018年

5 何豐倫;“億元基因”價(jià)值亟待挖掘[N];經(jīng)濟(jì)參考報(bào);2003年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 袁翠平;大豆胞囊線蟲病候選抗性基因Rhg4和GmHs1~(pro-1)SNP標(biāo)記的開發(fā)應(yīng)用及抗性新基因的發(fā)掘[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2007年

2 郭慧玲;Lactobacillus plantarum P-8適應(yīng)抗生素環(huán)境過程中潛在分子機(jī)制的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

3 郭寧;生物電化學(xué)強(qiáng)化氯霉素廢水處理過程中抗性基因的歸趨及轉(zhuǎn)移機(jī)制[D];山東大學(xué);2018年

4 譚明譜;水稻白葉枯病抗性基因Xa22（t）的克隆[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

5 常金華;高粱品種“河農(nóng)16”抗蚜的理化特性及抗性基因定位[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

6 胡杰;水稻褐飛虱抗性基因的遺傳定位和聚合效應(yīng)分析[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

7 侯麗媛;小偃麥滲入系對(duì)小麥真菌病害的抗性基因定位[D];山西大學(xué);2016年

8 劉鳳樓;大麥成株葉銹病抗性基因的發(fā)掘、分子標(biāo)記及遺傳研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

9 李西明;水稻白背飛虱新抗源的發(fā)掘、遺傳研究和新抗性基因分子定位[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

10 王大剛;大豆對(duì)大豆花葉病毒抗性遺傳、抗性基因精細(xì)定位及表達(dá)分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 蔣燕;摻氮生物陰極型MFC的構(gòu)建及其中抗性基因的研究[D];北京化工大學(xué);2018年

2 任少杰;功能納米材料膜修飾及其對(duì)新興污染物抗性基因的強(qiáng)化去除[D];山東大學(xué);2018年

3 張鳳麗;某冶煉廠周圍農(nóng)田土壤中抗生素抗性基因分布及其影響因素[D];鄭州大學(xué);2018年

4 呂靜靜;不同特性UF膜處理二級(jí)出水中抗性基因的效能及膜污染機(jī)制[D];北京建筑大學(xué);2018年

5 吳丹;北京地區(qū)禽場(chǎng)糞便中抗生素及抗性基因污染特性與好氧堆肥實(shí)驗(yàn)研究[D];北京化工大學(xué);2018年

6 朱春紅;上海市城市河網(wǎng)抗生素、抗性基因時(shí)空分布特征及其與環(huán)境因子相關(guān)性研究[D];華東師范大學(xué);2018年

7 尤新新;國內(nèi)城市垃圾填埋場(chǎng)中抗生素殘留與抗性基因的地域特征及理化指標(biāo)關(guān)系研究[D];華東師范大學(xué);2018年

8 脫霞霞;環(huán)丙沙星對(duì)土壤抗性基因和微生物群落的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2018年

9 羅杰;四倍體馬鈴薯“合作88”PVY、PLRV抗性基因的基因型分析[D];云南師范大學(xué);2018年

10 孫嵐明;聚合多抗番茄砧木抗性基因檢測(cè)和嫁接研究[D];廣西大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2689519