【摘要】：SHORTVEGETATIVEPHASE(SVP)同源基因能調(diào)控植物花的形成和發(fā)育、抑制植物的開(kāi)花時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)以四季蜜芒(一年多次開(kāi)花結(jié)果)和臺(tái)農(nóng)1號(hào)芒(一年開(kāi)花結(jié)果一次)作為實(shí)驗(yàn)材料,探究SVP同源基因在芒果開(kāi)花調(diào)控中的分子機(jī)制和表達(dá)模式。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以下:1.通過(guò)RT-PCR克隆獲得四個(gè)芒果SVP同源基因的cDNA全長(zhǎng),分別命名為MiSVP1、MiSVP2、MiSVP3和MiSVP4。序列分析顯示,四個(gè)MiSVP基因的開(kāi)放閱讀框(ORF)分別為 675bp.657bp、684bp 和 591bp,分別編碼 225、219、228 和 197 個(gè)氨基酸。2.核苷酸同源性分析表明MiSVP3和MiSVP4同源性最高,為91%,其次是MiSVP從和MiSVP2,同源性為90%;系統(tǒng)發(fā)育分析表明,四個(gè)MiSVP蛋白分屬二類不同植物SVP蛋白分支,其中MiSVP1、MiSVP3和MiSVP4屬于同一分支,而MiSVP2在另一分支。經(jīng)過(guò)比較MiSVP3和MiSVP4的同源關(guān)系最近,MiSVP1與大豆(Glycine max-)的同源關(guān)系最近,MiSVP2與胡蘿卜(Dacucs caota subsp.Sativus 的同源關(guān)系最近。3.利用實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)(qRT-PCR)分析MiSVP1、MiSVP2、MiiSVP3、MiSVP4在芒果不同組織和芒果花芽分化期到開(kāi)花這段時(shí)期的表達(dá)模式,以及多效唑、2 ℃低溫、干旱、鹽脅迫等處理后,4個(gè)芒果MiSVP基因在的表達(dá)情況。(1)MiSP1、MiSVP2、MiSVP3和MiSVP4基因在四季蜜芒和臺(tái)農(nóng)1號(hào)芒成年樹(shù)的莖葉花以及芒果幼樹(shù)的葉中均有表達(dá)。在四季蜜芒中,這4個(gè)芒果MiSVP基因在芒果成熟葉片中的表達(dá)水平最高,其次是莖和10個(gè)月齡幼樹(shù)的葉片,在芒果花中的表達(dá)水平最低;在臺(tái)農(nóng)1號(hào)芒中,在10個(gè)月齡幼樹(shù)的葉片中表達(dá)水平最高,其次是成熟芒果莖和葉中,在芒果花中的表達(dá)水平最低。4個(gè)MiSVP基因的表達(dá)水平相比較發(fā)現(xiàn),MiSVP3在臺(tái)農(nóng)1號(hào)芒和四季蜜芒果中的表達(dá)量明顯高于其他基因,MiSVP4基因的表達(dá)量極低。(2)對(duì)MiSVP1、MiSVP2、MiSVP3和MiSVP4基因在一般芒果花芽分化期到開(kāi)花這段時(shí)期進(jìn)行表達(dá)分析,這4個(gè)芒果MiSVP基因在四季蜜芒和臺(tái)農(nóng)1號(hào)的葉中的表達(dá)量均于十二月份達(dá)到峰值,其次是二月份。4個(gè)基因的表達(dá)水平比較發(fā)現(xiàn),MiSVP3在臺(tái)農(nóng)和四季蜜芒果中的表達(dá)量明顯高于其他基因,MiSVP4基因的表達(dá)量極低。(3)用1000ppm濃度的多效唑處理四季蜜芒,4個(gè)芒果MiSVP基因在葉片和花中的表達(dá)水平對(duì)比對(duì)照組有所降低,在莖中的表達(dá)水平比對(duì)照組明顯提高。(4)2℃、30%PEG和30.0mmol/L NaC1分別處理四季蜜芒10個(gè)月生長(zhǎng)的幼樹(shù),MiSVP4基因的表達(dá)水平幾乎為零,并且處理后和對(duì)照組的比較變化不大。2 ℃低溫處理后MiSVP1、MiSVP2、MiSVP3基因的表達(dá)水平均有所升高,并且在對(duì)抗低溫的響應(yīng)過(guò)程具有一定的持續(xù)性。30%PEG處理0～72h的過(guò)程中MiSVP1和MiSVP2基因的表達(dá)量始終高于對(duì)照,MiSVP3基因在48h之后表達(dá)水平低于對(duì)照。300mmol/LNaC1處理后MiSVP3的表達(dá)始終高于其他基因,所有基因在抗鹽的過(guò)程中均隨著時(shí)間的延長(zhǎng)功能降低。4.構(gòu)建4個(gè)芒果MiSVP基因的真核表達(dá)載體pBiI21-MiSVP-GUS,分別提取質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌內(nèi)。
【圖文】：

