【摘要】：葡萄霜霉病是嚴(yán)重危害葡萄生長的病害之一,葡萄霜霉菌(Plasmopara viticola(Berk.andCurt.)Berl.and de Toni)能分泌Rx LR類效應(yīng)因子到植物細(xì)胞體內(nèi)發(fā)生生理生化反應(yīng),從而有效地生長繁殖,導(dǎo)致寄主感病,這些效應(yīng)因子抑制植物免疫反應(yīng),在寄主細(xì)胞中發(fā)揮毒性作用。本研究基于前期實驗室對葡萄霜霉菌效應(yīng)分子功能的篩選,從中挑選RxLR31197效應(yīng)分子進(jìn)行分析。首先克隆了葡萄霜霉菌效應(yīng)因子RxLR31197,構(gòu)建相關(guān)表達(dá)載體,進(jìn)行了RxLR31197的生物信息學(xué)分析及表達(dá)模式分析,并以小鼠促凋亡蛋白Bax為誘導(dǎo)子,分析了其對Bax誘導(dǎo)的過敏性細(xì)胞死亡的抑制作用和誘導(dǎo)煙草細(xì)胞死亡的功能,同時對其亞細(xì)胞定位分析,再以RxLR31197為誘餌,在中國野生復(fù)葉葡萄‘留壩-8’葉片酵母表達(dá)cDNA文庫中篩選互作蛋白,酵母回復(fù)驗證是否互作,最后穩(wěn)定轉(zhuǎn)化模式植物本氏煙草,對轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行抗病分析。主要取得以下結(jié)果如下:1.克隆得到葡萄霜霉菌效應(yīng)因子RxLR31197基因的序列長度為411bp,共編輯136個氨基酸。預(yù)測蛋白二級結(jié)構(gòu)具有8個α螺旋和1個β折疊,將Rx LR31197蛋白序列與其他已知無毒蛋白進(jìn)行多序列比對和系統(tǒng)進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)RxLR31197與致病疫霉Avr4的親緣關(guān)系最近,推測RxLR31197可能參與抗病反應(yīng)。2.進(jìn)行表達(dá)模式分析,誘導(dǎo)致死和抑制致死研究和亞細(xì)胞定位分析發(fā)現(xiàn):葡萄霜霉菌效應(yīng)因子RxLR31197在侵染早期受誘導(dǎo)上調(diào)表達(dá),可能抑制植物對病原菌識別產(chǎn)生PTI(PAMP-triggered immunity);RxLR31197具有部分抑制Bax引起的PCD能力,亞細(xì)胞定位顯示RxLR31197定位在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)上。3.利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選了葡萄霜霉菌效應(yīng)因子RxLR31197在中國野生葡萄中的互作蛋白:(1)Vitis vinifera vesicle-associated protein(2)chaperone protein ClpB3(3)NAC domain-containing protein(4)tRNA deaminase。4.通過煙草穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因株系,并對轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行抗病功能分析。
【圖文】：

霜霉菌效應(yīng)因子RxLR31197的擴增及PVX載體質(zhì)粒酶切檢測

葡萄霜霉菌效應(yīng)因子RxLR31197的二級結(jié)構(gòu)預(yù)測
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S436.631.1

【參考文獻(xiàn)】

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4 翟路

本文編號：2661700