【摘要】：目的:本研究收集IBS-D肝郁脾虛證患者血清及臨床信息,通過全外顯子高通量測序技術(shù)進行全外顯子測序,運用生物信息分析技術(shù)進行多步驟的比對過濾,以期篩選出IBS-D肝郁脾虛證患者腦腸神經(jīng)遞質(zhì)相關(guān)的易感基因,為下一步基因多態(tài)性研究提供依據(jù);同時通過基因注釋篩選出IBS-D肝郁脾虛證患者腦腸神經(jīng)遞質(zhì)相關(guān)的多態(tài)性基因,分析多態(tài)性基因與IBS-D疾病特征及肝郁脾虛證候特征的相關(guān)性。方法:臨床納入IBS-D肝郁脾虛證患者,收集并填寫臨床信息和資料,采集患者外周靜脈血,提取外周血DNA,運用全外顯子捕獲技術(shù)進行高通量基因測序,測序結(jié)果與人類參考基因組序列(UCSC hg19)進行比對過濾,運用基因注釋軟件(ANNOVAR軟件)對結(jié)果進行注釋,篩選出與神經(jīng)遞質(zhì)相關(guān)的基因,進一步參考基因頻率注釋數(shù)據(jù)庫(1000 Genomes Project、ExAC數(shù)據(jù)庫)篩選單核苷酸多態(tài)性(SNP)基因,整合外顯子區(qū)域的非同義變異基因,篩選本病患者的易感基因,同時通過線性回歸方法分析非共有基因多態(tài)性與IBS-D疾病特征及肝郁脾虛證候特點的相關(guān)性。結(jié)果:1.一般情況:本研究共納入10例肝郁脾虛型IBS-D患者,其中男性5人,女性5人,平均年齡為29±9.888歲,平均病程為49.5±71.320月,平均BMI值為20.72±2.84。2.反復(fù)比對過濾測序結(jié)果,得到與神經(jīng)遞質(zhì)相關(guān)的基因共5507個,符合SNP的有5117個,其中外顯子區(qū)域非同義變異基因有94個,整合后共篩選出18個共有基因及76個非共有的多態(tài)性基因,其中共有的18個基因分別為:rs12437941-UNC13C、rs2402073-TC2N、rs8187730-SLC18A3、rs1390938-SLC18A1、rs631357-KIF17、rs4838544-KIF17、rs7202563-BAIAP3、rs1132356-BAIAP3、rs17099370-SYT16、rs8019076-SYT16、rs61821060-PPFIA4、rs902790-GPR156、rs564271-SYT8、rs822522-SYT11、rs4665855-OTOF、rs6264-DDC、rs2278973-CACNAIB、rs10791893-OR5T2。3.非同義變異的多態(tài)性基因與IBS-D疾病特征及肝郁脾虛證候特征的相關(guān)性分析;將76個非共有的多態(tài)性基因分別與病程、BMI、排便相關(guān)癥狀、IBS-SSS評分、IBS-QOL總積分及各維度評分、HAMA評分、HAMD評分進行相關(guān)性分析,得出結(jié)果如下:(1)與病程的相關(guān)分析:與病程呈線性相關(guān)的基因有rs1800762、rs1800762、rs75257288、rs55788818、rs35592366、rs7114672、rs2240229 及 rs4808383,均與病程為負相關(guān)關(guān)系。(2)與BMI的相關(guān)分析:與BMI呈線性相關(guān)的基因有rs1801474、rs9690195、rs17150243、rs2296225 及 rs6704505;其中 rs2296225、rs1801474、rs9690195、rs17150243與BMI為正相關(guān)關(guān)系,rs6704505與BMI為負相關(guān)關(guān)系。(3)與排便癥狀的相關(guān)分析:與排便次數(shù)呈線性相關(guān)的基因有rs10985765和rs17099370,其中rs10985765與排便次數(shù)為正相關(guān)關(guān)系,rs17099370與排便次數(shù)為負相關(guān)關(guān)系;與大便性狀呈線性相關(guān)的基因有rs56218866及rs6704505,均與大便性狀為正相關(guān)關(guān)系;與粘液便呈線性相關(guān)的基因有rs143100530、rs6704505、rs3811448、rs2236358、rs12224646、rs11018879、rs4859571、rs2240229、rs4808383、rs7937317、rs6590021及rs6590022,其中rs2236358與粘液便為正相關(guān)關(guān)系,余均與粘液便為負相關(guān)關(guān)系;與排便急迫感呈線性相關(guān)的有rs2270927、rs754224、rs3744215、rs4859571、rs34662058 