【摘要】：[目的]研究MDSC在異基因造血干細(xì)胞移植患者中的變化規(guī)律,探討MDSC的增殖與異基因造血干細(xì)胞移植患者aGVHD的發(fā)生及臨床預(yù)后的相關(guān)性。[方法]采集異基因造血干細(xì)胞移植患者輸注的造血干細(xì)胞及移植后100天內(nèi)的外周血,流式細(xì)胞學(xué)檢測MDSC的表達(dá)及其他免疫相關(guān)細(xì)胞的表達(dá)；通過磁珠分選MDSC,檢測MDSC形態(tài)學(xué)特征及表型;用Elisa法檢測IL-6,IL-10,IL-1β,TNF-α,Arg-1, HO-1, iNOS的水平。[結(jié)果]干細(xì)胞采集物中MDSC數(shù)目及干細(xì)胞植活時外周血中MDSC的比例增高有利于患者移植后長期免疫耐受,有利于減輕aGVHD的發(fā)生率及aGVHD的嚴(yán)重程度,且不增加移植后疾病的復(fù)發(fā)率,有利于延長生存期。而移植后,aGVHD發(fā)生會伴隨MDSC比例的增高,且IL-6、IL-10及TNF-α的濃度及免疫相關(guān)蛋白Arg-1、iNOS和HO-1的水平也明顯增高。推測移植后伴隨aGVHD的發(fā)生而出現(xiàn)的MDSC增多可能是由于觸發(fā)aGVHD的炎癥反應(yīng)(尤其是IL-6及TNF-a)引起的MDSC的繼發(fā)性增殖,從而引起MDSC分泌的免疫相關(guān)蛋白Arg-1、iNOS和HO-1也明顯增高,整個過程是aGVHD的病理反應(yīng)引起的機(jī)體負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制的一部分。這種繼發(fā)性MDSC的增高并不會增加移植后疾病的復(fù)發(fā)。[結(jié)論]干細(xì)胞回輸時MDSC的數(shù)目及植活時外周血中MDSC水平可作為預(yù)測異基因造血干細(xì)胞移植后aGVHD的發(fā)生及嚴(yán)重程度的指標(biāo);回輸MDSC或促進(jìn)MDSC的擴(kuò)增可能是一個減輕移植后aGVHD的有效方法。[目的]建立G-CSF誘導(dǎo)MDSC擴(kuò)增的培養(yǎng)體系,研究MDSC在小鼠急性移植物抗宿主病中的效應(yīng)。[方法]1.用不同濃度G-CSF誘導(dǎo)培養(yǎng)小鼠骨筋細(xì)胞不同時間,檢測MDSC比例變化從而確立G-CSF誘導(dǎo)MDSC的培養(yǎng)體系；2.建立小鼠異基因骨髓移植模型,移植時回輸G-CSF誘導(dǎo)的MDSC,觀察小鼠GVHD的發(fā)生與發(fā)展,評估小鼠生存狀況。[結(jié)果]1. G-CSF體內(nèi)誘導(dǎo)MDSC的最佳濃度為5μg/只／天,最佳誘導(dǎo)時間為3天;2. G-CSF體外誘導(dǎo)MDSC的最佳濃度為100ng/mL,培養(yǎng)最佳時間為4天；3.回輸G-CSF誘導(dǎo)的MDSC能明顯減輕異基因移植小鼠GVHD的嚴(yán)重程度,延長小鼠的生存時間。[結(jié)論]G-CSF誘導(dǎo)的MDSC對異基因移植小鼠GVHD具有明顯抑制作用,能延長小鼠的生存時間。這一結(jié)果證實了allo-HSCT患者回輸?shù)母杉?xì)胞采集物中MDSC在移植患者體內(nèi)的免疫抑制作用,提示回輸?shù)腗DSC數(shù)目可作為預(yù)測異基因造血干細(xì)胞移植后aGVHD的發(fā)生及嚴(yán)重程度的重要標(biāo)志,而基于MDSC的細(xì)胞治療可能成為預(yù)防和治療異基因造血干細(xì)胞移植后aGVHD的有效方法。[目的]建立G9誘導(dǎo)MDSC擴(kuò)增的培養(yǎng)體系,研究G9-MDSC在小鼠急性移植物抗宿主病中的效應(yīng)及機(jī)制。[方法]1、用不同濃度重組G9蛋白誘導(dǎo)培養(yǎng)小鼠骨鏈細(xì)胞不同時間,檢測MDSC比例變化從而建立G9誘導(dǎo)MDSC的培養(yǎng)體系；2、Giemsa染色檢測G9-MDSC形態(tài)并通過流式細(xì)胞學(xué)檢測G9-MDSC表型；3、G9-MDSC與T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)檢測G9-MDSC對T細(xì)胞增殖的影響;4、Real-time PCR檢測G9-MDSC Arg-1、iNOS、Tim3基因表達(dá)量的變化;5、流式細(xì)胞學(xué)檢測G9-MDSC的凋亡及分化；6、建立小鼠異基因骨髓移植模型,移植時回輸G9-MDSC,觀察小鼠GVHD的發(fā)生與發(fā)展,評估小鼠生存狀況。[結(jié)果]1、G9體外誘導(dǎo)MDSC的最佳濃度為300ng/mL,培養(yǎng)最佳時間為4天;2、G9-MDSCG9-MDSC呈“花環(huán)樣”,不表達(dá)早期造血干標(biāo)志CD34,也不表達(dá)分化的單核細(xì)胞標(biāo)志CD14、髓系DC細(xì)胞標(biāo)志CD11c,但弱表達(dá)MHC-Ⅱ和巨噬表面標(biāo)志F4/80。也表達(dá)Tim3;3、G9誘導(dǎo)MDSC的擴(kuò)增是依賴Tim3途徑的,但MDSC細(xì)胞表達(dá)的Tim3并不參與G9蛋白誘導(dǎo)MDSC增殖的過程,MDSC是從GMP分化而來的,G9蛋白可加速GMP向MDSC分化,但并不影響其他干祖細(xì)胞的分化過程;4、G9-MDSC對T細(xì)胞的增殖具有明顯抑制作用。且是通過細(xì)胞-細(xì)胞接觸來完成的；5、G9-MDSC中Arg-1、iNOS和Tim3表達(dá)增高;6、G9-MDSC抑制能力和能力的維持時間均較自然狀態(tài)下的MDSC明顯增強(qiáng),G9-MDSC的抑制能力約可維持一周;7、G9誘導(dǎo)的MDSC能顯著減輕異基因骨髓移植小鼠急性移植物抗宿主反應(yīng)：8、回輸G9-MDSC能明顯減輕異基因移植小鼠GVHD的嚴(yán)重程度,延長小鼠的生存時間。[結(jié)論]重組G9蛋白對MDSC的誘導(dǎo)作用是一個全新的MDSC誘導(dǎo)方式,且G9在減輕急性移植物抗宿病中的作用除已知的G9/Tim3機(jī)制外,還存在誘導(dǎo)MDSC擴(kuò)增從而對T細(xì)胞發(fā)揮抑制作用。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R457.7

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本文編號：2585549