【摘要】：sipW基因是芽孢桿菌屬細菌的重要調(diào)控基因,表現(xiàn)出多種功能。本研究以植物內(nèi)生生防細菌解淀粉芽孢桿菌PEBA20為材料,利用同源重組法構建了sipW基因缺失突變株,進而測定了該基因對PEBA20生物膜形成、抑菌活性和芽孢形成的影響。本文主要研究結果如下:1、將sipW同源前臂和同源后臂的連接產(chǎn)物sipWF-sipWB與自殺質粒PMUTin4經(jīng)雙酶切、T4連接酶連接得到重組自殺質粒sipWF-sipWB-PMUTin4。將重組質粒經(jīng)電轉化方法轉化入B.amyloliquefaciens PEBA20感受態(tài)細胞中,采用紅霉素篩選法篩選獲得sipW基因缺失的PEBA20突變株;以缺失株DNA為模板進行PCR篩選陽性克隆,并通過測序確定獲得sipW基因缺失突變株。2、觀察了B.amyloliquefaciens PEBA20 sipW基因缺失突變株的液氣界面和固氣界面生物膜形成過程,發(fā)現(xiàn)sipW基因缺失突變株固氣界面生物膜結構復雜程度略顯簡單,液氣界面生物膜也較野生株為簡單,表明sipW基因調(diào)控了解淀粉芽孢桿菌生物膜形成過程。3、檢測B.amyloliquefaciens PEBA20野生株和sipW突變株對三種植物病原真菌和三種植物病原細菌的抑菌活性。結果顯示,與野生株相比,sipW基因缺失突變株對三種指示真菌和三種指示細菌抑菌效果均下降,并且對其中某些真菌和細菌的抑菌作用差異顯著水平較為顯著。表明sipW基因的缺失突變影響了解淀粉芽孢桿菌對真菌和細菌的抑菌作用。4、對B.amyloliquefaciens PEBA20野生株和sipW突變株的菌體芽孢形態(tài)檢測結果顯示,sipW基因缺失突變株能產(chǎn)生芽孢,且突變株的菌體與野生株相比差異不顯著。表明sipW基因缺失突變株可能不影響芽孢的形成。
【圖文】：

sipW基因的同源重組構建

EBA20 sipW 同源前臂 sipWF、同源后臂 sipWB 的 PCR 擴增產(chǎn)1. sipWF；2. sipWB；M. 核酸分子量標準(Marker 1) 2 PCR products of sipWF and sipWB from B. amyloliquefaciens P1.PCR products of sipWF; 2. PCR products of sipWB; M.transF 與同源后臂 sipWB 的單酶切及連接酶 XhoⅠ分別對回收的 sipWF 和 sipWB 片段切片段進行連接，獲得 sipW 基因缺失片段 si預期目的條帶大小相符，如圖 3 所示。
【學位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S476

【參考文獻】

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1 盧鎮(zhèn)岳;楊新芳;馮永君;;植物內(nèi)生細菌的分離、分類、定殖與應用[J];生命科學;2006年01期

2 李蘭;沈偉;鄧繼先;潘慶杰;;影響動物細胞同源重組發(fā)生與基因打靶效率的分子機制[J];生物技術通訊;2006年01期

3 陳志誼,陸凡,劉永鋒,楊新寧,劉郵洲;防治水稻病害微生物農(nóng)藥紋曲寧的研制及產(chǎn)業(yè)化[J];江蘇農(nóng)業(yè)學報;2003年02期

4 李英,劉茂東;基因打靶技術及其在腎病領域的應用[J];河北醫(yī)科大學學報;2002年01期

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本文編號：2552223