【摘要】：以‘荸薺’和‘東魁’楊梅果實為研究材料,利用RT-PCR和RACE技術(shù)克隆得到果糖激酶基因MrF RK2的全長c DNA序列。MrF RK2全長1 279 bp,ORF閱讀框全長996 bp,3′端非編碼區(qū)227bp,5′端非編碼區(qū)56 bp,編碼332個氨基酸殘基。通過氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)Mr FRK2含有pfk B碳水化合物磷酸果糖激酶家族高度保守的1個ATP結(jié)合域和2個底物結(jié)合域;Mr FRK2與楊樹Pt FRK2相似性最高,達(dá)到85%。利用實時熒光定量PCR技術(shù)分析基因表達(dá)的結(jié)果表明,Mr FRK2在‘東魁’楊梅果實的發(fā)育早期大量表達(dá),在成熟后期表達(dá)量下降,果實成熟初期Mr FPK2表達(dá)量‘東魁’顯著高于‘荸薺’。果實成熟期間果糖含量‘東魁’顯著高于‘荸薺’,與果實成熟期間Mr FPK2的表達(dá)量相反。這表明,MrF PK2在楊梅果實成熟期間果糖降解過程中可能起一定作用。
【圖文】：

ACE技術(shù)獲得了長度約為1060bp和160bp的5′和3′端序列（圖1，B、C），將這2條序列與中間片段序列進(jìn)行拼接，獲得基因全長cDNA序列，共1279bp。MrFRK2全長cDNA序列包含1個ATG起始密碼子和TAG終止密碼子，其中3′端非編碼區(qū)227bp，5′端非編碼區(qū)56bp。ORF閱讀框全長996bp，編碼1個含有332個氨基酸殘基的蛋白，預(yù)測的等電點（pI）為4.80，預(yù)測分子量為35.67kD。根據(jù)獲得的基因全長cDNA序列設(shè)計全長特異引物fFRK2F和fFRK2R進(jìn)行RT-PCR，得到1條長1268bp（圖1，D）的片段，并通過測序驗證與軟件拼接獲得的MrFRK2全長cDNA序列一致。圖1MrFRK2的克隆電泳圖A：中間片段擴(kuò)增；B：5′-RACE擴(kuò)增；C：3′-RACE擴(kuò)增；D：cDNA全長擴(kuò)增；M：DL100marker。Fig.1GelelectrophoresisofMrFRK2cDNAsA：Middlesegment；B：5′-RACEsegment；C：3′-RACEsegment；D：Full-lengthcDNA；M：DL100marker.

RK2（苜蓿Medicagotruncatula，KEH30339.1）、PtFRK2（楊樹Populustrichocarpa，XP_006372861.1）、CcFRK2（克萊門柚Citrusclementina，XP_006443006.1）、VvFRK2（葡萄Vitisvinifera，XP_002268097.1）、AcFRK2（獼猴桃Actinidiachinensis，AFO84081.1）、SlFRK2（番茄Solanumlycopersicum，NP_001233888.1）、AtFRK2（擬南芥Arabidopsisthaliana，NP_172093.1）、StFRK2（馬鈴薯Solanumtuberosum，ABB29956.1）、MdFK4（蘋果Malus×domestica，NP_001281027.1）和EjFRK2（枇杷Eriobotryajaponica，ACL01290.1），比對結(jié)果如圖2所示。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，MrFRK2氨基酸序列含有碳水化合物磷酸果糖激酶家族（pfkBfamily）高度保守功能結(jié)構(gòu)域，包括1個ATP結(jié)合域（ATPbindingdomain），，2個底物識別域（substraterecognitiondomains）以及2個蛋白磷酸化位點（pfkB）。圖2楊梅果實MrFRK2的氨基酸序列對比圖Fig.2AlignmentofthededucedMrFRK2aminoacidsequenceswithFRK2sfromotherplants

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本文編號：2586358