【摘要】：大熊貓(學(xué)名:Ailuropoda melanoleuca),又被人稱為“活化石”,是一種只發(fā)現(xiàn)于中國的珍貴物種,它的分布范圍包括四川西北、陜西西南、西藏東部和甘肅南部。喜食箭竹,也愛吃蜂蜜。其極低的繁殖率,導(dǎo)致個體數(shù)量少,我國把它列為一級保護動物。四川黑熊(學(xué)名:Ursus thibetanus mupinensis),名字還包括月熊、藏熊等,它采食的食物種類多樣,喜歡吃幼嫩葉子和真菌。亞洲南部溫暖地區(qū)是它的活動地帶,因為人類的過度捕獵行為,我國把它確定為國家二級重點保護野生動物,同時納入中國瀕危動物紅皮書。綜合來看兩個物種都有特別的研究價值。本研究根據(jù)人(Homo sapiens)、小家鼠(Mus musculus)、褐家鼠(Rattus norvegicus)、牛(Bos Taurus)、黑猩猩(Pan troglodytes)五種哺乳動物物種已知的mRNA序列為參考來設(shè)計引物;實驗材料是大熊貓和四川黑熊骨骼肌,再分別從材料中提取出總RNA和基因組DNA;然后采用反轉(zhuǎn)錄PCR、降落PCR(Touch-down PCR)技術(shù)分別進行兩個物種BANF1的表達序列和結(jié)構(gòu)基因序列的擴增與克隆;把產(chǎn)物外送測序,并使用分析軟件對得到的結(jié)果進行比較、分析;分別構(gòu)建了大熊貓和四川黑熊的BANF1cDNA的重組表達載體,然后將載體轉(zhuǎn)化進E.coli-BL21,進行IPTG誘導(dǎo)表達。本實驗給其他與大熊貓和四川黑熊的基因相關(guān)的研究提供了具體的方法和實驗經(jīng)驗。實驗結(jié)果顯示:從大熊貓和四川黑熊克隆得到的BANF1的cDNA序列有297個堿基,含有一個270 bp編碼89個氨基酸的開放閱讀框。大熊貓基因組序列長度為521 bp,四川黑熊為536 bp,都擁有2個外顯子。經(jīng)過軟件分析得出,BANF1基因的核苷酸序列、氨基酸序列的保守性比較高,這一點有一定的借鑒意義。將大熊貓分別與四川黑熊、人、小家鼠、褐家鼠、牛和黑猩猩6個物種的BANF1基因的編碼序列及其所編碼的氨基酸序列進行相似性比較,結(jié)果顯示編碼序列相似性分別為98.15%,96.6%,93.3%,93.03%,96.6%和96.6%;而氨基酸序列的相似性分別為96.63%,93.7%,92.6%,91.5%,91.1%和93.7%。把四川黑熊分別與人、小家鼠、褐家鼠、牛和黑猩猩5個物種的BANF1基因的編碼序列及其所編碼的氨基酸序列進行相似性比較,結(jié)果顯示編碼序列相似性分別為95.19%,94.10%,93.33%,92.96%和95.56%;而氨基酸序列的相似性分別為100%,96.63%,96.63%,100%和100%。拓?fù)漕A(yù)測顯示大熊貓和四川黑熊的BANF1蛋白同時含有一個蛋白激酶C磷酸化位點,一個酰胺化位點,一個酪氨酸激酶磷酸化位點,一個N-肉豆蔻酰化位點;此外,大熊貓獨有一個酪蛋白激酶II磷酸化位點。使用感受態(tài)細胞BL21進行目的蛋白的誘導(dǎo)表達,結(jié)果表明,BANF1蛋白含有N-末端His-標(biāo)記的預(yù)期的14 kDa的多肽,累積于包涵體內(nèi)。目的蛋白經(jīng)過分離純化后,可以用于其他實驗安排。
【圖文】：

第 3 章 實驗結(jié)果、分析與討論第 3 章 實驗結(jié)果、分析與討論3.1 實驗結(jié)果3.1.1 總 RNA 和基因組 DNA 的提取結(jié)果（圖 3-1）使用濃度為 1.0%的 Agarose 進行電泳檢測總 RNA，用 0.6%的 Agarose 進因組 DNA 提取檢測，圖 3-1（a）所示，28S RNA 條帶的亮度約為 18S RNA 條亮度的兩倍，表明總 RNA 質(zhì)量較好，可以進行后續(xù)試驗；3-1（b）圖所示，組 DNA 沒有明顯降解跡象，可以進行后續(xù)實驗。