及 rs3919907,其中 rs3744215、rs34662058 與排便急迫感為正相關(guān)關(guān)系,rs2270927、rs754224、rs4859571、rs3919907與排便急迫感為負相關(guān)關(guān)系;與排便不盡感呈線性相關(guān)的有rs4073918、rs6704505,其中rs4073918與排便不盡感為正相關(guān)關(guān)系,rs6704505與排便不盡感為負相關(guān)關(guān)系;沒有與腹痛線性相關(guān)的基因。(4)與IBS-SSS評分、IBS-QOL總積分的相關(guān)分析:與IBS-SSS評分呈線性相關(guān)的基因為rs3744215,并與IBS-SSS評分呈正相關(guān)關(guān)系;與IBS-QOL總積分呈線性相關(guān)的基因有rs3741231、rs2285906、rs3749952,均與IBS-QOL總積分為正相關(guān)關(guān)系。(5)與IBS-QOL量表各維度的相關(guān)分析:與行為障礙呈線性相關(guān)的基因有rs9690195、rs3919907,均與行為障礙為正相關(guān)關(guān)系;與自體意象呈線性相關(guān)的基因有 rs183698487、rs6704505、rs141909159、rs17854256、rs10230714、rs537916、rs1468542、rs2285906、rs112305062、rs2240227、rs2240229、rs4808383.及rs3919907,其中 rs1468542、rs2285906、rs2240227、rs2240229、rs4808383 與自體意象為正相關(guān)關(guān)系,rs183698487、rs6704505、rs141909159、rs17854256、rs10230714、rs537916、rs112305062、rs3919907與自體意象為負相關(guān)關(guān)系;與健康擔(dān)憂呈線性相關(guān)的基因有rs141909159、rs61732315、rs3741231、rs2285906、rs112305062、rs2240227 及rs3919907,其中 rs183698487、rs141909159、rs61732315、rs112305062 與健康擔(dān)憂為正相關(guān)關(guān)系,rs3741231、rs2285906、rs2240227、rs3919907與健康擔(dān)憂為負相關(guān)關(guān)系;與進食逃避呈線性相關(guān)的基因有rs7792976、rs2236358、rs35537868、rs13031859、rs10034345、rs11040249、rs2240229 及 rs4808383,其中 rs35537868、rs2240229、rs4808383 與進食逃避為正相關(guān)關(guān)系,rs7792976、rs2236358、rs13031859、rs10034345、rs11040249與進食逃避為負相關(guān)關(guān)系;與社會功能呈線性相關(guān)的基因有rs754224、rs2240229及rs4808383,均與社會功能為負相關(guān)關(guān)系;與性行為呈線性相關(guān)的基因有 rs28575545、rs6704505、rs189425146 及 rs35537868,其中 rs6704505與性行為呈正相關(guān)關(guān)系,rs28575545、rs189425146、rs35537868與性行為呈負相關(guān)關(guān)系;與關(guān)系拓展呈線性相關(guān)的基因有rs75257288、rs2236358、rs2114084、rs7114672,其中rs2114084與關(guān)系拓展為正相關(guān)關(guān)系,rs75257288、rs2236358、rs7114672與關(guān)系拓展為負相關(guān)關(guān)系;沒有與心境惡劣線性相關(guān)的基因。