【摘要】：原花青素(PAs,也稱縮合單寧)大量存在于柿果肉“單寧細(xì)胞”液泡內(nèi),因其與口腔中蛋白質(zhì)發(fā)生聚合反應(yīng)產(chǎn)生收斂性從而導(dǎo)致澀感。PAs前體物質(zhì)生物合成、聚合與存儲(chǔ)部位不同,其生物合成發(fā)生在細(xì)胞質(zhì),而聚合和存儲(chǔ)發(fā)生在液泡。在擬南芥、葡萄中的研究表明,谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(Glutathione-S-transferase,GST)參與花青素及PAs前體物質(zhì)向液泡轉(zhuǎn)運(yùn),柿GST基因的功能尚不明確。本文以中國甜柿‘鄂柿1號(hào)’、日本甜柿‘陽豐’和非完全甜柿‘磨盤柿’為試材,探究DkGST1基因在跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)PAs過程中的作用,以期為闡明柿PAs代謝調(diào)控機(jī)理提供科學(xué)依據(jù)。主要結(jié)果如下。1.可溶性單寧含量在三種脫澀類型柿品種果實(shí)中差異較大,果實(shí)發(fā)育過程中總體均呈下降趨勢。日本甜柿在花后8周左右降至0.2%以下,味覺器官幾無澀感。中國甜柿直到花后25周左右才降至0.2%左右,而不溶性單寧在15周后呈現(xiàn)上升趨勢。非完全甜柿其可溶性單寧含量在花后27.5周仍處于0.6%左右,需經(jīng)脫澀處理才能食用。2.DkGST1表達(dá)量以萼片最高,其次為葉片;DkGST1表達(dá)模式在中國甜柿和日本甜柿差別明顯,在日本甜柿果實(shí)發(fā)育過程中的表達(dá)量持續(xù)降低,可溶性與不溶性單寧含量也隨之持續(xù)降低;中國甜柿果實(shí)的表達(dá)量從花后10周起有上升趨勢,而可溶性單寧含量有減少的趨勢。3.亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示DkGST1定位于煙草葉肉細(xì)胞液泡膜,與其功能特性相符;農(nóng)桿菌介導(dǎo)瞬時(shí)超表達(dá)與干涉表達(dá)DkGST1可顯著提高與降低柿葉片可溶性單寧含量。4.通過染色體步移法獲得DkGST1的986 bp啟動(dòng)子序列,其含有與MYB、WRKY、MYC轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的順式作用元件,表明其可能受MYB等轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控;GUS活性分析結(jié)果顯示該啟動(dòng)子包含轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)。綜上所述,DkGST1在中國甜柿和日本甜柿中的表達(dá)模式有別,可能與兩者不同的單寧代謝過程有關(guān);該基因編碼的GST作為液泡膜蛋白可促進(jìn)PAs積累,可能與其對(duì)PAs前體跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān)。
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柿原花青素前體跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因 DkGST1 的表達(dá)分析及功能驗(yàn)證1 前言.1 課題的提出柿（Diospyros kaki Thunb.）屬柿科（Ebenaceae）柿屬（Diospyros L.）果物。其原產(chǎn)中國，，主要分布在包含韓國和日本在內(nèi)的東亞地區(qū)（裴_

本文編號(hào)：2602393