【摘要】：背景與目的結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)是我國常見的惡性腫瘤,它的發(fā)生是多基因、多因素參與的復(fù)雜過程,其中錯配修復(fù)蛋白缺失(mismatch repair,MMR)引起的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(microsatellite instability,MSI)是一個重要機(jī)制。有研究顯示,MSI結(jié)直腸癌有著獨(dú)特的臨床病理特征,但由于地域和民族的差異,這些結(jié)論存在一定的爭議。RAS(包括KRAS、NRAS)基因是目前結(jié)直腸癌基因靶向治療研究的熱點(diǎn)。盡管關(guān)于KRAS的報道較多,但是大部分研究的標(biāo)本量都不是很大。而且,dMMR與RAS突變的相關(guān)性也需要進(jìn)一步的探討。BRAF基因是RAF家族成員。BRAF突變準(zhǔn)確和快速的檢測,對結(jié)直腸癌和甲狀腺乳頭狀癌患者的診斷及治療有著重要的意義。有國外研究顯示BRAF VE1免疫組化抗體檢測BRAF V600E基因突變也能取得較滿意的結(jié)果,但是對于結(jié)直腸癌和甲狀腺乳頭狀癌組織,具體染色條件及陽性判讀標(biāo)準(zhǔn)還存在一定的爭議。因此,我們收集原發(fā)性結(jié)直腸癌病人的臨床病理數(shù)據(jù),分析dMMR、RAS基因突變與臨床病理特征的相關(guān)性,探討dMMR和RAS基因突變對結(jié)直腸癌病人預(yù)后的影響。同時,本組實(shí)驗(yàn)用全自動免疫組化染色儀探索結(jié)直腸癌和甲狀腺乳頭狀癌石蠟包埋組織合適的BRAF VE1抗體免疫組化染色條件并評估免疫組化方法的敏感性和特異性。材料與方法1.結(jié)直腸癌患者錯配修復(fù)蛋白缺失及RAS基因突變情況的檢測1.1收集原發(fā)性結(jié)直腸癌樣本813例,并對病人進(jìn)行隨訪。1.2通過免疫組化方法檢測四個錯配修復(fù)蛋白MLH1、PMS2、MSH2和MSH6的表達(dá)情況。1.3通過ARMS-PCR方法檢測RAS基因(包括KRAS、NRAS)的突變情況。2.結(jié)直腸癌及甲狀腺乳頭狀癌中BRAF V600E突變情況的檢測2.1選用8例經(jīng)測序證實(shí)BRAF狀態(tài)的標(biāo)本(2例為BRAF V600E突變型結(jié)直腸癌,2例為BRAF野生型結(jié)直腸癌,2例為BRAF V600E突變型甲狀腺乳頭狀癌,2例為BRAF野生型甲狀腺乳頭狀癌),進(jìn)行BRAF V600E蛋白檢測探索最佳的染色條件。2.2選取最佳的條件,對255例(123例結(jié)直腸癌和132例甲狀腺乳頭狀癌)組織用VENTANA全自動染色機(jī)進(jìn)行免疫組化染色。2.3用ARMS-PCR法檢測255例腫瘤組織中BRAF V600E突變狀態(tài),免疫組化和ARMS-PCR不一致的病例使用Sanger測序方法進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果1.813例樣本中,15.18%(121/797)的樣本存在dMMR。dMMR好發(fā)于低年齡患者(50歲)及右半結(jié)腸,且在粘液腺癌、分化差及早期腫瘤分期的患者中更常見。2.KRAS突變率為42.56%(346/813),NRAS突變率為3.69%(30/813)。KRAS突變與粘液腺癌、早期腫瘤分期、非吸煙患者及結(jié)直腸癌家族史有關(guān)。NRAS突變與各臨床病理參數(shù)無相關(guān)性。3.dMMR和KRAS基因突變與病人的預(yù)后無關(guān)。4.結(jié)直腸癌和甲狀腺乳頭狀癌組織BRAF V600E免疫組化最適合的抗原修復(fù)時間分別為32min和64min。5.與ARMS/Sanger測序法比較,免疫組化法檢測結(jié)直腸癌和甲狀腺乳頭狀癌BRAF V600E基因突變的一致性分別為99.2%(122/123)和96.2%(127/132)。結(jié)論1.存在dMMR的結(jié)直腸癌有獨(dú)特的臨床病理特征,包括好發(fā)于低年齡患者及右半結(jié)腸,傾向于低分化及黏液腺癌等。2.KRAS基因突變好發(fā)于粘液腺癌、非吸煙患者及結(jié)直腸癌家族史的患者,NRAS突變與各臨床病理參數(shù)無相關(guān)性。3.dMMR、KRAS和NRAS基因突變與結(jié)直腸癌患者的預(yù)后無關(guān)。4.應(yīng)用BRAF VE1抗體免疫組化法檢測BRAF V600E突變與基因檢測方法具有很高的一致性,值得在臨床推廣。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.34

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2595070