圖 3-1（a）所示，28S RNA 條帶的亮度倍，表明總 RNA 質(zhì)量較好，，可以進行后續(xù)試驗；3-有明顯降解跡象，可以進行后續(xù)實驗。圖 3-1 總 RNA(a)和 DNA（b）提取電泳圖Fig. 3-1 Results of total RNAs (a) and DNA (b) extraANF1 cDNA RT-PCR 和結(jié)構(gòu)基因 PCR 結(jié)果（圖 3-2 ）
【學(xué)位授予單位】：西華師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：Q953

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2 裴文中;大熊貓發(fā)展簡史[J];動物學(xué)報;1974年02期

3 文煥然,何業(yè)恒;近五千年來豫鄂湘川間的大熊貓[J];西南師范學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版);1981年01期

4 胡錦矗;;大熊貓的生物學(xué)[J];科學(xué);1986年03期

5 劉天成;高晉蜀;黃楠;郭黎康;李學(xué)寧;王錦;唐建華;張忠慧;鄭惠珍;袁蓉;黃浩云;李成渝;彭樺;陳莉;;大熊貓文獻通報[J];南充師院學(xué)報(自然科學(xué)版);1987年02期

6 楊楓;;大熊貓的近況與未來[J];化石;1987年04期

7 胡錦矗;;大熊貓的研究史略與分類地位[J];生物學(xué)通報;1990年05期

8 張俊范,鄧昕,李如嘉;大熊貓的演變過程和原因的探討[J];四川動物;1993年03期

9 胡錦矗;1990～1994年大熊貓的研究進展[J];四川師范學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版);1996年03期

10 侯一民;大熊貓向人類襲擊[J];南風(fēng)窗;1996年02期

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1 譚薇;大熊貓“挑食”之謎[N];第一財經(jīng)日報;2009年

2 記者 周琦;大熊貓成為人類自然遺產(chǎn)[N];雅安日報;2010年

3 蔡曉蕓;“活化石”真情守護者[N];華東旅游報;2006年

4 實習(xí)生 曹旭超;大熊貓是熊還是貓？[N];科技日報;2007年

5 本報記者 趙天偉　鄒海榮;冶勒大熊貓種群正繁衍壯大[N];涼山日報(漢);2010年

6 實習(xí)記者 嚴(yán)玉琳　記者 高曉軍;像愛護眼睛一樣 愛護大熊貓品牌[N];雅安日報;2010年

7 記者　張勇;島內(nèi)民眾失望：熊貓不是“政治玩偶”[N];新華每日電訊;2006年

8 本報記者 童光來;大熊貓吃竹子之謎有望破解[N];北京科技報;2004年

9 本報記者 陳圣強　劉錦;研究棕色“活化石”,發(fā)現(xiàn)更多生命秘密[N];陜西日報;2009年

10 本報記者 蔡玉冰;熊貓其實有點“兇”[N];廣東科技報;2012年

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1 嚴(yán)旬;大熊貓自然保護區(qū)體系研究[D];北京林業(yè)大學(xué);2005年

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3 冉江洪;小相嶺大熊貓種群生態(tài)學(xué)和保護策略研究[D];四川大學(xué);2004年

4 侯新東;我國華南地區(qū)大熊貓系統(tǒng)演化與遺傳多樣性的古DNA研究[D];中國地質(zhì)大學(xué);2014年

5 胡細連;大熊貓等瀕危動物IGF-Ⅰ基因的克隆、表達與組織分布研究[D];浙江大學(xué);2005年

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2 馮志儒;馬邊大風(fēng)頂自然保護區(qū)大熊貓生境適宜性評價[D];東北林業(yè)大學(xué);2015年

3 楊婭楠;基于森林結(jié)構(gòu)遙感反演的大熊貓生境適宜性評價[D];云南師范大學(xué);2015年

4 徐誼英;大熊貓和林麝糞便中細菌和古菌結(jié)構(gòu)組成研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 李亞軍;秦嶺竹林結(jié)構(gòu)與營養(yǎng)特征及與大熊貓季節(jié)分布關(guān)系的研究[D];清華大學(xué);2015年

6 趙志琛;纖維類物質(zhì)與硅對大熊貓選食竹子的影響[D];東北林業(yè)大學(xué);2016年

7 馮菲菲;大熊貓類固醇激素與游客噪聲關(guān)系及其育幼行為研究[D];西華師范大學(xué);2016年

8 曾益春;大熊貓和四川黑熊BANF1基因的克隆、表達和相關(guān)研究[D];西華師范大學(xué);2016年

9 曹弦;佛坪大熊貓（Ailuropoda melanoleuca）主食竹巴山木竹單寧酸含量的時空變化[D];西華師范大學(xué);2016年

10 杜有順;武漢動物園大熊貓飼養(yǎng)管理與疾病防治研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

本文編號：2577540