發(fā)布時間：2020-05-09 15:45

【摘要】：目的:探討130例21羥化酶缺乏癥患兒的基因型及臨床表型,了解西南地區(qū)兒童CYP21A2基因突變情況,分析3種未報道突變是否致病。方法:收集2012年11月至2017年3月期間就診于重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院的130例診斷21羥化酶缺乏癥的患者為研究對象,在知情同意的原則下抽取患兒外周血2-5ml,突變檢測以基因序列設(shè)計PCR引物,在實時熒光定量PCR儀上進行擴增,進行sanger測序,缺失及重復(fù)突變首先設(shè)計引物,后行PCR擴增及多重PCR,使用DHPLC分析。按照基因突變引起酶活性喪失嚴重程度分為A組(I2g、大片段缺失、Q318X、Q319X、E6Cluster)所形成的復(fù)合雜合突變或者純合子突變,上述突變導(dǎo)致21羥化酶活性僅存0%-1%;B組為(I172N、I173N)組成的純合子以及含有I172N或者I173N的復(fù)合雜合突變,這組患兒酶活性保留1%-10%左右,C組為(P30L、P31L、282L、V281L)組成的純合子或含有以上幾種基因型組成的復(fù)合雜合子,本組酶活性可保留20%-50%。未報道突變的致病性按是否滿足生物學(xué)支持+遺傳病學(xué)支持+臨床特征,同時滿足上述3條為致病性突變的可能性較大,需進一步行基因功能測定。結(jié)果:A組初診年齡為0.07-0.17歲(26天-2 5/30月),中位年齡為0.12歲(1 15/30月),B組初診為0.14-6.1歲(1 24/30月-6 2/12歲),中位年齡為3.4歲(3 5/12歲),C組初診年齡為8-16歲,中位年齡為12.6歲(12 7/12歲),三組比較按年齡比較P值0.01,提示基因突變影響酶活性越嚴重,就診年齡越小,就診年齡可一定程度上預(yù)估疾病嚴重程度,A組中共90例患兒,其中84例為失鹽型(93.3%),B組共34例患兒,4例為失鹽型(11.7%),C組6例患兒無失鹽型患兒,三組比較P值0.01,提示酶殘留活性越低,失鹽表現(xiàn)越明顯,臨床表型越重。本研究130例患兒中檢測出30種不同的點突變(86.4%),大片段缺失與基因轉(zhuǎn)換(4.1%)。點突變最常見的是I2g(36.50%),其次為I172N(7.76%),第三位是I173N(6.80%),其他依次為Q319X(5.90%),R357W(5%),R356W(4.10%),Q318X(2.70%)、單體型(1.8%)等。在失鹽型中最常見的是I2g,其次是Q319X(5.90%),R357W(5%),R356W(4.10%),大片段缺失與基因轉(zhuǎn)換(4.1%),單純男性化患兒中檢出率最高的是I172N,第二位為I173N,非典型患兒中,檢出率最高的為P30L。檢測出的3中未報道突變中,c.879_880insCCTGATCGGTGGGACT、M1R為致病性突變可能性極大,R149H為致病性突變的可能性較大,還需進一步行功能鑒定確診。結(jié)論:基因型與臨床表型有一定的聯(lián)系,對指導(dǎo)臨床工作及產(chǎn)前診斷有重要意義;130例患兒中最常見的突變?yōu)镮2g(36.50%),其次為I172N(7.76%),第三位的是I173N(6.80%);本研究發(fā)現(xiàn)3種未報道突變,按照生物學(xué)意義+遺傳學(xué)意義+臨床特征吻合度同時滿足可判斷為致病性突變的標(biāo)準(zhǔn),c.879_880insCCTGATCGGTGGGACT、M1R為致病性突變可能性極大,R149H及為致病性突變的可能性較大,但仍需進一步行功能鑒定確診。
【圖文】：

圖 1 21 羥化酶基因的定位Fig1 localization of 21 hydroxylase既往報道較常見的基因突變既往報道較常見的基因突變在有：失鹽型常見有：IVS2(c.293-13 A/C)Gp.Q318X，p.R356W，8pb，，大片段缺失等，單純男性化型常見的有 p.I172p.I136N,非典型型常見的有：p.P30L,P31L，V281L 及 V282L 等。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R725.8

【參考文獻】

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1 王瑞芳;余永國;葉軍;韓連書;邱文娟;張惠文;梁黎黎;龔珠文;王麗麗;顧學(xué)范;;230例中國21-羥化酶缺乏癥患者基因突變譜和基因型與臨床表型關(guān)聯(lián)分析[A];第十四次全國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2015年

本文編號：2656370