【摘要】：本研究通過(guò)在體和離體實(shí)驗(yàn),研究了三丁酸甘油酯通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子CDX2和Sp1對(duì)草魚(yú)腸道PepT1基因表達(dá)的調(diào)控作用,揭示了草魚(yú)腸道PepT1基因的表達(dá)的調(diào)控機(jī)理。1)三丁酸甘油酯對(duì)草魚(yú)腸道PepT1、CDX2及Sp1基因表達(dá)的影響研究養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn):本研究選取320尾初始體重為43.50±0.5g的草魚(yú),飼喂一周,然后進(jìn)行4周的攝食生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)。試驗(yàn)以添加0.0g/kg三丁酸甘油酯的日糧為對(duì)照組,以添加0.5 g/kg、1.0 g/kg、1.5g/kg三丁酸甘油酯的日糧為實(shí)驗(yàn)組,共4個(gè)處理組,每個(gè)處理組4個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)20尾魚(yú)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:(1)三丁酸甘油酯能夠顯著提高草魚(yú)的增重率和特定生長(zhǎng)率,促進(jìn)草魚(yú)的生長(zhǎng)。處理組1.0g/kg的增重率和特定生長(zhǎng)率明顯高于對(duì)照組和其它處理組(P0.05)。(2)PepT1基因表達(dá)量隨著三丁酸甘油酯的添加量的增加先升高后下降。處理組0.5g/kg PepT1、CDX2和Sp1基因的mRNA表達(dá)量均高于其它組。說(shuō)明三丁酸甘油酯能夠影響草魚(yú)腸道PepT1、CDX2及SP1基因的表達(dá)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn):本研究培養(yǎng)了草魚(yú)腸道細(xì)胞,向培養(yǎng)基中添加濃度分別為0mM、5mM、10mM、15mM以及20mM的三丁酸甘油酯,與培養(yǎng)液充分混勻,加入到六孔板的每個(gè)孔中,實(shí)驗(yàn)分成5個(gè)處理組,每個(gè)處理組4個(gè)重復(fù),培養(yǎng)24h取樣。結(jié)果顯示,(1)草魚(yú)腸道細(xì)胞呈圈形,連接緊密,排列整齊,呈鋪路石狀,細(xì)胞個(gè)體獨(dú)立,邊界明顯,內(nèi)有1~2個(gè)核仁。與鯽魚(yú)腸道上皮細(xì)胞相似。(2)添加量為5mM的處理組PepT1、CDX2和Sp1 mRNA表達(dá)量最高,顯著高于其他組(P0.05)。這揭示了三丁酸甘油酯也能夠影響草魚(yú)腸道細(xì)胞中PepT1、CDX2及Sp1基因的表達(dá)。由此可見(jiàn),適量的三丁酸甘油酯能夠提高草魚(yú)的生長(zhǎng)性能,并能提高草魚(yú)腸道和腸道細(xì)胞PepT1、CDX2和Sp1 mRNA的表達(dá),三丁酸甘油酯的劑量誘導(dǎo)同轉(zhuǎn)錄因子CDX2、Sp1和PepT1基因表達(dá)有協(xié)同作用,揭示三丁酸甘油酯可能通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子CDX2、Sp1調(diào)控PepT1基因的表達(dá)。2)轉(zhuǎn)錄因子CDX2/Sp1對(duì)PepT1基因表達(dá)的調(diào)控研究(1)采用染色體步移技術(shù)(Genome Walking)技術(shù)克隆草魚(yú)PepT1基因的啟動(dòng)子,利用生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)草魚(yú)PepT1啟動(dòng)子上存在CDX2和Sp1的結(jié)合位點(diǎn),揭示轉(zhuǎn)錄因子CDX2和Sp1可能調(diào)控PepT1基因的表達(dá)。(2)哺乳動(dòng)物雙雜交實(shí)驗(yàn)和亞細(xì)胞共定位,發(fā)現(xiàn)CDX2/Sp1共定位在細(xì)胞核,CDX2與Sp1存在相互作用。(3)構(gòu)建PepT1啟動(dòng)子及CDX2和Sp1真核表達(dá)載體,通過(guò)熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn),發(fā)現(xiàn)草魚(yú)轉(zhuǎn)錄因子CDX2能夠顯著上調(diào)PepT1啟動(dòng)子活性(P0.05),Sp1對(duì)PepT1啟動(dòng)子調(diào)控作用不明顯(P0.05),驗(yàn)證了草魚(yú)轉(zhuǎn)錄因子CDX2/Sp1對(duì)PepT1基因表達(dá)有調(diào)控作用。
【學(xué)位授予單位】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S917.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2666477