【摘要】：近年來肺癌在我國發(fā)病率和死亡率持續(xù)升高,已位居我國惡性腫瘤死亡原因的首位,而非小細胞肺癌(NSCLC)是其中占比最高的腫瘤類型。由于傳統(tǒng)化療藥物對NSCLC效果有限、副作用大,吉非替尼(Gefitinib,Gef)等分子靶向藥物已成為NSCLC治療的新策略。但是獲得性耐藥問題十分嚴(yán)重,成為影響其臨床效果的主要原因。表觀遺傳學(xué)機制是近年來腫瘤領(lǐng)域的研究熱點,已在多種抗腫瘤藥物的耐藥機制中得到認(rèn)可。本研究從實驗室前期基因芯片結(jié)果出發(fā),探究T細胞分化蛋白(Myelin and lymphocyte protein,MAL)抑癌基因在NSCLC對Gef耐藥中的作用及機制,旨在克服耐藥或增加藥物敏感性。第一部分MAL基因的表觀遺傳學(xué)調(diào)控對Gef敏感性的影響目的:探究不同NSCLC細胞中MAL基因表達量與Gef敏感性的關(guān)系,并研究MAL基因下調(diào)的可能機制及其逆轉(zhuǎn)對Gef敏感性的影響。方法:MTT法檢測Gef對不同NSCLC細胞系的增殖抑制作用;RT-PCR及Western Blotting檢測細胞中MAL基因表達量;MSP檢測細胞中MAL基因轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域甲基化狀態(tài);探究表觀遺傳學(xué)藥物DAC、SAHA預(yù)處理對MAL基因和Gef敏感性的影響。結(jié)果:MAL基因在Gef敏感和耐藥NSCLC細胞中呈現(xiàn)明顯差異表達,4/5耐藥細胞中MAL m RNA及蛋白表達下調(diào)或缺失,MAL表達量可能與細胞對Gef敏感性有關(guān);耐藥細胞中MAL基因轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域呈現(xiàn)高甲基化,可能是MAL表達沉默的主要原因;DAC處理可明顯逆轉(zhuǎn)MAL基因高甲基化,恢復(fù)MAL m RNA表達,和SAHA聯(lián)用后表達促進更明顯;恢復(fù)MAL表達的耐藥細胞對Gef敏感性顯著增加。結(jié)論:Gef耐藥的NSCLC細胞中MAL表達普遍下調(diào)或缺失,轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域高甲基化可能是主要原因;逆轉(zhuǎn)高甲基化狀態(tài)、恢復(fù)MAL m RNA表達可增加耐藥細胞對Gef的敏感性。第二部分MAL基因恢復(fù)表達可增敏Gef的相關(guān)機制研究目的:以PC9/G、H1975兩種耐藥細胞為研究對象,探究表觀遺傳學(xué)藥物恢復(fù)MAL表達可增敏Gef的相關(guān)機制。方法:MTT等方法檢測耐藥細胞中恢復(fù)MAL表達對Gef敏感性的影響;CCK-8法、流式細胞術(shù)及細胞劃痕試驗等檢測MAL表達上調(diào)對細胞增殖與集落形成、凋亡與周期、細胞遷移能力等生物學(xué)行為的影響;Western Blotting檢測細胞中MAL表達上調(diào)對EGFR信號相關(guān)通路的影響;探究四種多酚化合物對MAL基因表達及Gef敏感性的影響。結(jié)果:DAC單用或聯(lián)合SAHA可明顯恢復(fù)PC9/G、H1975細胞中MAL蛋白表達,顯著增加對Gef敏感性;DAC、SAHA聯(lián)用恢復(fù)MAL表達可使PC9/G細胞形態(tài)更為鋪展,顯著抑制細胞增殖、集落形成及遷移能力,并促進細胞早期凋亡和G2/M期阻滯;耐藥細胞恢復(fù)MAL表達可降低EGFR途徑信號磷酸化水平,加速EGF或Gef刺激下相關(guān)信號蛋白激活、降解的經(jīng)時過程;DAC、SAHA聯(lián)用可增加細胞中上皮標(biāo)志分子E-Cadherin表達;白藜蘆醇、楊梅素等天然多酚化合物能不同程度地增加PC9/G細胞對Gef敏感性,降低MAL基因甲基化、促進MAL m RNA表達。結(jié)論:DAC、SAHA聯(lián)用恢復(fù)MAL表達可影響耐藥細胞形態(tài),顯著抑制細胞增殖,促進細胞早期凋亡,抑制細胞遷移和集落形成能力,進而增加細胞對Gef敏感性;降低EGFR途徑信號磷酸化水平、影響激活和降解的經(jīng)時過程,增加上皮標(biāo)志分子E-Cadherin表達可能是相關(guān)分子機制;MAL基因表達量有可能作為NSCLC對Gef敏感性的獨立預(yù)測指標(biāo)。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R734.2

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 王源;劉慶彤;高羽;師水生;;5-Aza-CdR對胃癌BGC-823細胞及MAL基因表達的影響[J];中國藥物與臨床;2013年07期

2 孟潘慶;;MAL基因mRNA在乳腺癌組織中表達的研究[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2012年08期

3 林若陽;沈萍萍;黃智銘;鄭建建;王良興;;MAL基因在胃癌組織中的甲基化及其mRNA的表達[J];世界華人消化雜志;2010年12期

4 郭長青,王明榮,李繼昌,許智雄,陳寶生,徐昕,吳e，

本文編號：2549711