【摘要】：目的 SIRT2是組蛋白去乙酰化酶家族成員之一,其參與多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。本研究旨在探討SIRT2基因在人急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞NB4和耐藥細(xì)胞HL60/A增殖中的作用,分析SIRT2對于細(xì)胞周期的影響,尋找治療急性粒細(xì)胞白血病的新靶點。方法蛋白質(zhì)印跡法檢測SIRT2在急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞HL60/A和NB4中的表達(dá),針對SIRT2mRNA不同的靶序列設(shè)計并合成shRNA,構(gòu)建真核表達(dá)干擾載體,制備慢病毒并感染HL60/A和NB4細(xì)胞,用嘌呤霉素篩選出穩(wěn)定表達(dá)shRNA的細(xì)胞,應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法驗證干擾效率;采用改良MTT法檢測沉默SIRT2基因前后HL60/A和NB4細(xì)胞增殖的改變;用流式細(xì)胞術(shù)檢測沉默SIRT2基因前后細(xì)胞周期的變化。結(jié)果在HL60/A和NB4細(xì)胞中SIRT2蛋白表達(dá)水平均增高,F=43.22,P=0.002。用慢病毒感染HL60/A(F=184.9,P0.001)和NB4(F=354.7,P0.001)后,SIRT2基因的蛋白表達(dá)水平顯著降低。MTT結(jié)果顯示,與對照組細(xì)胞比較,48h沉默SIRT2基因的HL60/A(F=208.4,P0.001)和NB4(F=27.58,P0.001)細(xì)胞的生長速度變慢;于72h這種抑制作用更加明顯,其中HL60/A的增殖速度明顯變慢,F=555.9,P0.001。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期結(jié)果顯示,G_0~G_1期百分比,與對照組HL60/A/con(27.62±1.01)%相比,干擾組HL60/A/sh1(37.14±0.03)%(F=7.61,P0.001)和HL60/sh2(37.51±3.63)%(F=3.89,P=0.009)比例顯著增加;與對照組NB4/con(27.49±0.50)%相比,干擾組NB4/sh1(38.26±1.93)%(F=8.02,P=0.007)和NB4/sh2(35.23±1.11)%(F=3.50,P0.001)比例顯著增加;S期細(xì)胞百分比,與對照組HL60/A/con(51.94±1.15)%相比,干擾組HL60/A/sh1(40.24±0.66)%(F=3.34,P0.001)和HL60/sh2(42.73±2.76)%(F=10.33,P=0.004)比例顯著降低;與對照組NB4/con(50.65±0.23)%相比,干擾組NB4/sh1(39.58±1.11)%(F=3.02,P0.001)和NB4/sh2(43.82±1.33)%(F=10.42,P=0.011)比例顯著降低;G2~M期細(xì)胞比例無明顯變化。結(jié)論干擾SIRT2基因的表達(dá)可使細(xì)胞周期阻滯在G_0~G_1期,從而抑制急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞HL60/A和NB4的增殖。
【圖文】：

速度顯著降低（圖３）。兩種細(xì)胞的結(jié)果一致，證明沉默ＳＩＲＴ２能夠抑制ＨＬ６０／Ａ和ＮＢ４細(xì)胞的增殖能力。該結(jié)果提示我們ＳＩＲＴ２是ＨＬ６０／Ａ和ＮＢ４細(xì)胞增殖調(diào)控的關(guān)鍵因子，，可能是維持急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞生長的關(guān)鍵因素。圖１蛋白質(zhì)印跡法檢測ＳＩＲＴ２在白血病細(xì)胞系中蛋白的表達(dá)水平２．４流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期變化細(xì)胞周期結(jié)果顯示，當(dāng)ＨＬ６０／Ａ和ＮＢ４細(xì)胞內(nèi)ＳＩＲＴ２表達(dá)下調(diào)后，細(xì)胞周期進(jìn)程受到抑制，細(xì)胞周期被阻滯在Ｇ０～Ｇ１期（圖４）。單因素方差分析結(jié)果顯示，３組細(xì)胞ＨＬ６０／Ａ／ｃｏｎ、ＨＬ６０／Ａ／ｓｈ１和ＨＬ６０／Ａ／ｓｈ２Ｇ０～Ｇ１期（Ｆ＝２８．４６，Ｐ＝０．００４）和Ｓ期（Ｆ＝９９．３５，Ｐ＜０．００１）細(xì)胞數(shù)量百分比差異有統(tǒng)計學(xué)意義；３組細(xì)胞ＮＢ４／ｃｏｎ、ＮＢ４／ｓｈ１和ＮＢ４／ｓｈ２Ｇ０～Ｇ１期（Ｆ＝３７．５２，Ｐ＝０．００３）和Ｓ期（Ｆ＝１０２．０，Ｐ＜０．００１）細(xì)胞數(shù)量百分比差異有統(tǒng)計學(xué)意義。在ＨＬ６０／Ａ中沉默ＳＩＲＴ２后，ＨＬ６０／Ａ／ｓｈ１和ＨＬ６０／Ａ／ｓｈ２細(xì)胞Ｇ０～Ｇ１期細(xì)胞比例由（２７．６２±１．０１）％分別上升到（３７．１４±０．０３）％（Ｆ＝７．６１，Ｐ＜０．００１）和（３７．５１±３．６３）％（Ｆ＝３．８９，Ｐ＝０．００９）；Ｓ期細(xì)胞比例由（５１．９４±１．１５）％分別下降到（４０．２４±０．６６）％（Ｆ＝３．３４，Ｐ＜０．００１）和

／Ａ和ＮＢ４的細(xì)胞周期進(jìn)程，將細(xì)胞周期阻滯在Ｇ０～Ｇ１期，這可能是細(xì)胞生長變慢的主要原因。注：Ａ．ｓｈＲＮＡ干擾前后，ＳＩＲＴ２在ＨＬ６０／Ａ細(xì)胞中蛋白表達(dá)水平比較；Ｂ．ｓｈＲＮＡ干擾前后，ＳＩＲＴ２在ＮＢ４細(xì)胞中蛋白表達(dá)水平比較圖２蛋白質(zhì)印跡法檢測沉默ＳＩＲＴ２基因后細(xì)胞中ＳＩＲＴ２的表達(dá)水平注：Ａ．沉默ＳＩＲＴ２先后ＨＬ６０／Ａ的增殖曲線；Ｂ．沉默ＳＩＲＴ２前后ＮＢ４的增殖曲線；與對照組相比，ａＰ＜０．０５；ｂＰ＜０．０１圖３ＭＴＴ法檢測沉默ＳＩＲＴ２對細(xì)胞增殖活性的影響３討論ＳＩＲＴ２屬于第３類組蛋白去乙酰化酶家族成員［７］，主要通過對靶分子的去乙酰化作用參與細(xì)胞周期、分化、遷移、炎癥反應(yīng)及新陳代謝等生物學(xué)過程［８－１１，１４－１５］。近年來研究發(fā)現(xiàn)，ＳＩＲＴ２還參與多種腫瘤·１４９中華腫瘤防治雜志·２０１６年２月第２３卷第３期ＣＨＩＮＪＣＡＮＣＥＲＰＲＥＶＴＲＥＡＴ，Ｆｅｂｒｕａｒｙ２０１６，Ｖｏｌ．２３Ｎｏ．３
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院·北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院血液學(xué)研究所血液病醫(yī)院實驗血液學(xué)國家重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81170510;81402432) 天津市自然科學(xué)基金(14JCZDJC34900)
【分類號】：R733.71

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本文編號：2539414