【摘要】：本研究利用RT-PCR技術(shù)克隆玉米體細(xì)胞胚胎發(fā)生關(guān)鍵基因Zm SERK(Gen Bank登錄號(hào):KJ0045-22),并構(gòu)建植物過(guò)表達(dá)載體p CAMBIA3301-Zm SERK和干擾載體P3301-UBI-Zm SERK(+)-intron-Zm SERK,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將過(guò)表達(dá)載體、干擾載體、空載體轉(zhuǎn)入供試品種的玉米體細(xì)胞胚胎中,得到陽(yáng)性植株,陽(yáng)性率分別為11.5%、12.5%、9.1%。隨后對(duì)陽(yáng)性植株進(jìn)行分子檢測(cè)和表達(dá)分析。
【圖文】：

瞻錐哉盞?9%左右。3301空載體陽(yáng)性植株與空白對(duì)照相比，，ZmSERK基因的表達(dá)量幾乎不變；過(guò)表達(dá)載體陽(yáng)性植株中，ZmSERK基因的表達(dá)量與空白對(duì)照相比略有升高，但幅度不大。2討論玉米轉(zhuǎn)基因最大問(wèn)題是轉(zhuǎn)化受體受基因型限制很大。許多玉米基因型即使獲得了胚性愈傷組織，大部分是通過(guò)器官發(fā)生途徑再生成苗(Sujayetal.,2010)，器官發(fā)生再生植株一般要經(jīng)過(guò)脫分化和再分化過(guò)程，不僅誘導(dǎo)分化率、成苗率低，而且芽和根要分別在不同條件下誘導(dǎo)，因而時(shí)間較長(zhǎng)。而一直以來(lái)玉米遺傳轉(zhuǎn)化受體A188、Hi-Ⅱ、H99等，誘導(dǎo)形成的胚圖1陽(yáng)性植株Bar基因PCR檢測(cè)注:M:DL2000marker;P:陽(yáng)性對(duì)照(pCAMBIA3301質(zhì)粒);W:陰性對(duì)照(水);1:過(guò)表達(dá)載體陽(yáng)性植株;2:3301空載體陽(yáng)性植株;3:干擾載體陽(yáng)性植株Figure1PCRdetectionofbargeneinpositiveplantsNote:M:DL2000marker;P:Positivecontrol(TheplasmidofpCAMBIA3301-ZmSERK);W:Control(H2O);1:Over-expressionvectorpositiveplants;2:pCAMBIA3301vectorpositiveplants;3:Interferencevectorpositiveplants圖2PCR-Southern檢測(cè)注:CK+:陽(yáng)性對(duì)照:N:陰性對(duì)照:1~9:陽(yáng)性植株Figure2DetectionofPCR-southernNote:CK+:Positivecontrol;N:Negativecontrol;1~9:Positiveplants圖3ZmSERK基因轉(zhuǎn)基因植株中的相對(duì)表達(dá)量注:A:空白對(duì)照;B:干擾載體陽(yáng)性植株;C:3301空載體陽(yáng)性植株;D:過(guò)表達(dá)載體陽(yáng)性植株Figure3TherelativeexpressionoftheZmSERKgeneintrans-genicplantNote:A:Blankcontrol;B:Interferencevectorofpositiveplants;C:pCAMBIA3301blankvectorofpositiveplants;D:Over-ex-pressionvectorofpositiveplants3504

?在不同條件下誘導(dǎo)，因而時(shí)間較長(zhǎng)。而一直以來(lái)玉米遺傳轉(zhuǎn)化受體A188、Hi-Ⅱ、H99等，誘導(dǎo)形成的胚圖1陽(yáng)性植株Bar基因PCR檢測(cè)注:M:DL2000marker;P:陽(yáng)性對(duì)照(pCAMBIA3301質(zhì)粒);W:陰性對(duì)照(水);1:過(guò)表達(dá)載體陽(yáng)性植株;2:3301空載體陽(yáng)性植株;3:干擾載體陽(yáng)性植株Figure1PCRdetectionofbargeneinpositiveplantsNote:M:DL2000marker;P:Positivecontrol(TheplasmidofpCAMBIA3301-ZmSERK);W:Control(H2O);1:Over-expressionvectorpositiveplants;2:pCAMBIA3301vectorpositiveplants;3:Interferencevectorpositiveplants圖2PCR-Southern檢測(cè)注:CK+:陽(yáng)性對(duì)照:N:陰性對(duì)照:1~9:陽(yáng)性植株Figure2DetectionofPCR-southernNote:CK+:Positivecontrol;N:Negativecontrol;1~9:Positiveplants圖3ZmSERK基因轉(zhuǎn)基因植株中的相對(duì)表達(dá)量注:A:空白對(duì)照;B:干擾載體陽(yáng)性植株;C:3301空載體陽(yáng)性植株;D:過(guò)表達(dá)載體陽(yáng)性植株Figure3TherelativeexpressionoftheZmSERKgeneintrans-genicplantNote:A:Blankcontrol;B:Interferencevectorofpositiveplants;C:pCAMBIA3301blankvectorofpositiveplants;D:Over-ex-pressionvectorofpositiveplants3504
【作者單位】： 吉林大學(xué)植物科學(xué)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項(xiàng)(2014ZX0800305B) 吉林省科技廳抗冷抗旱轉(zhuǎn)基因玉米新種質(zhì)創(chuàng)制與新組合培育(20160203005NY)共同資助
【分類號(hào)】：Q943.2;S513


本文編號(hào)：2538194