【摘要】：[目的]構(gòu)建nsdA基因的敲除載體和表達(dá)載體,獲得陽性轉(zhuǎn)化子。[方法]根據(jù)GenBank中報(bào)道的天藍(lán)色鏈霉菌nsdA基因序列設(shè)計(jì)引物,在利迪鏈霉菌產(chǎn)納他霉素菌株A01、A02和G117中擴(kuò)增到預(yù)期目的片段,進(jìn)一步克隆nsdA基因全長序列;經(jīng)BLAST比對,其核苷酸序列及其編碼蛋白的氨基酸序列與天藍(lán)色鏈霉菌均有較高同源性,據(jù)此判斷利迪鏈霉菌A01、A02、G117中含有nsdA基因;進(jìn)一步構(gòu)建nsdA基因的敲除載體pLM103和表達(dá)載體pIBN139,轉(zhuǎn)入大腸桿菌ET12567(puz8002)。[結(jié)果]nsdA基因全長序列1 407 bp,編碼468個(gè)氨基酸,構(gòu)建了nsdA基因的敲除載體pLM103和表達(dá)載體pIBN139。[結(jié)論]成功構(gòu)建nsdA基因的敲除載體pLM103和表達(dá)載體pIBN139,并獲得陽性轉(zhuǎn)化子,為后續(xù)構(gòu)建利迪鏈霉菌nsdA基因阻斷突變株,以進(jìn)一步探究nsdA基因在利迪鏈霉菌納他霉素生物合成中的調(diào)控作用奠定了基礎(chǔ)。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 江昕;趙廣榮;元英進(jìn);;利迪鏈霉菌轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因片段的克隆[J];化學(xué)工業(yè)與工程;2006年03期

2 隋勤;劉偉成;盧彩鴿;劉霆;裘季燕;劉學(xué)敏;;利迪鏈霉菌A02抗真菌活性產(chǎn)物的分離和結(jié)構(gòu)鑒定[J];生物工程學(xué)報(bào);2009年06期

3 陳偉;于鳳鳴;元英進(jìn);;FTIR技術(shù)結(jié)合代謝物組學(xué)分析方法在菌株高通量篩選中的應(yīng)用[J];化工學(xué)報(bào);2007年09期

4 董丹;吳慧玲;張濤濤;劉偉成;;利迪鏈霉菌A02細(xì)菌人工染色體基因組文庫的構(gòu)建[J];科技導(dǎo)報(bào);2013年25期

5 陳芬;熊偉;閔勇;范與慶;梁運(yùn)祥;呂和平;邢仁昌;鄭應(yīng)華;;肉桂地鏈霉菌接合轉(zhuǎn)移體系的構(gòu)建及nsdA基因中斷對其次級代謝的影響[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2007年06期

6 余貞;王茜;鄧子新;陶美鳳;;負(fù)調(diào)節(jié)基因nsdA在鏈霉菌中同源性及激活沉默抗生素合成基因簇的研究[J];生物工程學(xué)報(bào);2006年05期

7 張歡;黃思超;蔡紹暉;;基于2A肽策略構(gòu)建多基因表達(dá)載體的研究進(jìn)展[J];中國生物工程雜志;2013年01期

8 羅剛,魏泓;豬Cathelicidin PMAP37基因表達(dá)載體的構(gòu)建[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2003年14期

9 陳凱;李紀(jì)順;李紅梅;魏艷麗;楊合同;;木霉雙價(jià)基因表達(dá)載體的構(gòu)建[J];中國農(nóng)學(xué)通報(bào);2014年09期

10 艾國平;譚虎;粟永萍;王濤;冉新澤;;雙基因表達(dá)載體的構(gòu)建及生物活性觀察[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2008年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 李慶章;姜毓君;;β-CPP二聚體基因表達(dá)載體的構(gòu)建及其結(jié)構(gòu)分析[A];動(dòng)物生理生化學(xué)分會(huì)第八次學(xué)術(shù)會(huì)議暨全國反芻動(dòng)物營養(yǎng)生理生化第三次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 于鳳鳴;利迪鏈霉菌I型聚酮合成酶基因克隆及功能研究[D];天津大學(xué);2006年

2 杜秋麗;大豆泛素化系統(tǒng)E2和E3酶基因的克隆與功能研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

3 馬雪梅;神經(jīng)營養(yǎng)相關(guān)因子基因的克隆、表達(dá)及蛋白的純化研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1997年

4 孫全喜;超長鏈多不飽和脂肪酸合成相關(guān)酶基因的克隆與鑒定及其在作物中的異源合成[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

5 周偉光;果蠅嗅覺基因的篩選、鑒定及其功能的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

6 滕思勇;1. HERG通道孔區(qū)外口的錯(cuò)義突變對其功能的影響 2. hKCNE4新基因的克隆、表達(dá)及功能研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2002年

7 馬馨;轉(zhuǎn)賴氨酸基因小鼠和牛的研究[D];吉林大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 周雍進(jìn);利迪鏈霉菌初級代謝關(guān)鍵基因的克隆與功能分析[D];天津大學(xué);2008年

2 李麗新;喜樹sls-like基因在大腸桿菌中的表達(dá)與分析[D];黑龍江大學(xué);2012年

3 曾國敏;轉(zhuǎn)hCD47基因豬的創(chuàng)建及其在異種移植中抗吞噬作用研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 張靜;CRISPR/Cas9介導(dǎo)DGAT1基因在小鼠MSTN位點(diǎn)定點(diǎn)整合研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2016年

5 陳修棟;攜帶hIL-10和EGFP基因的轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

6 李揚(yáng);GAB2基因非編碼功能的研究與特征描述[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2016年

7 呂玉偉;貽貝粘蛋白Mgfp-5基因在煙草中的表達(dá)[D];西北大學(xué);2016年

8 李志剛;新疆南部地方品種綿羊毛囊KAP7基因的多克隆抗體制備與真核表達(dá)[D];塔里木大學(xué);2017年

9 譚俊杰;豬生長激素基因與白介素-6基因的聯(lián)合表達(dá)效應(yīng)分析[D];四川大學(xué);2006年

10 張成;放線菌的兩個(gè)菌株中重要功能基因的研究[D];湖南師范大學(xué);2010年

，

本文編號：2585648