圖１－１植物開(kāi)花過(guò)程中部分基因的調(diào)控關(guān)系逡逑Ｆｉｇ．邋１－１邋Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｓｏｍｅ邋ｇｅｎｅｓ邋ｉｎ邋ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ邋ｐｒｏｃｅｓｓ邋ｏｆ邋ｐｌａｎｔｓ逡逑１．４研究目的與意義逡逑ＳＫＰ作為抑制植物開(kāi)花的重要調(diào)控因子，參與擬南芥等多種植物的開(kāi)花時(shí)間和花器逡逑官形成的調(diào)節(jié)，可以抑制植物的開(kāi)花時(shí)間、調(diào)節(jié)花芽的發(fā)肓和芽的休眠、維持植物的營(yíng)逡逑養(yǎng)生長(zhǎng)。如今的結(jié)構(gòu)、功能、作用模式已經(jīng)基本明晰。從越來(lái)越多的其他植物中也逡逑發(fā)現(xiàn)了雙／３同源基因的存在，并對(duì)其進(jìn)行了功能驗(yàn)證，但還有些植物未曾找到該基因，逡逑研究發(fā)現(xiàn)在不同植物不同器官中基因的表達(dá)不同。需要分離克隆其它植物上的ＳＫＰ同源逡逑基因，進(jìn)一步深入研宄基因的功能，揭示植物開(kāi)花的秘密。逡逑到目前為止，己經(jīng)在葡萄、枳、李、獼猴桃等多種果樹(shù)植物中克隆到ＳＦＰ同源基因。逡逑基因在調(diào)控果樹(shù)植物休眠、花發(fā)育等方面也起著十分重要的作用。目前尚未發(fā)現(xiàn)芒逡逑果中基因家族的相關(guān)研究報(bào)道。前期對(duì)對(duì)芒果花轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)了部分ＳＫＰ逡逑一

邐Ｌｉｇｈｔ逡逑植物的開(kāi)花逡逑圖１－１植物開(kāi)花過(guò)程中部分基因的調(diào)控關(guān)系逡逑Ｆｉｇ．邋１－１邋Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｓｏｍｅ邋ｇｅｎｅｓ邋ｉｎ邋ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ邋ｐｒｏｃｅｓｓ邋ｏｆ邋ｐｌａｎｔｓ逡逑１．４研究目的與意義逡逑ＳＫＰ作為抑制植物開(kāi)花的重要調(diào)控因子，參與擬南芥等多種植物的開(kāi)花時(shí)間和花器逡逑官形成的調(diào)節(jié)，可以抑制植物的開(kāi)花時(shí)間、調(diào)節(jié)花芽的發(fā)肓和芽的休眠、維持植物的營(yíng)逡逑養(yǎng)生長(zhǎng)。如今的結(jié)構(gòu)、功能、作用模式已經(jīng)基本明晰。從越來(lái)越多的其他植物中也逡逑發(fā)現(xiàn)了雙／３同源基因的存在，并對(duì)其進(jìn)行了功能驗(yàn)證，但還有些植物未曾找到該基因，逡逑研究發(fā)現(xiàn)在不同植物不同器官中基因的表達(dá)不同。需要分離克隆其它植物上的ＳＫＰ同源逡逑基因，進(jìn)一步深入研宄基因的功能，揭示植物開(kāi)花的秘密。逡逑到目前為止，己經(jīng)在葡萄、枳、李、獼猴桃等多種果樹(shù)植物中克隆到ＳＦＰ同源基因。逡逑基因在調(diào)控果樹(shù)植物休眠、花發(fā)育等方面也起著十分重要的作用。目前尚未發(fā)現(xiàn)芒逡逑果中基因家族的相關(guān)研究報(bào)道。前期對(duì)對(duì)芒果花轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)了部分ＳＫＰ逡逑同源基因，本研[傇誶捌諮芯康幕∩�，进一矉伤隆芒果阉Ｐ同源基覞}�，并对茲玩D劐義閑越醒衃

本文編號(hào)：2626571