【摘要】：隨著乳腺癌早診斷、早治療理念的推廣,從1990年至2007年期間,乳腺癌的病死率降低了25%。盡管如此,乳腺癌仍然是在全球女性最常發(fā)生的惡性腫瘤之一,其中,中國每年新診斷乳腺癌的患者數(shù)目占全世界總患者數(shù)的12.2%。此外,近年來男性乳腺癌發(fā)病率也出現(xiàn)逐漸升高趨勢。盡管許多靶向治療藥物已經(jīng)被用于臨床治療,并且已經(jīng)被證實(shí)療效非常好,但是,靶向藥物并不能用于所有類型的乳腺癌患者。目前,尚沒有針對三陰性性乳腺癌有效的靶向治療藥物,而且三陰性乳腺癌對化療敏感度低,因而該類型腫瘤預(yù)后很差。Wilm’s瘤1相關(guān)蛋白(WTAP)是一種可以與Wilm’s瘤1(WT1)基因特異性結(jié)合的蛋白。WT1是一個可以抑制腎母細(xì)胞瘤發(fā)生、發(fā)展的基因,并且在胚胎腎及性腺發(fā)育過程中起重要作用。WTAP和WT1主要分布于細(xì)胞核內(nèi)與拼接因子部分共定位。在胚胎發(fā)育進(jìn)程中扮演著異常重要的角色,并且廣泛存在于許多腫瘤組織中,比如,乳腺癌、結(jié)直腸癌、膀胱癌及肺癌。近年來,很多研究已經(jīng)證明WTAP可以影響腫瘤的發(fā)生與發(fā)展過程。在膽管癌等腫瘤中WTAP均被證實(shí)有促進(jìn)腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移的作用。但是,WTAP在乳腺癌細(xì)胞中功能尚未不清楚。本文將通過一系列實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證WTAP基因在乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲過程中所發(fā)揮的作用。目的:探究WTAP對乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231增殖、遷移及侵襲能力的影響。方法:用WTAP過表達(dá)和干擾慢病毒轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231,用Real Time-PCR和Western blot檢測WTAP基因的水平,用CCK-8評價MDA-MB-231細(xì)胞增殖能力的改變;通過遷移、侵襲和劃痕實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)該細(xì)胞系遷移和侵襲能力變化。結(jié)果:用MDA-MB-231完成了WTAP過表達(dá)(231-WTAP)和干擾的(231-shWTAP)細(xì)胞株的構(gòu)建。在干擾組(231-shWTAP),WTAP mRNA水平及蛋白相對表達(dá)量均低于對照組(231-SCR),而過表達(dá)組(231-WTAP),WTAPmRNA水平及蛋白相對表達(dá)量均高于對照組(231-NC)(P0.01)。shWTAP組細(xì)胞增殖能力弱于SCR組,而WTAP組細(xì)胞增殖能力強(qiáng)于NC組(P0.01)。shWTAP組遷移和侵襲能力弱于SCR組,WTAP組遷移和侵襲能力均強(qiáng)于NC組(P0.05)。結(jié)論:WTAP能使乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲增強(qiáng)。我們將通過進(jìn)一步深入研究WTAP在乳腺癌細(xì)胞中的具體作用機(jī)制,從而為三陰性乳腺癌的的臨床治療找到新的方向!
【圖文】：

皖南醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文結(jié) 果1 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的構(gòu)建成功構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。過表達(dá)組用 231-WTAP 表示，過表達(dá)對照組用 231-NC 組表示，敲除組用 231-shWTAP 組表示，敲除對照組用 231-SCR 組表示。構(gòu)建了穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系以后用嘌呤霉素篩選 3-5 代后用于細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)。2 實(shí)時熒光定量 PCR 檢測 WTAPmRNA 水平用 MDA-MB-231 細(xì)胞提取的總 RNA 逆轉(zhuǎn)錄成 cDNA，以 -actin 為內(nèi)參，通過實(shí)時熒光定量 PCR 檢測 WTAPmRNA 水平，結(jié)果顯示，，231-WTAP 組 mRNA 相對量高于 231-NC 組（P<0.01），而 231-shWTAP 組 mRNA 相對量低于 231-SCR 組（P<0.01）（如圖 1）。

圖 2、Western Blot 檢測 WTAP 蛋白表達(dá)水平，與對照組比較，**P<0.014 WTAP 對乳腺癌細(xì)胞系 MDA-MB-231 增殖能力的影響消化細(xì)胞鋪 96 孔板，分別記錄 24h,48h,72h,96h 的吸光度值（OD 值），從24 小時開始，231-WTAP 組細(xì)胞增殖速度明顯加快，72 小時以后，三組細(xì)胞增殖速度逐漸減慢，與 231-SCR 組相比，231-shWTAP 組增殖能力明顯下降（P<0.01），而 231-WTAP 組的增殖能力顯著提高（P<0.01）（圖 3）。
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9

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本文編號：2683567