【摘要】：‘無籽甌柑’的雄性不育主要表現(xiàn)為花粉敗育,起始于小孢子母細(xì)胞減數(shù)分裂時(shí)期。本研究克隆了‘無籽甌柑’減數(shù)分裂相關(guān)基因Cs RAD51,并采用熒光定量PCR檢測(cè)其在甌柑及‘無籽甌柑’中的表達(dá)差異。結(jié)果顯示,Cs RAD51基因的c DNA全長(zhǎng)1210 bp,含有一個(gè)1029 bp的ORF區(qū);其編碼的蛋白質(zhì)屬于疏水性蛋白,分子量45740.1D,氨基酸數(shù)388,原子總數(shù)6 555,等電點(diǎn)10.20。同源性比對(duì)發(fā)現(xiàn),‘無籽甌柑’Cs RAD51的氨基酸序列與甜橙、麻瘋樹、油棕、黃瓜、黑楊等的RAD51蛋白高度同源,分別達(dá)99%,98%,98%,98%,98%。RT-PCR結(jié)果顯示‘無籽甌柑’Cs RAD51在小孢子母細(xì)胞、四分體以及單核花粉粒時(shí)期的相對(duì)表達(dá)量顯著高于甌柑。Cs RAD51的過量表達(dá)可能影響了DSBs的同源重組修復(fù),致使‘無籽甌柑’小孢子母細(xì)胞時(shí)期減數(shù)分裂異常。
【圖文】：

錄組測(cè)序結(jié)得到目的條帶Cl2法制備大腸眩將陽(yáng)性克液進(jìn)行PCR檢息學(xué)分析通cDNA全長(zhǎng)在物種的氨基酸建不同物種間在線工具進(jìn)行等理化性質(zhì)；D51克隆與序列00bp的特異性篩選陽(yáng)性克隆一個(gè)1029bp的兩次重復(fù)性PCR檢甌柑’CsRAD否可用。以Ac使用的定量?jī)x器57℃，30s，Livak）方法計(jì)D51基因在甌表1Table1CAAGAT結(jié)果，以‘無籽后的PCR產(chǎn)腸桿菌（DH5克隆菌挑入裝有檢測(cè)，將檢測(cè)無通過NCBI上的在NCBI和Ph序列，，利用間的系統(tǒng)進(jìn)化行基因序列編用SOPMA分列分析以性條帶（圖1菌，送往生工ORF區(qū)，編檢測(cè)，1和2，3圖1FigureD51基因的克ctin基因?yàn)閮?nèi)器為CFX96T39個(gè)循環(huán)；計(jì)算基因的相甌柑和‘無籽甌克隆和RT-PCCloningandRT-PForward（5AGCCATTCCCCGAAGCTGAAAGTCTGCTGGAAG籽甌柑’cDNA產(chǎn)物進(jìn)行回收5α）感受態(tài)，有1mLLB培無誤的陽(yáng)性克的ORFFindehytozomev12DNAMAN7化樹。碼的蛋白質(zhì)分分析預(yù)測(cè)蛋白‘無籽甌柑’c）。PCR產(chǎn)物工生物工程（編碼342個(gè)氨和4分別是同一引物檢測(cè)電1Resultofprim克隆及在花粉發(fā)內(nèi)參（表1），TMReal-Time65~95℃，相對(duì)表達(dá)量，利甌柑’不同發(fā)R引物PCRprimer’－3’）CTTTACTAGATGCGGGTGGTGCTGAGA為模板，利收和純化，并然后通過化培養(yǎng)液的離心克隆菌液送往er工具查找所2.0數(shù)據(jù)庫(kù)上進(jìn).0進(jìn)行氨基分析預(yù)測(cè)；用P白質(zhì)的二級(jí)結(jié)cDNA為模板物經(jīng)回收純化上海）股份有氨基酸（圖2）一對(duì)引物的2次重電泳結(jié)果merdetection發(fā)育過程中的進(jìn)行CsRADePCRDetecti隔5s上升0利用SPSS16發(fā)育時(shí)期花藥GCATGATGCCAA利用克隆引物并將回收產(chǎn)物化學(xué)方法將連接心管中，在

4浙江林業(yè)科技37卷圖2CsRAD51基因的核苷酸序列及所編碼的氨基酸序列Figure2NucleotidesequenceofCsRAD51andthecorrespondingaminoacidsequence使用在線工具ProtParam分析蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)，CsRAD51基因編碼蛋白質(zhì)分子量為45740.1，氨基酸數(shù)為388，原子總數(shù)為6555，等電點(diǎn)為10.20；所有氨基酸組成中亮氨酸（Leu）所占比例最高，為18.8%，其次為絲氨酸（Ser），所占比例為10.1%；總的帶負(fù)電荷殘基Asp和Glu為27個(gè)，總的帶正電荷殘基Arg和Lys為60個(gè)；蛋白質(zhì)不穩(wěn)定指數(shù)為51.45%，這種分類的蛋白質(zhì)是不穩(wěn)定的。用ProtScale工具分析蛋白的疏水性和親水性，總平均親水性（Grandaverageofhydropathicity）為-0.150，第247位異亮氨酸（Ile）親水性最強(qiáng)（Score：3.400），第42位和第43位天冬酰胺（Asn）疏水性最強(qiáng)（Score：-3.267），蛋白的疏水區(qū)明顯多于親水區(qū)，表明‘無籽甌柑’CsRAD51基因編碼的蛋白質(zhì)是一種疏水性蛋白（圖3）。用SOPMA方法對(duì)CsRAD51基因編碼的蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行預(yù)測(cè)，其結(jié)構(gòu)主要以α螺旋（50.26%）和無規(guī)則卷曲（22.94%）為主，此外還有β片層（17.01%）和未知區(qū)域（9.79%）（圖4）。圖3CsRAD51基因編碼蛋白疏水性和親水性分析Figure3AnalysisofhydrophobicityandhydrophilicityofproteinencodedbyCsRAD51位置值數(shù)用戶序列疏水性分析結(jié)果
【作者單位】： 浙江農(nóng)林大學(xué)省部共建亞熱帶森林培育國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：浙江省大學(xué)生科技創(chuàng)新活動(dòng)計(jì)劃項(xiàng)目(2016R412003) 國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31000897) 浙江省團(tuán)隊(duì)科技特派員服務(wù)計(jì)劃項(xiàng)目(浙科發(fā)農(nóng)[2013]215-122)
【分類號(hào)】：S666.1

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2537046