【摘要】：為建立運(yùn)用可視基因芯片技術(shù)快速、準(zhǔn)確檢測(cè)蘭花病毒的方法,選擇黃瓜花葉病毒、齒舌蘭環(huán)斑病毒、建蘭花葉病毒編碼外殼蛋白(coat protein,CP)基因、辣椒褪綠病毒編碼核衣殼蛋白N基因、落葵皺紋花葉病毒編碼CI蛋白基因?yàn)槟繕?biāo)基因,設(shè)計(jì)引物和探針(5'標(biāo)記一段poly T)。利用多重RT-PCR方法進(jìn)行病毒核酸擴(kuò)增,將擴(kuò)增產(chǎn)物與固定于芯片的特異性探針雜交,經(jīng)清洗、可視化顯色后進(jìn)行結(jié)果分析。在優(yōu)化的檢測(cè)條件下,本研究篩選出2組多重引物組合Cm(F2-R2a)、Ba(F1-R1);Or(F1-R1)、Cy(F2-R2)和Ca(F1-R1),5條特異性探針。所建立的可視基因芯片具有較好的特異性和重復(fù)性,可檢測(cè)出病毒陽(yáng)性質(zhì)粒的量為不低于10~3拷貝·μL~(-1)。

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