發(fā)布時(shí)間：2019-10-15 15:55

【摘要】：近年來(lái)肺癌在我國(guó)發(fā)病率和死亡率持續(xù)升高,已位居我國(guó)惡性腫瘤死亡原因的首位,而非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)是其中占比最高的腫瘤類(lèi)型。由于傳統(tǒng)化療藥物對(duì)NSCLC效果有限、副作用大,吉非替尼(Gefitinib,Gef)等分子靶向藥物已成為NSCLC治療的新策略。但是獲得性耐藥問(wèn)題十分嚴(yán)重,成為影響其臨床效果的主要原因。表觀(guān)遺傳學(xué)機(jī)制是近年來(lái)腫瘤領(lǐng)域的研究熱點(diǎn),已在多種抗腫瘤藥物的耐藥機(jī)制中得到認(rèn)可。本研究從實(shí)驗(yàn)室前期基因芯片結(jié)果出發(fā),探究T細(xì)胞分化蛋白(Myelin and lymphocyte protein,MAL)抑癌基因在NSCLC對(duì)Gef耐藥中的作用及機(jī)制,旨在克服耐藥或增加藥物敏感性。第一部分MAL基因的表觀(guān)遺傳學(xué)調(diào)控對(duì)Gef敏感性的影響目的:探究不同NSCLC細(xì)胞中MAL基因表達(dá)量與Gef敏感性的關(guān)系,并研究MAL基因下調(diào)的可能機(jī)制及其逆轉(zhuǎn)對(duì)Gef敏感性的影響。方法:MTT法檢測(cè)Gef對(duì)不同NSCLC細(xì)胞系的增殖抑制作用;RT-PCR及Western Blotting檢測(cè)細(xì)胞中MAL基因表達(dá)量;MSP檢測(cè)細(xì)胞中MAL基因轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域甲基化狀態(tài);探究表觀(guān)遺傳學(xué)藥物DAC、SAHA預(yù)處理對(duì)MAL基因和Gef敏感性的影響。結(jié)果:MAL基因在Gef敏感和耐藥NSCLC細(xì)胞中呈現(xiàn)明顯差異表達(dá),4/5耐藥細(xì)胞中MAL m RNA及蛋白表達(dá)下調(diào)或缺失,MAL表達(dá)量可能與細(xì)胞對(duì)Gef敏感性有關(guān);耐藥細(xì)胞中MAL基因轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域呈現(xiàn)高甲基化,可能是MAL表達(dá)沉默的主要原因;DAC處理可明顯逆轉(zhuǎn)MAL基因高甲基化,恢復(fù)MAL m RNA表達(dá),和SAHA聯(lián)用后表達(dá)促進(jìn)更明顯;恢復(fù)MAL表達(dá)的耐藥細(xì)胞對(duì)Gef敏感性顯著增加。結(jié)論:Gef耐藥的NSCLC細(xì)胞中MAL表達(dá)普遍下調(diào)或缺失,轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域高甲基化可能是主要原因;逆轉(zhuǎn)高甲基化狀態(tài)、恢復(fù)MAL m RNA表達(dá)可增加耐藥細(xì)胞對(duì)Gef的敏感性。第二部分MAL基因恢復(fù)表達(dá)可增敏Gef的相關(guān)機(jī)制研究目的:以PC9/G、H1975兩種耐藥細(xì)胞為研究對(duì)象,探究表觀(guān)遺傳學(xué)藥物恢復(fù)MAL表達(dá)可增敏Gef的相關(guān)機(jī)制。方法:MTT等方法檢測(cè)耐藥細(xì)胞中恢復(fù)MAL表達(dá)對(duì)Gef敏感性的影響;CCK-8法、流式細(xì)胞術(shù)及細(xì)胞劃痕試驗(yàn)等檢測(cè)MAL表達(dá)上調(diào)對(duì)細(xì)胞增殖與集落形成、凋亡與周期、細(xì)胞遷移能力等生物學(xué)行為的影響;Western Blotting檢測(cè)細(xì)胞中MAL表達(dá)上調(diào)對(duì)EGFR信號(hào)相關(guān)通路的影響;探究四種多酚化合物對(duì)MAL基因表達(dá)及Gef敏感性的影響。結(jié)果:DAC單用或聯(lián)合SAHA可明顯恢復(fù)PC9/G、H1975細(xì)胞中MAL蛋白表達(dá),顯著增加對(duì)Gef敏感性;DAC、SAHA聯(lián)用恢復(fù)MAL表達(dá)可使PC9/G細(xì)胞形態(tài)更為鋪展,顯著抑制細(xì)胞增殖、集落形成及遷移能力,并促進(jìn)細(xì)胞早期凋亡和G2/M期阻滯;耐藥細(xì)胞恢復(fù)MAL表達(dá)可降低EGFR途徑信號(hào)磷酸化水平,加速EGF或Gef刺激下相關(guān)信號(hào)蛋白激活、降解的經(jīng)時(shí)過(guò)程;DAC、SAHA聯(lián)用可增加細(xì)胞中上皮標(biāo)志分子E-Cadherin表達(dá);白藜蘆醇、楊梅素等天然多酚化合物能不同程度地增加PC9/G細(xì)胞對(duì)Gef敏感性,降低MAL基因甲基化、促進(jìn)MAL m RNA表達(dá)。結(jié)論:DAC、SAHA聯(lián)用恢復(fù)MAL表達(dá)可影響耐藥細(xì)胞形態(tài),顯著抑制細(xì)胞增殖,促進(jìn)細(xì)胞早期凋亡,抑制細(xì)胞遷移和集落形成能力,進(jìn)而增加細(xì)胞對(duì)Gef敏感性;降低EGFR途徑信號(hào)磷酸化水平、影響激活和降解的經(jīng)時(shí)過(guò)程,增加上皮標(biāo)志分子E-Cadherin表達(dá)可能是相關(guān)分子機(jī)制;MAL基因表達(dá)量有可能作為NSCLC對(duì)Gef敏感性的獨(dú)立預(yù)測(cè)指標(biāo)。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2549711