【摘要】：目的:現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為乳腺增生與癌變之間存在一定的關(guān)聯(lián),肝郁證是乳腺增生性疾病重要的中醫(yī)證型之一。臨床和實(shí)驗(yàn)顯示,疏肝解郁方-柴胡疏肝散防治乳腺增生性疾病有一定的療效。本文提出肝郁、乳腺增生與乳腺癌變之間可能存在某種的關(guān)聯(lián)的推測(cè),擬在束縛肝郁證雌鼠模型復(fù)制的基礎(chǔ)上,觀察該模型大鼠性腺軸以及乳腺的變化,在分子層面上探查了其乳腺增生及其相關(guān)癌前基因的表達(dá);進(jìn)一步基于方證相關(guān)原理,觀察了因證治方柴胡疏肝散對(duì)該模型雌鼠肝郁證候和性腺軸的影響及對(duì)乳腺增生的防治作用機(jī)制。論文包括文獻(xiàn)綜述和實(shí)驗(yàn)研究?jī)蓚�(gè)部分。文獻(xiàn)綜述主要圍繞中醫(yī)對(duì)乳腺增生癥的防治和乳腺增生與乳腺癌之間的關(guān)系進(jìn)行了相關(guān)文獻(xiàn)的搜集與整理。實(shí)驗(yàn)研究探查了束縛肝郁模型雌鼠中醫(yī)證候、乳腺增生及其癌前病變的分子機(jī)制及柴胡疏肝散的相關(guān)作用。方法:大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、肝郁模型組(以下簡(jiǎn)稱模型組)、柴胡疏肝散大劑量組(柴大組)、柴胡疏肝散小劑量組(柴小組)。除正常組外,其余三組按慢性束縛應(yīng)激法連續(xù)造模4周。造模第2周末,柴大組和柴小組分別按相當(dāng)于藥材1.24g/kg、0.31g/kg的劑量(相當(dāng)于成人用量的2倍和0.5倍)給予柴胡疏肝散灌胃,每日1次,連續(xù)2周;正常組和模型組給予等量的蒸餾水。于造模第27天制備各組大鼠陰道涂片觀察動(dòng)情周期情況,選擇動(dòng)情前期/動(dòng)情間期(實(shí)驗(yàn)第28-30d)進(jìn)行麻醉處殺,經(jīng)腹主動(dòng)脈取血,分離血清和血漿;低溫下取下丘腦和乳腺組織,待測(cè)。觀測(cè)指標(biāo):(1)肝郁證相關(guān)外觀行為指標(biāo):1)造模期間觀察并記錄各組大鼠每周外觀行為和體重的變化,于2周末和4周末做糖水偏嗜試驗(yàn),4周末做曠場(chǎng)試驗(yàn);2)肝郁證相關(guān)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo):下丘腦促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)、血清促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)、皮質(zhì)酮/腎上腺酮(CORT)、血漿5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、腎上腺素(E)、去甲腎上腺素(NE);(2)性激素及其調(diào)節(jié)軸指標(biāo):下丘腦促性腺激素釋放激素(GnRH)、血清促卵泡刺激素(FSH)、促黃體生成素(LH)、泌乳素(PRL)、孕酮(P)、睪酮(T)、雌二醇(E2);(3)乳腺器官:乳腺病理組織學(xué)觀察;(4)癌前基因指標(biāo):血清三葉因子1(TFF1)、三葉因子3(TFF3),乳腺基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)、存活素(Survivin);(5)PRL介導(dǎo)的信號(hào)通路相關(guān)指標(biāo):泌乳素受體(PRLR)、AKT、BAD、Bcl-2、MDM2、P53。數(shù)據(jù)處理:所得數(shù)據(jù)均以x±S表示,采用單因素方差分析(one-way ANOVA)進(jìn)行檢驗(yàn)后,多組間比較采用Student Newman Keuls Test檢驗(yàn)。全部數(shù)據(jù)采用SPSS 20.0 for windows軟件統(tǒng)計(jì)處理。所有圖表均用GraphPad Prism 7軟件制作。