發(fā)布時(shí)間：2020-03-31 23:45

【摘要】：茭白植株與菰黑粉菌相互作用,形成了茭白可食用的肉質(zhì)莖。研究發(fā)現(xiàn)噴施殺菌劑敵磺鈉能夠促進(jìn)茭白肉質(zhì)莖的提早形成。為了提高經(jīng)濟(jì)效益,農(nóng)戶往往噴施大量的敵磺鈉。由于敵磺鈉在茭白上并未登記使用,濫用現(xiàn)象存在很大的安全隱患。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn),茭白莖部膨大發(fā)育過(guò)程中,存在與抗病相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。推測(cè)菰黑粉菌侵染茭白植株時(shí),存在一些對(duì)茭白植株的生長(zhǎng)發(fā)育及其孕茭具有極其重要作用的免疫反應(yīng),研究抗病相關(guān)基因在茭白膨大過(guò)程中的表達(dá)模式,為深入探討茭白的孕茭機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)材料為“浙茭2號(hào)”,建立了敵磺鈉在茭白植株和茭白上的LC-MS/MS方法;通過(guò)敵磺鈉在茭白上的田間試驗(yàn),分析了敵磺鈉在茭白植株上的消解動(dòng)態(tài)規(guī)律和在茭白上的最終殘留;結(jié)合殺菌劑敵磺鈉消解動(dòng)態(tài)和最終殘留,分析了四個(gè)抗病基因的表達(dá)變化模式。結(jié)果如下:一、敵磺鈉的LC-MS/MS方法建立了敵磺鈉在茭白中的QuEChERS殘留分析方法。經(jīng)0.1%甲酸水/甲醇提取,PSA和C_(18)混合凈化后,用LC-MS/MS測(cè)定。敵磺鈉在2.5-100μg/L基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度范圍內(nèi),呈良好線性關(guān)系,r~20.99。在0.05、0.1、0.25 mg/kg三個(gè)水平添加濃度下,茭白中敵磺鈉的平均回收率為72.3%-75.5%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為8.3%-12.9%,茭白植株中敵磺鈉的平均回收率為72.3%-76.1%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為7.9%-10.6%。敵磺鈉的最小檢出量均為2.5×10~-1111 g,最低檢出濃度均為0.05 mg/kg。上述殘留分析方法符合農(nóng)藥殘留測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)精密度和準(zhǔn)確度的要求,且能夠滿足茭白植株和茭白中敵磺鈉的殘留分析要求。二、敵磺鈉的消解動(dòng)態(tài)和最終殘留研究了敵磺鈉在茭白植株中的消解動(dòng)態(tài)規(guī)律。以1.5倍最高推薦劑量噴施茭白植株,敵磺鈉在茭白植株中的半衰期為1.5 d,敵磺鈉屬于易降解農(nóng)藥(T_(1/2)30d)。最終殘留試驗(yàn)結(jié)果表明,45%敵磺鈉可濕性粉劑,有效成分用藥量為405和607.5 g a.i./ha,施藥間隔期為7 d,施藥次數(shù)為2次和3次,距末次施藥后7、14、21 d分別采樣,收獲茭白中敵磺鈉的殘留量為0.05-0.144 mg/kg。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果建議,45%敵磺鈉可濕性粉劑在茭白上的最高用量為405 g a.i./ha,施藥2次,安全間隔期為7 d。三、敵磺鈉處理對(duì)茭白Zl-RPM1.1、Zl-RPM1.2、Zl-ADR和Zl-PR1基因的誘導(dǎo)表達(dá)分析敵磺鈉噴施8葉期茭白植株后能夠明顯促進(jìn)茭白孕茭,實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組提早5 d結(jié)茭,并具有明顯的劑量效應(yīng)。熒光定量PCR結(jié)果表明:敵磺鈉噴施一周內(nèi)逐漸消解,期間Zl-RPM1.1、Zl-RPM1.2、Zl-ADR基因的表達(dá)量逐漸上調(diào),Zl-PR1基因的表達(dá)量反而下調(diào),可能與莖部菰黑粉菌生長(zhǎng)受到抑制后的恢復(fù)生長(zhǎng)的刺激調(diào)節(jié)相關(guān)。敵磺鈉最終殘留分析中,Zl-RPM1.1、Zl-RPM1.2和Zl-ADR基因表達(dá)模式與處理濃度呈正相關(guān),濃度越大,次數(shù)越多,基因誘導(dǎo)表達(dá)量越高,但當(dāng)濃度過(guò)高時(shí),基因的誘導(dǎo)表達(dá)不明顯;Zl-PR1基因的表達(dá)模式差異明顯,高劑量處理誘導(dǎo)表達(dá)量最高,可能與敵磺鈉處理對(duì)茭白孕茭的調(diào)節(jié)作用相關(guān)。
【圖文】：

生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的種類多達(dá) 20 多種[11]。浙江省農(nóng)藥鑒定管理所曾江省的茭白，檢測(cè)數(shù)據(jù)顯示，在 24 個(gè)樣品中，有 16 個(gè)樣品比 76.2%[8]。截止目前，在中國(guó)農(nóng)藥信息網(wǎng)上，茭白登記農(nóng)藥只維菌素、甲維鹽、噻嗪酮、丙環(huán)唑、咪鮮胺[12]。因此，在茭現(xiàn)象十分普遍�；氢c簡(jiǎn)介及殘留現(xiàn)狀磺鈉的簡(jiǎn)介鈉（Fenaminosulf），全稱對(duì)二甲基氨基苯重氮磺酸鈉，是一廣譜殺菌劑，又稱敵克松 (Dexon)。1958 年由西德拜耳首次分子式：C8H10N3O3SNa，分子量：251.24。純品為淡黃色結(jié)色無(wú)味粉末，約 200℃分解。25℃水中溶解度為 20～30 g/L；如二甲基甲酰胺、乙醇等，不溶于苯、乙醚、石油。水溶液呈解，可加亞硫酸鈉使之穩(wěn)定，，它在堿性介質(zhì)中穩(wěn)定[14]。

2 表 2.2 敵磺鈉的離子對(duì)和碰撞電壓Table 2.2 The MRM transition、collosion energe(CE) of fenaminosulf化合物compound母離子Parent ion（m/z）子離子Product ion（m/z）駐留時(shí)間Dwell time /s錐孔電壓Cone voltage/V碰撞電壓Collosionenergy /eV敵磺鈉fenaminosulf251.90148.10* 0.165 28 6172.11 0.165 28 6注：*為定量離子2.3 結(jié)果2.3.1 敵磺鈉色譜圖在上述實(shí)驗(yàn)條件下，圖 2.1 為敵磺鈉的空白基質(zhì)樣品和 10 μg /L 基質(zhì)加標(biāo)樣品總離子流色譜圖，由圖可以看出敵磺鈉色譜峰形良好，保留時(shí)間適中，空白基質(zhì)樣品色譜圖顯示，敵磺鈉無(wú)內(nèi)源性雜質(zhì)干擾。stem bract
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)計(jì)量大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S481.8

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本文編號(hào)：2609735