【摘要】：sipW基因是芽孢桿菌屬細(xì)菌的重要調(diào)控基因,表現(xiàn)出多種功能。本研究以植物內(nèi)生生防細(xì)菌解淀粉芽孢桿菌PEBA20為材料,利用同源重組法構(gòu)建了sipW基因缺失突變株,進(jìn)而測定了該基因?qū)EBA20生物膜形成、抑菌活性和芽孢形成的影響。本文主要研究結(jié)果如下:1、將sipW同源前臂和同源后臂的連接產(chǎn)物sipWF-sipWB與自殺質(zhì)粒PMUTin4經(jīng)雙酶切、T4連接酶連接得到重組自殺質(zhì)粒sipWF-sipWB-PMUTin4。將重組質(zhì)粒經(jīng)電轉(zhuǎn)化方法轉(zhuǎn)化入B.amyloliquefaciens PEBA20感受態(tài)細(xì)胞中,采用紅霉素篩選法篩選獲得sipW基因缺失的PEBA20突變株;以缺失株DNA為模板進(jìn)行PCR篩選陽性克隆,并通過測序確定獲得sipW基因缺失突變株。2、觀察了B.amyloliquefaciens PEBA20 sipW基因缺失突變株的液氣界面和固氣界面生物膜形成過程,發(fā)現(xiàn)sipW基因缺失突變株固氣界面生物膜結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度略顯簡單,液氣界面生物膜也較野生株為簡單,表明sipW基因調(diào)控了解淀粉芽孢桿菌生物膜形成過程。3、檢測B.amyloliquefaciens PEBA20野生株和sipW突變株對三種植物病原真菌和三種植物病原細(xì)菌的抑菌活性。結(jié)果顯示,與野生株相比,sipW基因缺失突變株對三種指示真菌和三種指示細(xì)菌抑菌效果均下降,并且對其中某些真菌和細(xì)菌的抑菌作用差異顯著水平較為顯著。表明sipW基因的缺失突變影響了解淀粉芽孢桿菌對真菌和細(xì)菌的抑菌作用。4、對B.amyloliquefaciens PEBA20野生株和sipW突變株的菌體芽孢形態(tài)檢測結(jié)果顯示,sipW基因缺失突變株能產(chǎn)生芽孢,且突變株的菌體與野生株相比差異不顯著。表明sipW基因缺失突變株可能不影響芽孢的形成。
【圖文】：

sipW基因的同源重組構(gòu)建

EBA20 sipW 同源前臂 sipWF、同源后臂 sipWB 的 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)1. sipWF；2. sipWB；M. 核酸分子量標(biāo)準(zhǔn)(Marker 1) 2 PCR products of sipWF and sipWB from B. amyloliquefaciens P1.PCR products of sipWF; 2. PCR products of sipWB; M.transF 與同源后臂 sipWB 的單酶切及連接酶 XhoⅠ分別對回收的 sipWF 和 sipWB 片段切片段進(jìn)行連接，獲得 sipW 基因缺失片段 si預(yù)期目的條帶大小相符，如圖 3 所示。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S476

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號：2552223