【摘要】：GID1(Gibberellin insensitive dwarf1,GID1)是赤霉素(GA)信號傳導(dǎo)途徑中的受體蛋白,是該途徑的關(guān)鍵因子之一。擬南芥中發(fā)現(xiàn)了三類編碼該蛋白的基因,分別是:GID1a、GID1b和GID1c。GID1基因在多種被子植物中已經(jīng)被克隆,但是在馬鈴薯中的報道較少。為研究GA在馬鈴薯休眠中的作用,本文克隆了11個馬鈴薯GID1s家族基因(StGID1-1~10和StGID1b);氨基酸序列分析表明,馬鈴薯GID1蛋白StGID1-1~10和StGID1b存在家族保守結(jié)構(gòu)域;qRT-PCR(Real time quantitative PCR,實(shí)時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))分析表明,StGID1-1~10和StGID1b基因在馬鈴薯塊莖不同儲藏時間中表達(dá)水平有差異;采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法獲得轉(zhuǎn)基因馬鈴薯StGID1b。本研究取得的結(jié)果如下:1.以馬鈴薯數(shù)據(jù)庫中11個GID1s家族基因核苷酸序列為探針,在NCBI中進(jìn)行BLAST比對獲得同源序列,通過系統(tǒng)發(fā)育分析,該家族基因與番茄和辣椒的同源性較高;對該家族基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析,鑒定出11種GID1s基因集中于1、6、9、11和12號染色體。2.qRT-PCR分析表明,在不同的時間段(0、20、50、61和78 d),StGID1-1~10和StGID1b基因在馬鈴薯塊莖中表達(dá)水平有差異,其中StGID1-b、StGID1-4、StGID1-6在馬鈴薯塊莖中上調(diào)表達(dá),StGID1-8、StGID1-10在馬鈴薯塊莖中下調(diào)表達(dá),而StGID1-b基因的上調(diào)程度較為明顯。3.選取上調(diào)程度最為明顯的StGID1-b基因構(gòu)建了其過表達(dá)載體pCPB-StGID1b,并用Gateway克隆技術(shù)構(gòu)建了其干擾表達(dá)載體pHellsgate8-StGID1b,采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化馬鈴薯栽培品種“隴薯3號”獲得了轉(zhuǎn)化植株,通過PCR鑒定分別獲得了4株和5株轉(zhuǎn)基因植株。4.通過對StGID1-b基因的啟動子區(qū)上游3000 bp進(jìn)行分析,獲取該基因啟動子區(qū)部分功能順式作用元件;通過對TATC-box順式作用元件的串聯(lián)重復(fù),構(gòu)建了誘餌載體pHis2.1-4TATC-box;利用酵母單雜交技術(shù)對TATC-Box與StGID1b基因的互作進(jìn)行預(yù)測,結(jié)果表明TATC-Box與StGID1b可以互作。
【圖文】：

20圖 2.1 馬鈴薯 StGID1 基因氨基酸序列的比對Fig.2.1 Comparison of amino acid sequences of StGID1 gene in potato

2.3.3 StGIDs 基因在馬鈴薯基因組的分布及其結(jié)構(gòu)分析根據(jù)對馬鈴薯中 StGID1s 基因的結(jié)構(gòu)分析可知，該基因家族在馬鈴薯中外顯子數(shù)目主要是 1 或 2 個，控制著相應(yīng)蛋白質(zhì)的編碼，本研究所研究的馬鈴薯StGID1b 基因外顯子數(shù)目為 2 個，控制編碼兩段蛋白質(zhì)，，詳細(xì)基因外顯子結(jié)構(gòu)如圖 2.3。馬鈴薯 StGID1s 基因的外顯子分布情況大體一致，StGID1-1、 StGID1-2StGID1-3、StGID1-6、StGID1-7 和 StGID1-8 均只含有一個外顯子，StGID1-4、StGID1-5、StGID1-9、StGID1-10 和 StGID1b 均含有兩個外顯子，且分布的位置相似，其長度總和在其基因全長的范圍內(nèi)或一致。圖 2.2 各物種 GIDs 基因鄰接法構(gòu)建分子進(jìn)化樹Fig.2.2 Construction of phylogenetic tree by GIDs gene adjacency method in different s
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：Q943.2;S532

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本文編號：2625716