(6)與HAMA及HAMD評分的相關(guān)分析:與HAMA評分呈線性相關(guān)的基因有rs17099370、rs7049042、rs1403811 及 rs7847413,均與 HAMA 評分為正相關(guān)關(guān)系;與 HAMD 評分呈線性相關(guān)的基因有 rs7792976、rs10230714、rs3741231、rs10034345及 rs11040249,其中 rs3741231 與 HAMD 評分為正相關(guān)關(guān)系,rs7792976、rs10230714、rs10034345、rs11040249與HAMD評分為負相關(guān)關(guān)系。(7)22個基因與IBS-D肝郁脾虛證相關(guān)癥狀無明確相關(guān)性,分別為:rs76762496、rs17731958、rs13233513、rs77758448、rs854524、rs2240026、rs6923492、rs62000403、rs484955、rs1176744、rs12986002、rs2240154、rs55646937、rs6263、rs118160201、rs59666014、rs7873074、rs7030820、rs1966357、rs2240228、rs75716864、rs8040712。結(jié)論:1.rs12437941-UNC13C、rs2402073-TC2N、rs8187730-SLC18A3、rs1390938-SLC18A1、rs631357-KIF17、rs4838544-KIF17、rs7202563-BAIAP3、rs1132356-BAIAP3、rs17099370-SYT16、rs8019076-SYT16、rs61821060-PPFIA4、rs902790-GPR156、rs564271-SYT8、rs822522-SYT11、rs4665855-OTOF、rs6264-DDC、rs2278973-CACNAIB、rs10791893-OR5T2這18個基因可能是IBS-D肝郁脾虛證患者腦腸神經(jīng)遞質(zhì)相關(guān)的易感基因。2.IBS-D肝郁脾虛證患者外顯子區(qū)域與神經(jīng)遞質(zhì)相關(guān)的54個多態(tài)性基因與IBS-D疾病特征及肝郁脾虛證候特點具有相關(guān)性,可能與IBS-D肝郁脾虛證的發(fā)病及疾病進展有關(guān)。
【圖文】：

２．邋２．邋５．１文庫構(gòu)建逡逑采用Ｒｏｃｈｅ邋ＮｉｍｂｌｅＧｅｎ邋ＳｅｑＣａｐ邋ＥＺ邋Ｅｘｏｍｅ邋Ｖ３外顯子捕獲試劑盒，構(gòu)建插入片段逡逑１８０＿２２０ｂｐ的文庫，，具體過程如圖２。逡逑Ｉ邋？邋Ｇｗｒｖｏｖｗｔｃ邋ＤＭＡ逡逑＾邋ＦＩｃｊｕｒ？邋Ｉ；邋ＳｅｑＯａｉａ邋ＥＺ邋１－ｉｂｒａｒｖ邋ｆ？ｒ？ｉ＊ｃ？ｃｃ？ｌ．逡逑＇４＾ｉ＊ｒ邐１－邋＾５？＊？ｃ？？＊？５ｏ邐Ｓ？＾ｃ｜０＾｜＾邋ＥＺ邋Ｋ—ｓｔ＞ｉ邋０１邋ｙ邋ｏｌｉｇｏ邋ｉ＾ｏｏｌ邋ｉａ？逡逑２－邋Ｌｉｂｒａｒｙ邋■－ｒｕｔ＞ａｍｌ＞ｏｎ邐？？■＞■＿？邐ｔｏｒｇｅ＊邋ｒ？ｇｉｏｒ？？邋ｉｎ邋Ｕｉｅ邋ｇｅｎｏｍｅ．逡逑）邐＞ｊｇ＾？ｊ0ｆＣＴｎｑ＾ａ0？ｊ？0．逡逑廣邐Ｌｉｔ？？－？ｒｙ邋Ｖ＊ｍｆＭ？ｒ？？ｔ４ｔｆ＞ｎ邋＾９Ｍｒ？ｒｔＭｒｒｆ邐ｇａｉｒｆｔ邋ｓｎｎｒ￣．ｉ0￡｜逡逑）邐１？邋ｒｒ？？ｒｌ？邋ｆｒｒｔｍ邋Ｑｐｉｒ？ｏｍｉｎ邋Ｏｆｓｌ／＼逡逑３－邋ＭｙｂｒｔｃＭｚｓａｔｌｏｎ：邋ＴＭｃ邋ｓｃｑｕｃｒ＞ｃｌｎ0邋ｌｉｂｒａｒｙ邋？0邋ｆｉｙｂｒｉｄｉｚｃｄ邋ｔｏ邋ｔｔ￣ｉｏ逡逑ＳｅｑＣａｐ邋ＥＺ邋Ｌｉｂｒａｒｙ邋ｏｌｉｇｏ邋ｏｏｏｌ．逡逑ｎｒｏｆｃｓｅｅ邐ｚｉ．ｔ邋ｔｙｔｖｒ＾ｄｔｚｏＵｏｎ逡逑邐邐邋Ｍ．邋Ｂｏａｄ邋Ｃｏｉｎｕｒｃ：邋Ｃｏｐｃｕｒｏ邋ｂｅａｄｓ邋ａｒｃ邋ｕｓｏｄ邋ｔｏ邋ｐｕｌｌ邋ｄｏｗｎ邋ｃｒ＾ｃ逡逑ｃｏｒｒ＞ｆ３ｌ？ｘ邋ｏｆ邋ｏａｐｔｕｒｅ邋ｏｌｔｇｏｓ邋ａｎｄ邋ｇｅｎｏｍｉｃ；邋ＯＮＡ邋ｆｒａｇｍｅｎｔｓ．逡逑（．；邐－邋＂＾－９邐．；邐Ｓ．邋Ｗａｓｔｉｉｎｇ：邋ｌ＿ｌｎｔｘ＞Ｌｉ（ｉｃＪ邋ｆｒａ＾ｉｍｅｎｔｓ邋ａｒｅ邋ｒｅｍｕｖｅ

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【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R574.4

【參考文獻】

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本文編號：2685242