【摘要】：目的：通過采用全基因組重測序的方法,研究肺癆康抗耐異煙肼結(jié)核分枝桿菌的作用是否與KatG基因突變的回復(fù)或修復(fù)相關(guān),為中醫(yī)藥治療耐異煙肼肺結(jié)核的機制提供新思路。方法：1、實驗動物分組：SPF級昆明種小鼠120只,初始體重為18-22g,隨機分6組,每組20只小鼠,分別為空白組、標準菌組、耐異煙肼組、肺癆康組、異煙肼組、聯(lián)合組；2、建立模型：空白組小鼠不做尾靜脈注射結(jié)核桿菌；標準菌組各小鼠行尾靜脈注射H37RV標準結(jié)核分枝桿菌菌株菌懸液(ATCC:27294)；其余四組小鼠分別行尾靜脈注射耐異煙肼結(jié)核菌株菌懸液；3、藥物干預(yù)：空白組、標準菌組、耐異煙肼組小鼠連續(xù)56天生理鹽水灌胃,每天1次；肺癆康組、異煙肼組、聯(lián)合組小鼠分別用肺癆康液、異煙肼液、肺癆康聯(lián)合異煙肼混合液連續(xù)灌胃56天,每天1次；4、實驗周期結(jié)束后各組小鼠分離肺組織進行細菌培養(yǎng)、病理切片觀察及各組隨機選取1-2只小鼠肺組織進行結(jié)核分枝桿菌DNA提純測序。結(jié)果：1、除空白組,其余各組小鼠肺組織細菌培養(yǎng)均為陽性；2、肺組織病理形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),除空白組,其余各組小鼠肺組織均呈不同程度的增生、滲出、壞死等病理形態(tài)；3、除空白組外,其余五組樣本細菌基因組DNA重測序結(jié)果：在染色體NC_000962.3第2154724和2155168位置即KatG基因常見突變位點R463L和S315T位,標準菌組未見基因突變；耐異煙肼組存在基因多態(tài)性；藥物干預(yù)組基因突變。經(jīng)異煙肼、肺癆康及異煙肼聯(lián)合肺癆康治療后的耐異煙肼結(jié)核分枝桿菌全基因測序發(fā)現(xiàn)在染色體NC_000962.3上編碼假定蛋白(hypothetical protein)的Rv0104、Rv2079、Rv3898c基因,編碼轉(zhuǎn)座酶觸合蛋白(transposase fusion protein)的Rv3327基因,均突變?yōu)榻K止子。經(jīng)肺癆康、肺癆康聯(lián)合異煙肼干預(yù)治療后的耐異煙肼結(jié)核分枝桿菌全基因測序發(fā)現(xiàn)染色體NC_000962.3上可能與編碼氧化還原酶相關(guān)的RV0063基因發(fā)生呈多態(tài)性的突變,突變?yōu)榻K止子。結(jié)論：1、除空白組外,其余組小鼠均成功感染結(jié)核菌；2、經(jīng)異煙肼、肺癆康、異煙肼聯(lián)合肺癆康治療后耐異煙肼結(jié)核分枝桿菌全基因組測序顯示,KatG基因第463位和第315位堿基突變均無回復(fù)現(xiàn)象,說明肺癆康抗耐異煙肼結(jié)核桿菌的作用為回復(fù)或修復(fù)突變基因的假說在本次實驗中未得到驗證；3、經(jīng)異煙肼、肺癆康及異煙肼聯(lián)合肺癆康治療后的耐異煙肼結(jié)核分枝桿菌全基因測序發(fā)現(xiàn)在染色體NC_000962.3上編碼假定蛋白的基因Rv0104、Rv2079、Rv3898c及編碼轉(zhuǎn)座酶觸合蛋白的基因Rv3327均突變?yōu)榻K止密碼子,有待于進一步驗證是否因藥物干預(yù)的影響；4、經(jīng)肺癆康及肺癆康聯(lián)合異煙肼干預(yù)治療后耐異煙肼結(jié)核分枝桿菌全基因組重測序發(fā)現(xiàn)染色體NC_000962.3上RV0063基因僅在這兩組發(fā)生突變呈“多態(tài)性”。該基因可能編碼氧化還原酶,可與過氧化還原酶ps00862共價位點FAD結(jié)合,該位置突變導(dǎo)致編碼412谷氨酸的密碼子變?yōu)榻K止密碼,使氧化還原酶的編碼終止,不能產(chǎn)生該氧化還原酶與上述共價FAD結(jié)合位點結(jié)合,這一突變可能降低了結(jié)合分枝桿菌對氧化還原酶活性的抗性,這是否與肺癆康抗耐異煙肼結(jié)核病的作用有相關(guān)性,目前尚不能肯定。
【圖文】：

異煙脅組

圖S聯(lián)合組
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R285.5

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1 陳曦,馬s，

本文編號：2583967