【摘要】：[目的]構(gòu)建nsdA基因的敲除載體和表達(dá)載體,獲得陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子。[方法]根據(jù)GenBank中報(bào)道的天藍(lán)色鏈霉菌nsdA基因序列設(shè)計(jì)引物,在利迪鏈霉菌產(chǎn)納他霉素菌株A01、A02和G117中擴(kuò)增到預(yù)期目的片段,進(jìn)一步克隆nsdA基因全長(zhǎng)序列;經(jīng)BLAST比對(duì),其核苷酸序列及其編碼蛋白的氨基酸序列與天藍(lán)色鏈霉菌均有較高同源性,據(jù)此判斷利迪鏈霉菌A01、A02、G117中含有nsdA基因;進(jìn)一步構(gòu)建nsdA基因的敲除載體pLM103和表達(dá)載體pIBN139,轉(zhuǎn)入大腸桿菌ET12567(puz8002)。[結(jié)果]nsdA基因全長(zhǎng)序列1 407 bp,編碼468個(gè)氨基酸,構(gòu)建了nsdA基因的敲除載體pLM103和表達(dá)載體pIBN139。[結(jié)論]成功構(gòu)建nsdA基因的敲除載體pLM103和表達(dá)載體pIBN139,并獲得陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子,為后續(xù)構(gòu)建利迪鏈霉菌nsdA基因阻斷突變株,以進(jìn)一步探究nsdA基因在利迪鏈霉菌納他霉素生物合成中的調(diào)控作用奠定了基礎(chǔ)。

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