【摘要】：[目的]開花基因FT是開花通路下游關(guān)鍵基因。本文旨在研究不結(jié)球白菜BcFT的亞細胞定位及互作蛋白的篩選,深入了解不結(jié)球白菜BcFT的功能及其調(diào)控機制。[方法]構(gòu)建亞細胞定位載體p EZS-NL-BcFT,利用亞細胞定位技術(shù)研究BcFT的空間表達。通過酵母雙雜交技術(shù)篩選與BcFT互作的蛋白,構(gòu)建酵母雙雜交誘餌載體p GBKT7-BcFT,轉(zhuǎn)化酵母Y2H Gold菌株,驗證自激活性和自毒性。對不結(jié)球白菜酵母雙雜交c DNA文庫進行篩選,得到與BcFT互作的片段,并根據(jù)基因片段進行比對,以不結(jié)球白菜c DNA為模板進行基因全長克隆,構(gòu)建p GADT7載體,進行共轉(zhuǎn)化驗證,最后對篩選得到的2個蛋白進行生物信息學(xué)分析。[結(jié)果]BcFT蛋白在整個細胞中均有分布。誘餌載體p GBKT7-BcFT表達產(chǎn)物對酵母細胞無自激活性和自毒性,通過酵母雙雜交及共轉(zhuǎn)驗證得到2個與BcFT互作的蛋白:Bc PPD5和Bc VHA-E1。生物信息學(xué)分析預(yù)測這2個蛋白均為親水性蛋白,不含信號肽,Bc PPD5蛋白的氨基酸序列存在1個跨膜區(qū),二級結(jié)構(gòu)中不規(guī)則卷曲所占比例最大,第163和296氨基酸殘基之間存在1個Psb P結(jié)構(gòu)域;Bc VHA-E1蛋白無跨膜區(qū),二級結(jié)構(gòu)中α螺旋所占比例最大,無特定結(jié)構(gòu)域。[結(jié)論]確定了BcFT蛋白在整個細胞中均有表達。利用酵母雙雜交技術(shù)篩選得到2個與BcFT互作蛋白,進一步分析發(fā)現(xiàn)其可能通過光周期路徑影響開花。
[Abstract]:[objective] flowering gene FT is the key gene downstream of flowering pathway. The purpose of this study was to study the subcellular localization of BcFT and the screening of interaction proteins in non-heading cabbage, and to understand the function and regulation mechanism of BcFT in non-heading cabbage. [methods] subcellular localization vector p EZS-NL-BcFT, was constructed to study the spatial expression of BcFT by subcellular localization technique. The protein interacting with BcFT was screened by yeast two-hybrid technique, and the yeast two-hybrid bait vector p GBKT7-BcFT, was constructed to transform yeast Y2H Gold strain, and the self-excited activity and autotoxicity were verified. The yeast two-hybrid c DNA library of non-heading cabbage was screened, and the fragments interacting with BcFT were obtained and compared according to the gene fragments. The full-length gene was cloned from non-heading cabbage c DNA as template, the p-GADT7 vector was constructed and verified by co-transformation. Finally, the two proteins were analyzed by bioinformatics. [results] BcFT protein was distributed in the whole cell. The bait vector p GBKT7-BcFT expression product has no self-excited activity and autotoxicity to yeast cells. Two proteins interacting with BcFT, Bc PPD5 and Bc VHA-E1., were obtained by yeast two-hybrid and co-transfer. Bioinformatics analysis predicted that the two proteins were hydrophilic and did not contain signal peptides. There was a transmembrane region in the amino acid sequence of Bc PPD5 protein, the proportion of irregular curl was the largest in the secondary structure, and there was a Psb P domain between 163 and 296 amino acid residues. Bc VHA-E1 protein had no transmembrane region, the proportion of 偽 helix in the secondary structure was the largest, and there was no specific domain. [conclusion] the expression of BcFT protein was confirmed in the whole cell. Two proteins interacting with BcFT were screened by yeast two-hybrid technique, and further analysis showed that they might affect flowering through photoperiod pathway.
【作者單位】： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)作物遺傳與種質(zhì)創(chuàng)新國家重點實驗室/農(nóng)業(yè)部華東地區(qū)園藝作物生物學(xué)與種質(zhì)創(chuàng)新重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(31301782) 江蘇省自然科學(xué)基金青年基金項目(BK20130673) 中國博士后科學(xué)基金項目(2014M550294);中國博士后科學(xué)基金項目(2015T80561)
【分類號】：S634.3

【參考文獻】

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本文編號：2502030