結(jié)果:(1)肝郁證相關(guān)指標(biāo):1)一般外觀行為學(xué)的變化:與正常組相比,模型組大鼠第2周～第4周各組行為評(píng)分明顯升高(p0.01),體重明顯降低(p0.01);第2周糖水偏嗜度明顯升高(p0.01),第4周糖水偏嗜度明顯降低(p0.01);第4周曠場(chǎng)試驗(yàn)中央?yún)^(qū)停留時(shí)間、爬格數(shù)、爬格里程數(shù)均明顯降低(p0.01)。與模型組比較,柴大組大鼠第3～4周各組行為評(píng)分明顯降低(p0.01),第4周體重明顯增加(p0.01);柴大組大鼠第4周糖水偏嗜度明顯升高(p0.01),曠場(chǎng)試驗(yàn)中央?yún)^(qū)停留時(shí)間、爬格數(shù)、爬格里程數(shù)明顯升高(p0.01);柴小組大鼠上述指標(biāo)未見(jiàn)明顯變化。2)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的變化:與正常組比較,模型組大鼠下丘腦CRH、血中ACTH、CORT、E表達(dá)明顯升高(p0.01 或p0.05)、血中 5-HT、NE、DA 含量明顯降低(p0.01 或p0.05)。與模型組比較,柴大組大鼠下丘腦CRH、血中ACTH和CORT表達(dá)明顯降低(p0.01或p0.05)、血中5-HT、NE含量明顯升高(p0.01或p0.05),柴小組大鼠血中CORT表達(dá)降低(p0.05),NE、DA表達(dá)明顯升高(p0.01);與柴大組比較,柴小組大鼠下丘腦CRH、血中DA表達(dá)明顯升高(p0.01或p0.05)、血中5-HT明顯降低(p0.01)。(2)性激素及其調(diào)節(jié)激素的變化:與正常組比較,模型組大鼠下丘腦GnRH、血清FSH、LH、PRL、T、E2、P表達(dá)明顯升高(p0.01)。與模型組比較,柴大組大鼠下丘腦GnRH,血清LH、PRL、T、P表達(dá)明顯降低(p0.01或p0.05),柴小組血清LH、PRL、T、E2表達(dá)明顯降低(p0.01或p0.05)。與柴大組比較,柴小組下丘腦GnRH表達(dá)明顯升高(p0.01);E2/P的比值在四組間均無(wú)明顯差異(p0.05)。(3)乳腺器官的變化:鏡下觀察到正常組大鼠乳腺腺泡形狀規(guī)則,腺導(dǎo)管管腔無(wú)擴(kuò)張,腺泡和導(dǎo)管內(nèi)無(wú)分泌物。與正常組比較,模型組大鼠乳腺腺泡形狀不規(guī)則,腺導(dǎo)管管腔擴(kuò)張,腺泡和導(dǎo)管內(nèi)分泌物增加。與模型組比較,柴大組大鼠乳腺腺泡形狀見(jiàn)規(guī)則,但仍伴有不規(guī)則腺泡,腺泡和導(dǎo)管內(nèi)分泌物見(jiàn)少,柴小組大鼠乳腺腺泡見(jiàn)規(guī)則,以不規(guī)則腺泡居多。(4)乳腺癌前基因的變化:與正常組比較,模型組大鼠乳腺Survivin和TIMP-2表達(dá)明顯升高(p0.01)、血清TFF1、TFF3表達(dá)明顯降低(p0.05)。與模型組比較,柴大組大鼠乳腺Survivin和TIMP-2表達(dá)均明顯降低(p0.01),柴小組TIMP-2表達(dá)明顯降低(p0.01)。與柴大組比較,柴小組大鼠乳腺Survivin表達(dá)明顯升高(p0.01)。(5)PRL介導(dǎo)的信號(hào)通路相關(guān)指標(biāo)的變化:與正常組比較,模型組大鼠乳腺PRLR、AKT、BAD、Bcl-2表達(dá)明顯升高(p0.01或p0.05),MDM2和P53未見(jiàn)明顯變化。與模型組比較,柴大組和柴小組大鼠乳腺PRLR、AKT、BAD表達(dá)明顯降低(p0.01),柴小組Bcl-2表達(dá)降低(p0.05)。與柴大組比較,柴小組Bcl-2表達(dá)降低(p0.05)。結(jié)論:慢性束縛法復(fù)制的肝郁證模型雌性大鼠呈現(xiàn)中醫(yī)證候相關(guān)的外觀行為和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的改變,并伴有性腺軸功能的亢進(jìn)、乳腺病理增生;乳腺組織伴有相關(guān)癌前基因表達(dá)及其PRL相關(guān)信號(hào)通路的異常,提示肝郁證乳腺增生可能存在癌前病變的分子機(jī)制。