【摘要】：馬鈴薯Y病毒(PVY)是危害煙葉生產(chǎn)的主要病害之一。已有研究表明,煙草對(duì)PVY的抗性由隱性抗性基因e IF4E-6控制。本研究利用CRISPR-Cas9技術(shù)定向敲除煙草e IF4E-6基因以改良優(yōu)質(zhì)烤煙品種K326的PVY抗性。我們構(gòu)建了2個(gè)特異靶向e IF4E-6基因的CRISPR-Cas9載體g1和g2。構(gòu)建的載體轉(zhuǎn)化煙草品種K326,PCR檢測(cè)潮霉素B抗性標(biāo)簽鑒定陽性T0代轉(zhuǎn)基因煙草。PCR擴(kuò)增陽性轉(zhuǎn)基因煙株靶位點(diǎn)周圍DNA序列,對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行直接測(cè)序或克隆測(cè)序,篩選自靶位點(diǎn)處發(fā)生突變的煙株,得到2個(gè)載體各約50株陽性轉(zhuǎn)化T0代煙株。序列分析結(jié)果表明,有2株g1載體轉(zhuǎn)化的煙株在靶位點(diǎn)處出現(xiàn)雜合型單堿基缺失,分別有3和4株g1和g2載體轉(zhuǎn)化的煙株在靶位點(diǎn)處出現(xiàn)雜合型1~2個(gè)堿基的替換。這些目的基因雜合型突變的T0代煙株為后續(xù)自交獲得目的基因純合敲除后代材料并最終獲得PVY抗性改良的煙草提供了研究基礎(chǔ)。

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1 ;基因工程[J];生物技術(shù)通報(bào);1988年02期

2 ;[J];;年期

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本文編號(hào)：2573662