【摘要】：本研究通過在體和離體實驗,研究了三丁酸甘油酯通過轉(zhuǎn)錄因子CDX2和Sp1對草魚腸道PepT1基因表達的調(diào)控作用,揭示了草魚腸道PepT1基因的表達的調(diào)控機理。1)三丁酸甘油酯對草魚腸道PepT1、CDX2及Sp1基因表達的影響研究養(yǎng)殖實驗:本研究選取320尾初始體重為43.50±0.5g的草魚,飼喂一周,然后進行4周的攝食生長實驗。試驗以添加0.0g/kg三丁酸甘油酯的日糧為對照組,以添加0.5 g/kg、1.0 g/kg、1.5g/kg三丁酸甘油酯的日糧為實驗組,共4個處理組,每個處理組4個重復(fù),每個重復(fù)20尾魚。實驗結(jié)果表明:(1)三丁酸甘油酯能夠顯著提高草魚的增重率和特定生長率,促進草魚的生長。處理組1.0g/kg的增重率和特定生長率明顯高于對照組和其它處理組(P0.05)。(2)PepT1基因表達量隨著三丁酸甘油酯的添加量的增加先升高后下降。處理組0.5g/kg PepT1、CDX2和Sp1基因的mRNA表達量均高于其它組。說明三丁酸甘油酯能夠影響草魚腸道PepT1、CDX2及SP1基因的表達。細胞實驗:本研究培養(yǎng)了草魚腸道細胞,向培養(yǎng)基中添加濃度分別為0mM、5mM、10mM、15mM以及20mM的三丁酸甘油酯,與培養(yǎng)液充分混勻,加入到六孔板的每個孔中,實驗分成5個處理組,每個處理組4個重復(fù),培養(yǎng)24h取樣。結(jié)果顯示,(1)草魚腸道細胞呈圈形,連接緊密,排列整齊,呈鋪路石狀,細胞個體獨立,邊界明顯,內(nèi)有1~2個核仁。與鯽魚腸道上皮細胞相似。(2)添加量為5mM的處理組PepT1、CDX2和Sp1 mRNA表達量最高,顯著高于其他組(P0.05)。這揭示了三丁酸甘油酯也能夠影響草魚腸道細胞中PepT1、CDX2及Sp1基因的表達。由此可見,適量的三丁酸甘油酯能夠提高草魚的生長性能,并能提高草魚腸道和腸道細胞PepT1、CDX2和Sp1 mRNA的表達,三丁酸甘油酯的劑量誘導(dǎo)同轉(zhuǎn)錄因子CDX2、Sp1和PepT1基因表達有協(xié)同作用,揭示三丁酸甘油酯可能通過轉(zhuǎn)錄因子CDX2、Sp1調(diào)控PepT1基因的表達。2)轉(zhuǎn)錄因子CDX2/Sp1對PepT1基因表達的調(diào)控研究(1)采用染色體步移技術(shù)(Genome Walking)技術(shù)克隆草魚PepT1基因的啟動子,利用生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)草魚PepT1啟動子上存在CDX2和Sp1的結(jié)合位點,揭示轉(zhuǎn)錄因子CDX2和Sp1可能調(diào)控PepT1基因的表達。(2)哺乳動物雙雜交實驗和亞細胞共定位,發(fā)現(xiàn)CDX2/Sp1共定位在細胞核,CDX2與Sp1存在相互作用。(3)構(gòu)建PepT1啟動子及CDX2和Sp1真核表達載體,通過熒光素酶報告基因?qū)嶒?發(fā)現(xiàn)草魚轉(zhuǎn)錄因子CDX2能夠顯著上調(diào)PepT1啟動子活性(P0.05),Sp1對PepT1啟動子調(diào)控作用不明顯(P0.05),驗證了草魚轉(zhuǎn)錄因子CDX2/Sp1對PepT1基因表達有調(diào)控作用。
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S917.4

【參考文獻】

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本文編號：2666477