【摘要】：背景與目的α-地中海貧血是一種常染色體隱性遺傳性疾病,主要表現(xiàn)為小細胞低色素性貧血。α-地中海貧血的分子基礎主要以缺失突變?yōu)橹?還有少部分的點突變,使α-珠蛋白產(chǎn)量下降,胎兒體內(nèi)過多的γ-鏈聚合形成Hb Bart's(γ4)或成人體內(nèi)過多的β-珠蛋白形成Hb H(β4),導致無效造血和紅細胞被破壞。α珠蛋白基因的表達依賴于α-珠蛋白基因上游30-70kb側(cè)翼的遠端調(diào)控元件(多物種保守序列或者MCS-R)。其中,MCS-R2(HS-40)是強大的紅系特異增強子,HS-40的核心元件約350bp,包含了幾個紅系特異轉(zhuǎn)綠因子的結(jié)合位點,尤其是GATA1/2和NF-E2。本研究目的是鑒定一個α-珠蛋白基因簇的大片段缺失家系和一個α-珠蛋白遠端調(diào)控元件(包括HS-40)的大片段缺失家系,這兩種缺失突變均減少了 α-珠蛋白基因的表達,加重了患者的臨床表型。材料與方法1.研究對象:家系A的先證者是廣西柳州的29歲男士,MCV 56.4fL,MCH 17.8pg,Hb H 6.6%,表現(xiàn)為Hb H病。家系B先證者是廣西柳州的引流的Hb Bart's水腫胎。2.實驗方法:對先證者及其家系成員進行血液學表型分析,結(jié)合表型分析結(jié)果進行傳統(tǒng)的α和β珠蛋白基因常見突變檢測(Gap-PCR和RDB)。常見的突變檢測結(jié)果不足以解釋先證者的表型,于是通過MLPA和Sanger測序分別檢測α-珠蛋白基因的拷貝數(shù)變化和HBA、HBB基因的點突變,結(jié)果顯示:家系A先證者除了有-α3.7/缺失型外,還復合一段包括兩個α基因的大片段缺失。家系B先證者除了有--SEA/缺失型外,還復合一段包括α-珠蛋白遠端調(diào)控元件HS-40的大片段缺失。由于家系B的大片段缺失位置超出了 MLPA探針范圍,接下來采用NGS捕獲測序技術(shù),分析缺失的斷裂點區(qū)域。根據(jù)NGS結(jié)果顯示的斷裂點范圍,采用Gap-PCR原理和方法,在斷裂點兩端設計多對的特異性引物,PCR產(chǎn)物測序鑒定大片段缺失斷裂點位置。結(jié)果家系A先證者表現(xiàn)為Hb H病,綜合Gap-PCR、MLPA及NGS結(jié)果顯示,其基因型為-α3.7/缺失合并一個新的α-珠蛋白基因簇大片段缺失。通過家系分析發(fā)現(xiàn),-α3.7/缺失遺傳自父親,α-珠蛋白基因簇大片段缺失遺傳自母親。通過大片段缺失斷裂點鑒定,確定該缺失范圍為chr16:197578-257871,缺失大小為60295bp,最后鑒定先證者基因型為-α37/--60。家系B先證者血紅蛋白電泳結(jié)果為Hb Bart' s 88%,Hb Portland 11%。綜合Gap-PCR、MLPA及NGS檢測結(jié)果顯示,其基因型為--SEA/缺失合并一個新的包含HS-40遠端調(diào)控元件的大片段缺失。同理,家系分析發(fā)現(xiàn)其-SEA/缺失遺傳自母親,新的大片段缺失遺傳自父親。再通過大片段缺失斷裂點鑒定,該缺失范圍為chr16:96622-176317,缺失大小為79696bp,最后確定先證者基因型為(αα)LZ/--SEA。HS-40缺失使該條染色體上的2個α-珠蛋白基因表達下降,作用等同于--SEA/缺失,并且合并了--SEA/缺失突變,解釋了先證者是嚴重的Hb Bart's水腫胎兒。結(jié)論本研究通過MLPA、NGS捕獲測序和Gap-PCR方法鑒定了一例α-珠蛋白基因簇的大片段缺失和一例包括調(diào)控α-珠蛋白基因表達的遠端調(diào)控序列HS-40的缺失,兩例缺失突變都加重了血液學表型,尤其HS-40缺失嚴重下調(diào)了 α-珠蛋白基因表達。這兩例病例豐富了 α-地中海貧血突變譜,同時再一次從人群中證實了 HS-40是α-珠蛋白基因表達非常重要的遠端調(diào)控元件。
【圖文】：

邋＇邐＇逡逑圖１－４老鼠和人的ａ－珠蛋白基因在染色體中的位置［３４］逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－４邋Ｔｈｅ邋ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ邋ｏｒｇａｎｉｓａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｍｏｕｓｅ邋ａｎｄ邋ｈｕｍａｎ邋ａ－ｇｌｏｂｉｎ邋ｃｌｕｓｔｅｒｓ逡逑１．３邋ＨｂＨ病與Ｈｂ邋Ｂａｒｔ’ｓ胎兒水腫綜合征發(fā)病機制逡逑ＨｂＨ病與Ｈｂ邋Ｂａｒｔ’ｓ胎兒水腫綜合征發(fā)病機制見圖１－５：邋ＨｂＨ病通常由三個逡逑ａ－珠蛋白基因缺陷引起，使ａ－珠蛋白鏈合成減少到正常水平的３０％，過多的｜３－逡逑珠蛋白鏈形成ＨｂＨ邋（卩４），導致無效造血和紅細胞破壞。ＨｂＨ病病人臨床表現(xiàn)為逡逑溶血性貧血，脾腫大伴隨有時脾機能亢進，有不同程度的黃疸。除此之外還有逡逑其他并發(fā)癥

圖２－１家系圖邋Ａ為家系Ａ，，邋Ｂ為家系Ｂ逡逑ｒ－ｅｒｅｅｓ邋ｏｅａｍａｎａｍ
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R556.61

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本文編號：2640779