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慈姑淀粉分支酶SBE基因的克隆與表達分析

發(fā)布時間:2019-10-02 03:55
【摘要】:慈姑(Sagittaria sagittifolia L.)為澤瀉科慈姑屬水生蔬菜,原產(chǎn)于中國。淀粉是慈姑球莖的主要貯藏物質(zhì),由直鏈淀粉和支鏈淀粉組成,直鏈淀粉和支鏈淀粉的含量與比例影響著慈姑球莖的品質(zhì)。植物淀粉合成過程受ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose pyrophospho-rylase polypeptide,AGPase)淀粉合成酶(Starch synthase,SS)和淀粉分支酶(Starch branching enzyme,SBE)調(diào)控,其中SBE在支鏈淀粉合成過程中起著關(guān)鍵作用。論文以慈姑‘慈玉’品種為材料,克隆到慈姑SBEI和SBEII基因的全長cDNA序列、基因組DNA序列,并對SBE基因的表達特性進行了分析。主要結(jié)果如下:1、以慈姑幼嫩葉片總RNA為模板,采用RACE-PCR技術(shù),克隆到慈姑SBEI和SBEII的cDNA序列。慈姑SBEI cDNA序列長為2950 bp,開放閱讀框(Open reading fragment,ORF)長2484 bp,編碼828個氨基酸,編碼蛋白的分子量為94.4kDa, C-末端包含104個氨基酸殘基,N-末端包含95個氨基酸殘基;慈姑SBEII cDNA序列全長為2833 bp, ORF長2223 bp,編碼740個氨基酸,編碼蛋白的分子量為85.3 kDa,N-末端和C-末端均包含94個氨基酸殘基。慈姑SBEI和SBEII cDNA序列同源性達51.89%,氨基酸同源性為49.64%。2、以慈姑幼嫩葉片為材料,提取慈姑總DNA,克隆得到長6038 bp的SBEI基因DNA序列,包括9個外顯子和8個內(nèi)含子,其中第1個內(nèi)含子最大,長1950bp,第8個內(nèi)含子最小,長73 bp,第4個外顯子最大,長908 bp,第1個外顯子最小,長71 bp;克隆得到長6623 bp的S BEII基因DNA序列,包括12個外顯子和11個內(nèi)含子,其中第2個內(nèi)含子最大,長994 bp,第3個內(nèi)含子最小,長81 bp,第6個外顯子最大,長495 bp,第11個外顯子最小,長76 bp。3、采用qPCR技術(shù)分析了慈姑SBEI和SBEII的表達特性。慈姑SBEI在不同組織中的表達規(guī)律為:球莖頂芽葉片匍匐莖,而SBEII在不同組織中的表達規(guī)律為:葉片頂芽匍匐莖球莖,葉柄和根系中表達量很低;在球莖膨大過程中SBEI表達量顯著高于SBEII,SBEII表達量始終保持較低水平,SBEI表達量呈先上升后下降,膨大前期表達量達最高,膨大后期最低;不同季節(jié)的膨大中后期球莖中SBEI表達量也高于SBEII,9月下旬~10月下旬,SBEI、SBEII表達量差異不明顯,11月以后球莖中SBEI的表達量緩慢上升,11月下旬球莖中SBEI表達量達最高。
【學(xué)位授予單位】:揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號】:S645.9

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本文編號:2544729

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