柴胡疏肝散不僅對(duì)肝郁證雌性大鼠的中醫(yī)證候和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)具有較好的改善作用,而且對(duì)模型大鼠的性腺軸異常和乳腺增生也有一定的防治作用,其在改善模型大鼠乳腺增生和降低血清PRL的同時(shí),調(diào)節(jié)模型大鼠乳腺促癌/抑癌基因的表達(dá),涉及對(duì)PRL相關(guān)信號(hào)通路的調(diào)節(jié)。研究結(jié)果為中醫(yī)“肝郁證—血清PRL↑—乳腺增生—相關(guān)癌基因異常表達(dá)—柴胡疏肝散調(diào)節(jié)作用”的推測(cè)提供了 一定的生物學(xué)證據(jù)。該研究為認(rèn)識(shí)中醫(yī)“肝郁”與女性乳腺增生性疾病關(guān)聯(lián)和中醫(yī)辨證論治“未病防變”的科學(xué)內(nèi)涵提供了現(xiàn)代病生理及分子生物學(xué)基礎(chǔ),為柴胡疏肝散防治乳腺癌的效用機(jī)制提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【圖文】：

第一周第二周第三周第四周逡逑圖１－１各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)活動(dòng)狀態(tài)的積分變化逡逑各組大鼠的情緒睡眠評(píng)分見(jiàn)表１－２和圖１－２。由表１－２可以看出，與正常組比較，模逡逑型組大鼠第一周情緒睡眠評(píng)分未見(jiàn)明顯變化0７＞０．０５），第二周至第四周情緒睡眠評(píng)分逡逑均明顯升高（／Ｋ０．０１）；與模型組比較，柴大組第三周、第四周情緒睡眠評(píng)分明顯降低逡逑（ｐ＜０．０１）；與柴大組比較，柴小組第三周、第四周情緒睡眠評(píng)分降低（尸＜0．0５）。逡逑由圖１－２可以看出，，正常組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)的情緒睡眠積分未見(jiàn)明顯變化，模型組逡逑和各給藥組大鼠第一周至第二周的情緒睡眠積分均升高，模型組和柴小組第三周積分變逡逑化相近，柴大組第三周后積分降低。逡逑表１－２各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)情緒睡眠的積分變化（５±ｓ，邋ｎ＝１０）逡逑￣ＨＩ邐ｉｉｉ邐第１周邐第２周邐第３周邐第４周逡逑正常組邐１．９３士０．２１邐１．９７±0．１１邐２．０７±0．２４邐１＿９９±０．２９逡逑模型組邐一邐１．９８±０．３３邐２．７３±０．７６＊＊邐３．６７±0．２０＊＊邐３＿９９±０．１７”逡逑柴大組邐１．２４邋ｇ／ｋｇ邐１．９４±０．３２邐２．７２±0．５３

第二周第三周第ｋ周第０周逡逑圖１－２各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)情緒睡眠的積分變化逡逑各組大鼠的飲食大便評(píng)分見(jiàn)表１－３和圖１－３。由表１－３可以看出，與正常組比較，模逡逑型組大鼠第一周至第四周的飲食大便積分明顯升高０＜0．0１）；與模型組比較，柴大組逡逑第三周至第四周飲食大便積分降低（ｐ＜0．0５），以第四周降低最為明顯（ｐ＜０．０１）；與柴逡逑大組比較，柴小組第三周至第四周飲食大便積分升高（Ｐ＜0．0５）。逡逑由圖１－３可以看出，正常組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)的飲食大便積分未見(jiàn)明顯變化，模型組逡逑和各給藥組大鼠在第一周和第二周的飲食大便積分升高，模型組和柴小組第三周后積分逡逑變化相近，柴大組第三周后積分降低。逡逑表１－３各}D大鼠不同時(shí)間點(diǎn)飲食大便的積分變化Ｕ±ｓ，邋ｎ＝１０）逡逑組別邐ｉｌ邐第１周邐第２周邐第３周邐第４周逡逑正常組邐＝邐１．０３±０．１３邐１．０５±０．１４邐１．１１±０．３９邐１．１７±０＿１７￣逡逑模型組邐一邐１．９４±０．３０”邐２．８９±０．４７＊＊邐３．０３±０．３邋廣邐３．０７邋士邋０．６３”逡逑柴大組邐１．２４邋ｇ／ｋｇ邐１．９３±0．４９＂邐２．８８±０．２２＊＊邐２．３５±０．５２＊＊＃邐１．９９±０．２１
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2599662